多配體聚糖結合蛋白在胃癌中的表達及臨床意義

譚秋芬 許芳怡 溫坤

胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，為了尋找胃癌的治療靶點、監測病情及預測預后，需開展大量的胃癌基礎研究，以期找到敏感、特異的分子標志物。多配體聚糖結合蛋白（Syndecan binding protein，SDCBP）又稱黑色素瘤分化相關蛋白-9（MDA-9），近年研究表明，其參與了多種癌癥的侵襲和轉移信號傳導，除了在黑色素瘤轉移和腫瘤進展中發揮作用，還在乳腺癌、尿路上皮細胞癌、腸癌、肝癌等多個腫瘤中高度表達[1]。但其與胃癌之間的關系尚缺乏研究，為此，本研究檢測不同胃組織中SDCBP的表達情況，并分析其與胃癌臨床病理特征及預后的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象 隨機抽取2017年1月～2020年10月在我院行胃癌根治術患者的癌組織及對應的癌旁組織各60份，均經手術病理證實。所有患者在手術前均未接受過放化療、中藥、免疫療法等治療，其中男31例，女29例；年齡42～77歲，平均（58.23±7.62）歲；腫瘤直徑1.3～7.6cm；浸潤深度：T0～T2 38例，T3～T4 22例；按2016年AJCC胃癌分期標準：Ⅰ～Ⅱ期23例，Ⅲ期37例；腫瘤分化程度：低分化39例，中、高分化21例；淋巴結轉移22例。所有標本收集后即刻放入10%中性福爾馬林中保存。

1.2 檢測方法 采用免疫組化染色法檢測SDCBP表達水平。組織切片包埋入石蠟，4μm連續切片，脫蠟、3%H2O2孵育后用磷酸鹽緩沖液反復沖洗，之后進行EnvisionTM二步法，試劑盒為北京中衫金橋生物技術有限公司產品，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。其中所用的兔抗人、鼠抗人抗體均為SantaCruz公司產品，DAB顯色試劑盒為南京博奧生物科技公司產品。

1.3 結果判定 由兩位觀察者采用雙盲法對結果進行判定，隨機觀察5個高倍視野，SDCBP為細胞漿染色，按半定量積分方法：①染色強度評分：無著色記0分，黃色記1分，棕黃色記2分，棕褐色記3分；②細胞陽性率評分：視野中陽性細胞所占的比例≤5%計0分，占6%～25%計1分，占26%～50%計2分，占51～75%計3分，＞75%計4分。最后將①和②相乘，0～1分為-，2～5分為+，6～8分為++，9～12分為+++。根據Fromowitz標準：-和+為低表達，++、+++為高表達。

1.4 隨訪 本組患者隨訪最短11個月，最長50個月，平均隨訪（32.72±6.52）個月，無一例患者死于胃癌以外原因。無病生存期定義為自確診日起至疾病復發轉移之間的時間。總生存期定義為自確診日起至末次隨訪之間的時間。

1.5 統計學方法 采用SPSS 23.0統計軟件分析處理數據，計量資料進行正態和方差齊性檢驗，符合正態分布的數據用±s表示，多組間比較采用多因素方差分析，計數資料以率表示，行χ2檢驗，等級資料采用秩和檢驗。采用Log-rank進行生存分析，采用Cox比例風險模型分析影響胃癌預后的相關因素。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同胃組織中SDCBP的表達情況 SDCBP在胃癌組織中的高表達率為55.0%（33/60），在癌旁組織中的高表達率為3.3%（2/60），差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同胃組織中SDCBP的表達情況（n）

2.2 SDCBP表達與胃癌臨床特征的關系 SDCBP在胃癌組織中的表達水平與患者的性別、腫瘤直徑、TNM分期、腫瘤分化程度無關（P＞0.05），與年齡、浸潤深度、淋巴結轉移有關（P＜0.05）。見表2。

表2 SDCBP表達與胃癌臨床特征的關系[n（%）]

2.3 SDCBP不同表達水平患者的生存情況 SDCBP高表達組的中位無病生存時間和中位總生存時間分別為19個月、28個月，無病生存率和總生存率分別為15.15%（5/33）、36.36%（12/33）；SDCBP低表達組的中位無病生存時間和中位總生存時間分別為21個月、34個月，無病生存率和總生存率分別為29.63%（8/27）、66.67%（18/27）。經Log-rank檢驗，SDCBP高表達組與低表達組的無病生存率比較差異無統計學意義（P＞0.05），而SDCBP高表達組的總生存率明顯低于低表達組（P＜0.05）。

2.4 影響胃癌預后的Cox比例風險模型分析 單因素Cox回歸分析顯示，浸潤深度、TNM分期、淋巴結轉移是影響胃癌患者無病生存期的危險因素，經進一步多因素Cox回歸分析顯示，TNM分期是影響胃癌患者無病生存期的危險因素。見表3。

表3 胃癌患者無病生存期的單因素及多因素Cox回歸分析

單因素Cox回歸分析顯示，浸潤深度、TNM分期、腫瘤分化程度、淋巴結轉移、SDCBP表達是影響胃癌患者總生存期的危險因素，經進一步多因素Cox回歸分析顯示，TNM分期、淋巴結轉移是影響胃癌患者總生存期的獨立危險因素。見表4。

表4 胃癌患者總生存期的單因素及多因素Cox回歸分析

3 討論

早期胃癌經規范治療一般預后較好，但臨床上確診時多為局部進展期胃癌，預后不佳，術后易復發，5年生存率不到15%[2]。我國有超過70萬的胃癌患者在診斷時已進入進展期[3]，因此患者不得不面臨腫瘤復發、轉移及死亡風險。近些年人們一直在探索新的分子標志物，以期提高胃癌早期診斷、靶向治療及預后判斷的水平。

SDCBP是一種具有多種生物活性的支架-PDZ結構域蛋白。PDZ結構域是許多支架蛋白的共同結構域，可促進蛋白質支架和蛋白復合物組裝，不同的蛋白復合物構型可形成很多信號和調控通路，對很多細胞過程發揮重要作用。SDCBP在細胞質中可與多種跨膜蛋白C-末端的結構域結合，從而影響細胞形狀及蛋白質的轉運和轉錄因子的激活等。SDCBP的高表達與多種惡性腫瘤相關，可通過與細胞膜受體蛋白的結合和分離，參與細胞內蛋白質的運輸、細胞骨架的構建和轉錄因子的激活，從而提高腫瘤細胞的增殖、黏附、侵襲、轉移和腫瘤血管形成能力。有研究表明SDCBP在正常人類細胞和不同來源的人類癌細胞中表達時是一個前轉移基因，具有誘導侵襲和轉移的能力[4]。癌癥基因組圖譜（The cancer genome atlas，TCGA）數據庫顯示，與SDCBP低表達的腫瘤相比，SDCBP高表達的患者預后較差，生存率較低[5]。也有研究顯示SDCBP在調節細胞與細胞、細胞與細胞外基質的黏附過程中起核心作用，且SDCBP還參與細胞內信號轉導、細胞表面的靶向作用、神經突觸傳遞和軸突生長[6]。

本研究結果顯示，SDCBP在胃癌組織與癌旁組織中的表達差異有統計學意義，證明SDCBP與胃癌關系密切。目前SDCBP對腫瘤影響的機制尚未完全清楚，在黑色素瘤和膠質瘤中，SDCBP可通過原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src/p38 MAPK信號通路參與NF-κB活化，從而上調基質金屬蛋白酶2（MMP-2）等NF-κB靶基因的表達，這是一種參與腫瘤細胞侵襲的關鍵分泌金屬蛋白酶[7]。本研究發現≥60歲胃癌患者的SDCBP高表達比例明顯高于＜60歲者，同時有淋巴結轉移、浸潤深度為T3～T4期患者的SDCBP高表達比例明顯高于無淋巴結轉移、T0～T2者，而不同性別、腫瘤直徑、TNM分期、腫瘤分化程度的胃癌患者SDCBP表達水平無顯著性差異。提示SDCBP高表達對胃癌淋巴結轉移發揮重要作用，胃癌導致的壽命損失隨年齡增加呈現先升后降的趨勢，在70～80歲達到高峰[8]，而SDCBP在老年胃癌患者中的表達升高，促進腫瘤侵襲、轉移，可能是老年患者壽命損失的一個潛在內因。

本研究結果顯示SDCBP的表達對胃癌患者的總生存時間產生影響。經Cox比例風險模型分析，排除了SDCBP是影響胃癌患者無病生存期的獨立危險因素，而單因素分析中SDCBP是影響胃癌患者總生存期的危險因素，說明SDCBP作為促基因在腫瘤轉移中發揮作用，它可能成為評價胃癌發展、轉移和預后的一個有價值的指標，為指導臨床治療提供新的靶點。本研究局限性，任何一種基因都不可能是決定腫瘤轉移的唯一因素，且多因素分析排除了SDCBP是總生存期的獨立危險因素。因此需要進一步的研究與探索，將SDCBP與其他相關因素結合起來，以提高臨床診斷價值。

綜上，本研究初步揭示了SDCBP在胃癌組織中的表達上調，且與淋巴結轉移相關，由于樣本數較少，其對胃癌高危預警、早期診斷、靶向治療及預后判斷的價值尚需大樣本、高質量研究進一步探討。