lncRNA NEAT1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平及其臨床意義分析

姜旭東，龐玉軍，曹艷菲，張麗娜

大慶油田總醫(yī)院檢驗(yàn)科，黑龍江大慶 163001

腦膠質(zhì)瘤是發(fā)生在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的顱內(nèi)腫瘤，該疾病也是目前臨床醫(yī)學(xué)中最為常見的原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤，針對(duì)現(xiàn)階段疾病主要以手術(shù)切除為主，同時(shí)配合放療化療，以此改善患者疾病癥狀。而不同級(jí)別的膠質(zhì)瘤患者疾病治療的存活時(shí)間不同，高級(jí)別膠質(zhì)瘤患者治療后存活時(shí)間1～2 年，低級(jí)別的膠質(zhì)瘤患者存活時(shí)間3～5 年[1]。長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸（longnon-coding RNA，lncRNA）屬于轉(zhuǎn)錄RNA，隨著臨床腦膠質(zhì)瘤研究發(fā)現(xiàn)lncRNA 具有較高的生物活性，在基因表達(dá)及核內(nèi)運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用。核富集轉(zhuǎn)錄體1（nuclear enriched abundant transcript 1，NEAT1）屬于基因位點(diǎn)，通過(guò)RNA 聚合酶進(jìn)行轉(zhuǎn)錄獲得[2-3]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)NEAT1 與臨床多種疾病發(fā)生存在關(guān)聯(lián)。選取2018 年8 月—2020年8月大慶油田總醫(yī)院獲取的62份人腦膠質(zhì)瘤樣本及正常人腦組織30 份，分析lncRNA NEAT1 表達(dá)水平進(jìn)行，同時(shí)為人腦膠質(zhì)瘤患者疾病預(yù)后提供重要技術(shù)支持。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取醫(yī)院獲取的62 份腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本，同時(shí)選取同期因顱腦手術(shù)切除獲得的正常腦組織30 份。30例正常腦組織樣本中年齡24～78 歲，平均（54.15±2.65）歲；62 例人腦膠質(zhì)瘤患者中男31 例，女31例；年齡39～78歲，平均（55.28±2.48）歲；WHO分級(jí)Ⅰ～Ⅱ級(jí)25 例，Ⅲ～Ⅳ級(jí)37 例，腫瘤直徑＞4 cm 22 例，腫瘤直徑≤4 cm40 例，單發(fā)腫瘤及多發(fā)腫瘤數(shù)量分別為35例、27例。所有參與研究的患者均進(jìn)行術(shù)后隨訪，隨訪方式以門診復(fù)診，電話隨訪等。隨訪截止時(shí)間為2021年12月。兩組患者年齡、性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。具有可比性。本研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批，通過(guò)審批后開展項(xiàng)目研究患者以及家屬均對(duì)研究知情，在知情同意書簽字。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合WHO（2007 年）神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②男女不限；③經(jīng)病理診斷確診；④未接受其他治療研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他腫瘤癌癥者；②凝血機(jī)制異常者；③存在傳染性疾病者；④存在嚴(yán)重腎臟，心臟等功能損傷者；⑤存在慢性疾病者。

1.3 方法

提取樣本中的RNA，同時(shí)使用PCR 檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行測(cè)NEAT1 水平檢測(cè)，檢測(cè)過(guò)程中采用Trizol法對(duì)總RNA 進(jìn)行獲得，在獲取RNA 過(guò)程中保證其吸光度值在1.9～2.0 階段，提取1 μl 總RNA，而后嚴(yán)格依據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒中相應(yīng)的試劑使用說(shuō)明進(jìn)行為cDNA 逆轉(zhuǎn)錄，完成這部分操作后，利用PCR 檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行NEAT1 水平檢測(cè)。將GAPDH作為參考基因，探針及引物系列為NEAT1 引物正向5'- TGGCTAGCTCAGGGCTTCAG-3'，反 向5'-TCTCCTTGCCAAGCTTCCTTC-3'；GAPDH 引物正向5'-TGTTGCCATCAATGACCCCTT-3'，反向5'-CTCCACGACGTACTCAGCG-3'。以2-△△Ct方 法 進(jìn) 行 計(jì)算，進(jìn)而獲得NEAT1表達(dá)情況。

1.4 觀察指標(biāo)

比較膠質(zhì)瘤患者和正常組織患者的lncRNA NEAT1 表達(dá)水平；分析腦膠質(zhì)瘤生存期的影響因素。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料樣本符合正態(tài)分布，采用（±s）表示，組間比較進(jìn)行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用[n(%)]表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同lncRNA NEAT1 表達(dá)水平的膠質(zhì)瘤患者臨床特征比較

62例腦膠質(zhì)瘤患者中l(wèi)ncRNA NEAT1高表達(dá)35例，占比56.45%，低表達(dá)患者27 例，占比43.55%，見表1。且腦膠質(zhì)瘤中l(wèi)ncRNA NEAT1 表達(dá)水平（0.64±0.17）ng/μl，而正常組織中l(wèi)ncRNA NEAT1 表達(dá)（0.10±0.08）ng/μl，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=16.564，P＜0.05）。

表1 不同lncRNA NEAT1表達(dá)水平的膠質(zhì)瘤患者臨床特征比較[n(%)]

2.2 人腦膠質(zhì)瘤患者無(wú)進(jìn)展生存期影響因素Cox回歸分析

經(jīng)過(guò)多因素Cox 比例回歸分析發(fā)現(xiàn)，患者年齡＞60 歲，且術(shù)前KPS 評(píng)分低于80 分，WHO 分級(jí)Ⅲ～Ⅳ級(jí)及l(fā)ncRNA NEAT1 表達(dá)水平高是腦膠質(zhì)瘤患者無(wú)進(jìn)展生存期及總生存期的獨(dú)立影響因素（P＜0.05），見表2、表3。

表2 人腦膠質(zhì)瘤無(wú)進(jìn)展生存期影響因素Cox回歸分析

表3 人腦膠質(zhì)瘤總生存期影響因素Cox回歸分析

3 討論

據(jù)現(xiàn)階段流行病學(xué)調(diào)查顯示，膠質(zhì)瘤發(fā)病年齡多處于20～50 歲之間，而且發(fā)病峰值以30～40 歲為主，通常情況下兒童會(huì)發(fā)生該疾病?；加心z質(zhì)瘤疾病逐漸增多且男性患病數(shù)量遠(yuǎn)高于女性，依據(jù)臨床發(fā)病情況數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示，膠質(zhì)瘤總體年發(fā)病率數(shù)據(jù)為3～8/10 萬(wàn)，而其中星形細(xì)胞瘤占比17.4%，室管膜瘤占比10.2%，髓母細(xì)胞瘤占比9.5%，少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤占比5.8%。疾病的發(fā)生嚴(yán)重影響了患者的身體健康，降低患者的生活質(zhì)量，而且該疾病治療過(guò)程中預(yù)后較差，且預(yù)后參考指標(biāo)較少，因此加強(qiáng)可預(yù)測(cè)膠質(zhì)瘤預(yù)后生物學(xué)指標(biāo)研究實(shí)現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤疾病預(yù)后有效性，是現(xiàn)階段臨床醫(yī)學(xué)工作者重點(diǎn)關(guān)注的問(wèn)題[5-6]。

lncRNA 屬于長(zhǎng)鏈非編碼RNA，相關(guān)學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)該物質(zhì)在劑量補(bǔ)償效應(yīng)，遺傳調(diào)控，細(xì)胞生長(zhǎng)周期及分化等各個(gè)階段均參與生命活動(dòng)，現(xiàn)階段臨床醫(yī)學(xué)生物學(xué)已經(jīng)對(duì)其進(jìn)行有效研究，發(fā)現(xiàn)其不具有蛋白質(zhì)編碼功能[7]。隨著近年來(lái)臨床醫(yī)學(xué)逐漸深入研究，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織內(nèi)部NEAT1 表達(dá)發(fā)生異常，而NEAT1 表達(dá)異常對(duì)腫瘤患者體內(nèi)的細(xì)胞增殖情況，分化情況及凋亡情況起到重要影響，與人腦膠質(zhì)瘤患者疾病治療預(yù)后有密切關(guān)聯(lián)[8]。王小剛等[8]在報(bào)道中發(fā)現(xiàn)人腦膠質(zhì)瘤組織的IMP3 和IGF2 的表達(dá)水平對(duì)于腦膠質(zhì)瘤患者疾病治療后3 年內(nèi)生存時(shí)間起到嚴(yán)重影響，這一研究結(jié)果的提出進(jìn)一步為lncRNA NEAT1 在人腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后生存研究奠定了基礎(chǔ)。嚴(yán)華等[9]在研究中發(fā)現(xiàn)lncRNA NEAT1 表達(dá)情況在胃癌中對(duì)于患者臨床病理參數(shù)及患者疾病預(yù)后有重要關(guān)聯(lián)。胃癌患者體內(nèi)lncRNA NEAT1 表達(dá)水平相較于正常人明顯增高，針對(duì)該種情況臨床研究中發(fā)現(xiàn)lncRNA NEAT1 表達(dá)的增高主要是由于EZH2靶基因參與細(xì)胞增殖，促進(jìn)了癌細(xì)胞的增殖分化，因此這些結(jié)果可以充分說(shuō)明NEAT1 物質(zhì)參與了多種腫瘤及癌癥的發(fā)生[10-12]。

本研究中主要利用定量逆轉(zhuǎn)錄PCR 技術(shù)對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者及正?；颊吣X組織的lncRNA NEAT1 表達(dá)情況進(jìn)行研究，通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，人腦膠質(zhì)瘤患者腦組織中該物質(zhì)的表達(dá)水平高于正常腦組織，依據(jù)WTO 進(jìn)行分級(jí)，發(fā)現(xiàn)高級(jí)別膠質(zhì)瘤中該物質(zhì)的表達(dá)水平明顯高于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況。62例腦膠質(zhì)瘤患者中l(wèi)ncRNA NEAT1 高表達(dá)35 例，占比56.45%，低表達(dá)患者27 例，占比43.55%，且人腦膠質(zhì)瘤中l(wèi)ncRNA NEAT1表達(dá)水平（0.64±0.17）ng/μl，而健康人腦組織中l(wèi)ncRNA NEAT1表達(dá)（0.10±0.08）ng/μl。李芳芳等[13]同樣在肝細(xì)胞癌中發(fā)現(xiàn)lncRNA NEAT1，而且由于lncRNA 具有較好的生物穩(wěn)定性，因此可以針對(duì)癌癥診斷提供重要指導(dǎo)作用[14]。lncRNA NEAT1 與肝癌患者的腫瘤分化情況及臨床特征情況存在重要關(guān)聯(lián)，因此利用lncRNA NEAT1 可以有效實(shí)現(xiàn)癌癥疾病的診斷，本研究結(jié)果同樣為此次研究數(shù)據(jù)奠定了有效基礎(chǔ)。而且本研究利用Cox 多比例回歸分析，發(fā)現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤患者年齡＞60 歲，且術(shù)前KPS 評(píng)分低于80 分，WHO 分級(jí)Ⅲ～Ⅳ級(jí)及l(fā)ncRNA NEAT1 表達(dá)水平高是腦膠質(zhì)瘤患者無(wú)進(jìn)展生存期及總生存期的獨(dú)立影響因素（P＜0.05），lncRNA NEAT1 表達(dá)水平越高，患者疾病預(yù)后越差。相關(guān)學(xué)者在研究中膠質(zhì)瘤組織lncRNA NEAT1 的表達(dá)水平（2.893±0.296）ng/μl，顯著高于正常人表達(dá)（1.000±0.297）ng/μl（P＜0.05）[15]，這一數(shù)據(jù)與本研究數(shù)據(jù)高度相似，這一結(jié)果表明lncRNA NEAT1 與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生及進(jìn)展存在密切關(guān)聯(lián)。

綜上所述，lncRNA NEAT1 表達(dá)水平的高低對(duì)于人腦膠質(zhì)瘤患者疾病預(yù)后有重要影響，高表達(dá)患者預(yù)后效果差，而且因素分析過(guò)程中發(fā)現(xiàn)術(shù)前KPS評(píng)分低于80 分，WHO 分級(jí)Ⅲ～Ⅳ級(jí)及l(fā)ncRNA NEAT1 表達(dá)水平高及年齡超過(guò)60 歲是導(dǎo)致患者危險(xiǎn)預(yù)后的重要獨(dú)立性因素，而lncRNA NEAT1 低表達(dá)，可實(shí)現(xiàn)患者術(shù)后生存時(shí)間延長(zhǎng)。因此針對(duì)人腦膠質(zhì)瘤臨床疾病預(yù)后觀察過(guò)程中可以將lncRNA NEAT1 表達(dá)情況作為生物學(xué)標(biāo)志指標(biāo)，為臨床人腦膠質(zhì)瘤患者疾病預(yù)后提供重要指導(dǎo)。