SPF種豬場通過冷凍精液方式引種試驗

楊 光，沈 君，方禮祿，麻文靜，李鵬亮，郭曉宇，嚴彩紅

（北京市SPF豬育種管理中心，北京 海淀 100089）

隨著國內養豬行業規模化、大型化、工廠化的發展，養豬企業的種豬育種和品種培育工作顯得十分重要，品種育種和培育工作是豬場提高生產水平、增加養殖經濟效益的關鍵。由于部分豬場核心群數量偏少，同時采用封閉式育種，遺傳基礎較窄，也喪失了引進優良基因的機會，從而導致近交增量過大和遺傳方差減少過快，使得其遺傳改良的速度相當緩慢[1]，所以種豬場之間應該開展優秀種豬資源交流和聯合育種，但是引進活體豬會受到地理位置和季節影響，同時也會導致養殖成本增加以及豬病不可控。隨著豬冷凍精液技術逐漸成熟，冷凍精液可以長期保存、遠距離運輸，可提前通過PCR等方法檢測，確保引進的凍精無特定病原體，使得冷凍精液更加安全可靠的同時促進優秀遺傳資源交流。2020年7月至2021年9月北京市SPF豬育種管理中心通過冷凍精液方式進行一次SPF豬引種工作，通過冷凍精液和常溫精液對比，來評估冷凍精液技術作為SPF豬引種方式的可行性。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 精液來源 冷凍精液采購于某公司英系大白細管冷凍精液，經檢測無特定病原體，細管規格0.25 mL，10支稀釋成1頭份，選用公豬血統4個，精子活力0.5以上。常溫精液為北京市SPF豬育種管理中心核心場提供，每頭份60 mL，精子活力0.8以上。

1.1.2 母豬及分群 在北京市SPF豬育種管理中心選取2～4胎英系大白斷奶母豬130頭，隨機分為2組，每組65個重復，每個重復1頭，對照組使用常溫精液，試驗組采用冷凍精液方式，所有母豬輸精方式全部采用子宮深部輸精。

1.1.3 儀器設備 儀器設備包括scA780-54fc全自動精子質量分析系統、顯微鏡、恒溫水浴鍋、50 L液氮罐、一次性豬深部輸精管、剪刀、長柄鑷子、潤滑劑等。

1.2 試驗方法

1.2.1 冷凍精液解凍與檢測 提前把精液稀釋室室溫調到26 ℃，將水浴鍋加溫到37 ℃，準備好精液稀釋液，把準備好的精液稀釋液放在水浴鍋里至少1 h，向輸精瓶里加60 mL預熱好的精液稀釋液；從液氮中取出1～2支冷凍精液，立即轉入37 ℃水浴鍋中解凍，37 ℃下解凍20 s，立即取出冷凍精液，用干凈面巾紙擦干冷凍精液管外部，搖動精液管將氣泡移至將要開口的棉花端，在棉花端剪開，放到37 ℃的裝好稀釋液輸精瓶里，再剪開精液管另一端，把精液吹入已經加溫到37 ℃的輸精瓶，獲得1頭份精液需要10支，把裝稀釋好精液輸精瓶放水浴鍋里20 min，對稀釋好的精液鏡檢，在預溫到35～38 ℃的玻璃片上鏡檢，通過全自動精子質量分析系統檢查其精液活力情況，配種精液活力不得低于0.5。

1.2.2 試情與輸精 試情過程要有公豬在現場，對母豬背部、耳根、腹側和乳腺等敏感部位進行觸摸、按壓和人員騎在母豬背部上，母豬會出現呆立不動的靜立反射，母豬陰門內流出一些黏性液體，即判斷母豬發情。母豬試情要在精液解凍前做完，保障凍精稀釋后及時給發情母豬配種，18 h后再用同樣方法給母豬再輸一次，30 h后母豬仍在發情再配第3次，一頭母豬發情期中的配種只能使用同一公豬的冷凍精液。參與試驗母豬飼養在同一圈舍，由專人飼養管理。

1.2.3 數據記錄與統計分析 記錄參與試驗母豬的耳號、品種、胎次和配種時間，以及所用精液的種類、公豬耳號和活力等數據。詳細記錄試驗母豬窩總產仔數、窩產活仔數和窩產死胎數。分娩率相關計算式：分娩率=分娩母豬頭數/配種母豬頭數×100%。采用Excel進行數據初步分析，用SPSS計算各指標的平均值和標準差，并對各指標進行差異顯著性檢驗。

2 結果與分析

由表1可知，試驗組母豬窩總產仔數和窩產活仔數分別比對照組低1.08頭（P＜0.01）和1.48頭（P＜0.01），降低幅度分別達10.7%和15.5%；但試驗組母豬窩產死胎數比對照組高0.38頭（P＜0.01），增加幅度達57.6%。試驗組母豬分娩率比對照組低10.77個百分點（P＜0.05）。

表1 不同精液對配種母豬分娩成績的影響

3 討論

本試驗中冷凍精液組窩總產仔數為（9.08±1.87）頭，窩產活仔數為（8.04±2.04）頭，窩產死胎數為（1.04±0.60）頭，分娩率為78.46%，與陳輝[2]、瞿文學等[3]研究結果基本相一致。和陳映等[4]、鄧雙義等[5]報道數據相比，本試驗母豬分娩率要高于其試驗中分娩率，但是窩總產仔數和窩產活仔數要低于其試驗數據。導致母豬分娩率、窩總產仔數和窩產活仔數不相同與冷凍精液來源不同、冷凍精液解凍程序不同、每頭份稀釋好精液中精子含量不一致以及豬的品種等有關之外，還有豬場內的配種管理方面的原因。比如發情鑒定，參與試情人員要認真負責，在公豬配合下，鑒定出發情明顯、穩定的母豬，不能采取強迫配種和過早或過晚配種。與常溫精液不同，冷凍精液配置好鏡檢合格后，應該迅速輸入發情母豬子宮內，因為解凍稀釋20 min后精子活率開始迅速降低[6]，所以最好解凍稀釋后在20 min內使用完。用冷凍精液配置好的精液必須現用現配，不能存放。在配種方式上最好選用子宮深部輸精，可以減少精子穿過子宮頸口的損失，加速精子到子宮獲能的時間，縮短精子與卵子結合的距離。通過孫志峰等[7]研究表明，采用冷凍精液深部輸精技術可以有效提高母豬的生產性能。

近幾年來，隨著國內外豬精液冷凍技術發展和深部輸精技術的推廣，大幅推動了養豬企業豬冷凍精液的廣泛應用。冷凍精液的優點是不受時間和地理位置差異的限制，可以促進豬場優秀種豬遺傳資源通過冷凍精液方式保留下來，并可以各場之間相互交流，有利于育種企業和科研單位進行豬遺傳資源聯合育種，進一步打破養豬育種行業“引種→維持→退化→再引種”怪圈[8]。由于非洲豬瘟的傳播使養豬行業把生物安全放在豬場生產管理的首位，豬場引種工作成了較大的難題。冷凍精液需要在-196 ℃的液氮中保存，部分病毒性傳染病的病毒無法在超低溫環境下生存[9]，通過建立疾病凈化豬場、SPF公豬站，制定冷凍精液檢測機制，可以杜絕在引入豬優質遺傳資源的同時也引進潛在的生物安全危險。

4 結論

本次試驗結果表明與常溫精液相比，采用冷凍精液方式配種沒有提高母豬繁育標準，但是根據本試驗和眾多關于冷凍精液試驗報道可知，冷凍精液技術達到或接近大多數豬場生產常溫精液配種繁育水平，豬冷凍精液技術顯著進步，可以在種豬場和繁育機構進行推廣。通過冷凍精液方式使北京市SPF豬育種管理中心母豬分娩了410頭仔豬，采血檢測鑒定無特定病原體，經過初步選育，102頭保育仔豬進入待選后備群，為豬場成功引入新的血統。