暈寧顆粒的質量標準提高研究

鄭宗江 趙 穎

南京市中醫院藥學部，江蘇南京 210022

醫院制劑是臨床用藥的重要組成部分，其在保障患者健康、滿足醫院科研需要及彌補市場藥物供給不足等方面發揮著重要的作用[1-3]。醫院制劑的發展有著悠久歷史，在此期間，其監管制度不斷完善[4-5]。自2005年以來，國家加強對醫院制劑的監管，導致一些醫院制劑由于嚴格的申請注冊標準等原因而萎縮。2017年公布的《中醫藥法》，國家高度重視醫院制劑的研發和應用，因此，醫院制劑又迎來了新的機遇[6]。目前，醫院制劑存在不足之處，如醫院制劑的質量控制系統尚不完善，部分醫院制劑缺乏科學、合理的質量控制體系。因此，建立科學、合理的質量標準，才能更好地造福更多患者[7-9]。暈寧顆粒是南京市中醫院自制制劑，該方由制何首烏、芍藥、丹參、陳皮、白術等十味藥組成，具有補益肝腎，熄風化痰，和中止嘔的作用。本研究在該制劑原有的質量標準基礎上，開展了質量標準提高研究。

1 材料

1.1 儀器

安捷倫1260 infinityⅡ高效液相色譜儀（安捷倫公司）；KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AL104型電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；labtower edi15純化水系統（aglilent technologies公司）。

1.2 試藥

芍藥苷對照品（批號：110736-201842），由中國藥品鑒定研究院提供，含量以97.4%計。暈寧顆粒樣品（批號：180710、180209、170512）及陰性對照品（缺白芍）。

2 含量測定

2.1 色譜條件的選擇

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（250 mm×4.6 mm，粒度：5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）；檢測波長：260 nm；進樣量：10 μl；柱溫：30℃；流速：1.0 ml/min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷2.90 mg（含量以97.4%計）至5 ml的量瓶，加甲醇定容，制成芍藥苷濃度為0.58 mg/ml的溶液，作為芍藥苷對照品儲備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取暈寧顆粒，研細，稱定3 g，放入具塞錐形瓶內，倒入70%甲醇25 ml，稱量后，放入超聲機30 min，冷卻，再稱量，倒入70%甲醇補足缺失的重量，搖勻后，過濾即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 取相當于0.3 g白芍的陰性制劑，制備處理同供試品溶液[10-11]。

2.3 系統適用性試驗

采用不同的流動相比例進行分離。流動相1：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（12∶88）；流動相2：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（13∶87）；流動相3：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（14∶86），結果顯示，以流動相2分離效果最佳。見圖1～3。

圖1 乙腈∶0.1磷酸水溶液（12∶88）

圖2 乙腈∶0.1磷酸水溶液（13∶87）

圖3 乙腈∶0.1磷酸水溶液（14∶86）

2.4 專屬性試驗

分別取芍藥苷對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，搖勻，按照上述色譜條件，進樣10 μl，測定。結果顯示，陰性樣品溶液在與芍藥苷對照品溶液相同的保留時間位置處，無干擾。見圖4～6。

圖4 芍藥苷色譜圖

圖5 暈寧顆粒樣品圖

圖6 暈寧顆粒陰性色譜圖

2.5 標準曲線的制備

精 密吸取上述對照品液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 ml，加入至2 ml容量瓶中，加甲醇定容，得系列芍藥苷對照品溶液，其中芍藥苷濃度分別為28.25、56.50、84.75、113.00、141.25 μg/ml。分別精密吸取上述5種濃度的對照品溶液各10 μl，注入液相色譜儀中，平行進2針，同上色譜條件，以平均峰面積均值（Y）為縱坐標，進樣濃度（X）為橫坐標，得到回歸方程，繪制標準曲線?；貧w方程為Y=8.8963X+68.9700、相關系數r=0.9999；芍藥苷在28.25～141.25 μg/ml范圍線性關系良好。見圖7。

圖7 芍藥苷的線性關系圖

2.6 精密度試驗

精確吸取芍藥苷對照品溶液，連續進樣6次，記錄其峰面積測量值，RSD值為0.53%，提示儀器的精密度試驗良好。

2.7 重復性試驗

取同一批號（170512）的樣品6份，按照上述方法測定供試品中芍藥苷的含量，計算平均含量，RSD值為0.63%，提示樣品的重復性試驗良好。

2.8 穩定性試驗

按照上述方法，并每隔2 h測定一次峰面積，直至10 h，RSD值為0.95%。提示芍藥苷在10 h內基本穩定。

2.9 加樣回收率試驗

稱量含芍藥苷總量為0.8137 mg/g的顆粒1.5 g，精確稱量后，放入具塞錐形瓶中，平行處理6份。精密加入濃度為1.1570 mg/ml芍藥苷對照品溶液1 ml，倒入70%甲醇約25 ml，稱重后，放入超聲機，超聲30 min，取出放涼，再次稱重后，倒入70%甲醇補足缺失的重量，搖勻后，過濾，即得。色譜條件同前，進樣量10 μl。測定其芍藥苷含量，結果顯示，本法的加樣回收率試驗良好，加樣回收率符合要求。見表1。

表1 加樣回收試驗結果

2.10 樣品測定及含量限度的確定

依照含量測定法，測定了三批不同樣品中芍藥苷的含量。結合三批樣品的含量測定結果，取平均含量最低的180209批次來制訂芍藥苷的標準，暫定為本品芍藥苷含量不得少于0.355 mg/g。見表2。

表2 不同批次的樣品含量測定（mg/g）

3 討論

白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根[12]。白芍主要含有單萜及其苷類化合物、三萜類化合物、多酚類化合物、黃酮類化合物、多糖類化合物等，現代藥理研究顯示白芍具有抗炎、鎮痛、保肝、促進造血功能、抗血栓、抗腫瘤以及抗氧化等作用，被廣泛應用于臨床[13-14]。白芍中的萜類化合物主要為單萜，還有其糖苷類化合物和三萜類化合物。其中研究最為廣泛的是單萜及其糖苷類化合物。芍藥苷是發現最早的一種單萜苷、也是單萜類成分中含量最高的，大量研究證明芍藥苷具有抗抑郁、抗炎、鎮痛、抗腫瘤、保肝、保護神經、調節免疫、鎮靜催眠等多種藥理作用[15-16]。治療眩暈的方劑中，多數含有藥味白芍，諸如白芍天麻飲、葛根湯、防眩湯等[17-18]。本研究選芍藥苷作為質控檢測指標，在含量測定研究中，考察了甲醇-水、甲醇-甲酸水、乙腈-水、乙腈-磷酸水溶液，發現甲醇-水、甲醇-甲酸水，存在拖尾的情況，乙腈-水，基線不平穩。乙腈-磷酸水溶液條件良好，因此將乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）列入標準正文。