液質聯用快速檢測保健酒中4種非法添加物質

黃霞

宜賓市敘州區食品檢驗檢測中心（宜賓 644699）

在國家標準GB/T 17204—2008[1]《飲料酒分類》中，保健酒屬于配制酒（露酒），英文名字為blended alcoholic beverage類，其定義為：以發酵酒、蒸餾酒或食用酒精為酒基，加入可食用或藥食兩用的輔料或食品添加劑，進行調配、混合或再加工制成的，已改變了其原酒基風格的飲料酒。保健酒包括植物類配制酒、動物類配制酒、動植物類配制酒及其他類配制酒4大類。保健酒在中國的歷史源遠流長，具有調節機體的功能，以達到滋補養生、強身健體的作用[2]。它適用于特定人群食用，并不以治療為目的，根據其功能，可分為補氣、補血、滋陰、補陽和氣血雙補等類型，同時它必須具備有三種屬性：即食品屬性、功能屬性、具有特定的功能、非藥品屬性[3]。一些不法商家為了吸引消費者以謀取暴利，隨意添加短期內見效快、副作用大的化學藥物，而且非法添加的藥物劑量隨意[4-5]，為消費者的健康埋下了隱患[6-10]。有關監管部門也投入了大量人力、物力打擊非法添加的行為，但還是屢禁不止[11-14]，使通常起效慢的中藥和保健食品似乎具備了速效、高效的優點[15]。所以在監管中采用高效、快速、準確的檢測方法對這些非法添加的藥物進行準確定性定量，以此作為這些非法活動的有力證據，對此類違法行為進行打擊。此次研究就是采用液質聯用的方法同時檢測保健酒中的4種非法添加物質。

高效液相色譜（HPLC）是以液體作為流動相，并采用顆粒極細的高效固定相的柱色譜分離技術。高效液相的適用性廣，不受分析對象揮發性和熱穩定性的限制，因此應用范圍廣。近年來高效液相色譜法在藥物分析中占主要地位，據《美國藥典》22版記載，HPLC在含量測定方法中位居第一。

質譜（MS）是強有力的結構解析工具，能夠為結構定性提供較多的信息，是理想的色譜檢測器，不僅特異，而且具有極高的檢測靈敏度。串聯質譜法是質量分離的質譜檢測技術，在單級質譜給出化合物相對分子量的信息后，對準分子離子進行多級裂解，進而獲得豐富的化合物碎片信息，確認目標化合物，對目標化合物定量[15-17]。

液質聯用即高效液相色譜串聯質譜聯用技術（highperformance liquid chromatography-mass spectrome-try，HPLC-MS/MS），它將液相色譜和質譜連接，把色譜的分離能力與高分辨質譜的高選擇性、高靈敏度和高定性能力相結合，適合復雜成分、痕量物質的分析，并能提供分子量和結構信息。

近年來三重四級桿質譜在食品安全分析中得到了廣泛的應用，它通常采用多反應監測（multiple reaction monitoring，MRM）模式，通過選擇母離子，優化碰撞能量、去簇電壓等質譜條件，用子離子進行定量和定性分析。在食品添加劑、農藥殘留、獸藥殘留、工業染料等非法添加物的檢測中得到了廣泛的應用。

近年來，一些不法商人為牟取暴利，在中成藥、保健品和食品中非法添加化學藥物，患者在不知情的情況下大量服用，可能造成嚴重的不良反應，嚴重威脅到人類健康。液質聯用技術以其靈敏度高的優點，越來越多地應用到非法添加藥物成分的鑒別中，成為打假治劣的一把利劍[18-22]。

1 材料與試劑

1.1 材料與試劑

阿司匹林（批號：100113-201405，含量99.8%，中檢院）；雙氯芬酸鈉（批號：100334-200302，中檢院）；布洛芬（批號：100179-201406，含量99.5%，中檢院）；吲哚美辛（批號：100258-200904，含量99.9%，中檢院）；甲醇（色譜純，山東大禹）；水為實驗室自制超純水；待測樣品為市售隨機購買。

1.2 儀器與設備

LC-MS/MS液質聯用儀[AB 4500Qtrap，日本島津；液相色譜LC-20AT，電噴霧離子源（ESI）]；十萬分之一電子天平（瑞士梅特勒公司）。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

ODS-3 C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流速0.8 mL/min；流動相為10 mmol/L乙酸銨水溶液（A）和乙腈（B），梯度洗脫：0～4 min，20%～95%B；4～7 min，95% B；7.1～10 min；20% B。柱溫：35℃；進樣量：5 μL。

1.3.2 質譜條件

質譜配電噴霧離子源（ESI）；負離子模式；氣簾氣（CUR）35 psi；離子化電壓（IS）4 500 V；離子源溫度（TEM）550 ℃；噴霧氣（GS1）60 psi；輔助加熱氣（GS2）70 psi，碰撞氣（CAD）Medium。掃描方式為選擇離子掃描（MRM）。

1.3.3 對照品溶液的配置

分別精密稱取各對照品5 mg左右于50 mL容量瓶中，加50%甲醇水溶解并定容至刻度線，再分別精密吸取0.1 mL于同一100 mL容量瓶中，50%甲醇水溶解并定容至刻度，得到質量濃度約為100 ng/mL的混合對照品溶液。

1.3.4 供試品溶液的制備

精密吸取保健酒25 mL于50 mL容量瓶中，50%甲醇水定容至刻度，搖勻，過0.22 μm有機系濾膜，即得，上液質檢測。

1.3.5 質譜特征

取混合對照品溶液，按2.1小節色譜條件，2.2小節質譜條件檢測。部分化學成分不能達到完全分離，但因各待測成分的離子碎片不同，通過質譜的高靈敏和高選擇測定，不會造成相互間的干擾。4種化合物的質譜參數見表1。

表1 四種待測組分信息

2 結果與分析

2.1 質譜條件的優化

2.1.1 母離子

Q1SCAN全掃，確定母離子的質荷比，根據這四種待測組分的化合物性質，選擇離子源為電噴霧離子源（ESI），負離子模式掃描，掃描范圍為分子量的正負50，掃描時間為2 min，在確定不是干擾離子的情況下選擇響應值最高的質荷比，準確到小數點后一位。得到待測組分的母離子。

2.1.2 找到對應母離子的子離子

選擇采集方法為MS2，采集模式和母離子一致，將去簇電壓（DP）從20開始采集，依次增加到母離子的響應值強度為圖片最高峰響應值的1/4左右。當總離子流圖（TIC）平滑后，選擇響應值最高的子離子。

2.1.3 優化去簇電壓（DP）和碰撞能量（CE）

優化母離子的去簇電壓（DP）和子離子的碰撞能量（CE），將DP設置為60，掃描5～180范圍內的碰撞能量（CE），選擇響應值最高的CE值（具體值見表1），確定CE值以后將DP范圍設置為5～300掃描，得到響應值最高的DP值（具體值見表1）。建立MRM方法。

2.2 流動相的選擇

試驗待測組分布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛和阿司匹林是酸性化合物，所有待測成分在反相色譜中均能有效保留且在質譜電離時帶負電，選擇普通的C18色譜柱就能很好地滿足檢測需要。同時因為是負離子檢測模式，故使用能促進電離的乙酸銨水溶液，能達到更高的響應值。

此方法通過優化4種待測組分的流動相，找到4種待測組分的母離子、子離子及最佳的去簇電壓（DP）及碰撞能量（CE），能簡單快速準確地檢測出保健酒中的此4種非法添加。真正實現了快速、簡便、準確的目的。目前液質聯用在很多地方還不是很普及，所以因為儀器受限，只能在有這種儀器的實驗室進行，未來隨著此種儀器的普及，將會更加容易推廣此種方法。

2.3 樣品測定

按1.3.4小節制備供試品溶液，在上述色譜和質譜條件下，共測21批樣品，全部為保健酒，其中一批檢測出阿司匹林。標準品定量離子色譜圖見圖1～圖4。阿司匹林陽性樣品定量離子色譜圖見圖5～圖8。

圖1 布洛芬標準品定量離子色譜圖

圖2 雙氯芬酸鈉標準品定量離子色譜圖

圖3 吲哚美辛標準品定量離子色譜圖

圖4 阿司匹林標準品定量離子色譜圖

圖5 布洛芬樣品定量離子色譜圖

圖6 雙氯芬酸鈉樣品定量離子色譜圖

圖7 吲哚美辛樣品定量離子色譜圖

圖8 陽性（阿司匹林）樣品定量離子色譜圖

因為保健酒基體復雜，用液相檢測時，通常雜質較多，不易分開，導致假陽性，或目標峰和雜峰分不開，而無法準確定量。同時非法添加的化學藥品含量極低，通常為痕量級別，液相的檢出限太高，導致痕量的非法添加無法檢出。文章采用液質聯用的方法，以母離子、子離子、離子響應值比率及出峰時間來準確定性，以響應值高的子離子碎片準確定量。可以快速、準確地獲得高質量、高分辨率和高靈敏度的多級質譜信息，準確快速地驗證非法添加的化學成分，對供試品進行結果確證，提高檢測的專屬性。