STARD8在胃癌中的表達(dá)水平及診斷意義

陳智勇 柯恩明

在中國，胃癌(gastric cancer，GC)是癌癥相關(guān)死亡的第3大原因[1]。根據(jù)癌癥統(tǒng)計(jì)資料顯示，臨床上大多數(shù)GC患者為晚期患者[2]，目前包括手術(shù)和聯(lián)合化療在內(nèi)的臨床治療手段，在治療晚期GC的療效上均不理想，僅能夠一定程度上改善患者生存質(zhì)量，而對患者的生存率的提高并不明顯[3]。因此，盡管目前GC的發(fā)病率逐年下降，但GC作為高度侵襲性和異質(zhì)性的惡性腫瘤，GC患者的死亡率依然很高[4,5]。因此提高GC的早期診出率，可能是降低GC致死率的關(guān)鍵。挖掘在GC診斷中有效的生物標(biāo)志物，是臨床醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn)問題之一。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也是GC死亡率高的主要影響因素之一，對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移機(jī)制的探索可能有助于GC的早期診斷[6,7]。在GC治療前，尤其是在早期GC中，精準(zhǔn)識別淋巴結(jié)狀況被認(rèn)為對制定更合適的治療策略和生存結(jié)局的改善至關(guān)重要[8]，目前臨床上主要通過影像學(xué)方式診斷淋巴結(jié)狀況，然而假陰性率高達(dá)45%[9]。因此，挖掘能夠有效評估GC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的生物標(biāo)志物，同樣在GC的早期診斷以及治療中具有重要意義。Rho GTP酶是肌動蛋白細(xì)胞骨架的重要調(diào)節(jié)因子，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、遷移、侵襲、極化以及轉(zhuǎn)移等過程，進(jìn)而調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展[10]，DLC蛋白則通過催化GTP水解成GDP，致使Rho GTP酶失活，間接影響細(xì)胞過程[11]。近年來研究表明DLC蛋白家族成員在多種癌癥出現(xiàn)顯著低表達(dá)甚至不表達(dá)的異常現(xiàn)象，且其表達(dá)失調(diào)和癌癥進(jìn)展密切相關(guān)[12,13]。DLC3也稱為GTP酶激活因子STARD8抗體STARD8[StAR-related lipid transfer(START)domain containing 8，STARD8]，目前在腫瘤領(lǐng)域的研究相對匱乏。STARD8包含一個(gè)N端無菌α基序(SAM)，一個(gè)C端類固醇生成的急性調(diào)節(jié)蛋白相關(guān)脂質(zhì)轉(zhuǎn)移(START)結(jié)構(gòu)域和調(diào)節(jié)RhoA的GAP域，是維持細(xì)胞的粘附連接穩(wěn)定性和極化發(fā)生所必需的[14]。在乳腺癌中，STARD8通過和內(nèi)體膜的動態(tài)締合，進(jìn)而調(diào)節(jié)乳腺癌調(diào)節(jié)RhoB活性和肌動蛋白聚合，影響乳腺癌細(xì)胞的生長[14]，而STARD8在GC中的研究較少。因此在本研究中，為了探究STARD8在GC中的臨床意義，我們對本院76例GC患者進(jìn)行了回顧分析，評估其在GC中的表達(dá)模式及診斷意義，結(jié)合GC患者的臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析，探究其和GC惡性進(jìn)展的關(guān)系，并對STADR8表達(dá)水平和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行深入研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究包括2018年12月至2019年12月本院收治的76例GC患者，均在我院被確診為GC，并接受了后續(xù)治療。收集GC患者的臨床病理資料、腫瘤組織(觀察組)及癌旁正常組織(對照組)樣本，樣本均在各患者接受治療前被采集。GC患者男51例，女25例；平均年齡(55.42±15.13)歲；平均BMI(23.96±5.31)kg/m2。

1.2 組織采集與STARD8表達(dá)水平檢測 組組織樣本均保存于無菌凍存管,置于液氮中速凍，速凍樣本放置于-80℃環(huán)境下長期保存。取組織樣本，通過PBS沖洗，洗去組織表面殘留的血液和雜質(zhì)，將組織塊稱重，并剪成盡量小的碎塊。按照組織重量∶PBS體積=1∶9加入預(yù)冷的PBS進(jìn)行勻漿。吸取勻漿液到離心管，在4℃下以5 000 g的轉(zhuǎn)速離心5 min，于-80℃保存下保存上清液。將上清液放入Human STARD8 ELISA Kit試劑盒中進(jìn)行檢測，根據(jù)試劑盒操作說明，通過酶聯(lián)免疫吸附法測定樣品中STARD8的表達(dá)水平，計(jì)算觀察組和對照組組織中STARD8的相對表達(dá)水平。

2 結(jié)果

2.1 STARD8在GC中的表達(dá)水平及其診斷價(jià)值 GC患者腫瘤組織樣本中STARD8的表達(dá)水平出現(xiàn)顯著下調(diào)。通過ROC曲線對2組樣本進(jìn)行了分析，低表達(dá)的STARD8在GC中具有較高的診斷價(jià)值(AUC值：0.862；敏感度：68.4%；特異性：96.1%；cut-off值：0.796)，根據(jù)cut-off值可較為精確地區(qū)分腫瘤組織和正常組織。見圖1，表1。

圖1 STARD8在GC中的表達(dá)模式及診斷意義

表1 2組組織中STARD8的表達(dá)水平比較

2.2 STARD8表達(dá)水平和GC患者病理特征的相關(guān)性 根據(jù)GC患者腫瘤組織中STARD8表達(dá)水平的中位值，分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。STARD8表達(dá)水平和GC的TNM分期、分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，STARD8低表達(dá)情況下，GC的TNM分期顯著更高，分化程度顯著更低。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，STARD8低表達(dá)的GC患者中發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的人數(shù)更多。本研究為了明確STARD8表達(dá)水平對GC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)評估作用，通過ROC分析，探究腫瘤組織中STARD8表達(dá)水平對GC患者淋巴結(jié)狀態(tài)的評估價(jià)值。STARD8表達(dá)水平同樣具有區(qū)分GC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生情況的臨床意義(AUC值：0.727；敏感度：78.3%；特異性：62.3%；cut-off值：0.493)。見表2，圖2。

圖2 STARD8在GC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況中的ROC曲線

表2 STARD8高低表達(dá)組GC患者的臨床病理資料 n=38

2.3 低表達(dá)STARD8是GC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因子 已通過ROC分析得知，腫瘤組織中STARD8的表達(dá)水平具有評估GC的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的作用，根據(jù)其表達(dá)水平在一定程度上能夠區(qū)分GC患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況。STARD8表達(dá)水平是否是GC轉(zhuǎn)移相關(guān)的獨(dú)立危險(xiǎn)因子進(jìn)一步進(jìn)行分析。GC的Borrmann分型、腫瘤直徑、浸潤深度以及腫瘤組織中STARD8表達(dá)水平均可能是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因子，將這些變量納入多因素邏輯回歸模型進(jìn)一步分析。多因素二元logistic回歸分析結(jié)果表明，GC患者的STARD8低表達(dá)(OR：12.739，95%置信區(qū)間：2.681～60.533，P=0.001)、浸潤深度T3～T4(OR：6.171，95%置信區(qū)間：1.522～25.014，P=0.011)以及腫瘤直徑≥5 cm(OR：7.600，95%置信區(qū)間：1.638～35.264，P=0.010)均是患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因子，我們證實(shí)腫瘤組織中STARD8低表達(dá)是GC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。見表3、4。

表3 GC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)的危險(xiǎn)因子

3 討論

GC的早期診出率較低[15]，本研究中的GC患者經(jīng)統(tǒng)計(jì)同樣大部分屬于晚期患者。早期GC患者的治愈率能夠達(dá)到90%，和晚期GC患者的生存率之間存在顯著差異[16]。基于生物標(biāo)志物在臨床上的重要意義，以及GC臨床診療的現(xiàn)狀，挖掘有效的生物標(biāo)志物是提高GC患者篩查率和生存率的關(guān)鍵。因此本研究以尋找GC診斷標(biāo)志物作為研究目的，檢測了GC患者腫瘤組織中STARD8的表達(dá)水平，并與對照組(癌旁正常組織)進(jìn)行對比，我們發(fā)現(xiàn)GC患者腫瘤組織中STARD8出現(xiàn)了異常表達(dá)，且首次證實(shí)腫瘤組織中STARD8低表達(dá)具有很高的GC早期篩查價(jià)值。臨床上或可通過進(jìn)一步加大樣本量，明確STARD8在GC診斷的臨界值，在今后胃部出現(xiàn)癌變患者的臨床診斷過程中增加檢查項(xiàng)目，提高GC的早期診出率，從而提高GC患者的生存率。

表4 GC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)的獨(dú)立危險(xiǎn)因子

既往研究也表明，GC腫瘤組織中STARD8顯著低表達(dá)，且低表達(dá)STARD8和GC惡性進(jìn)展相關(guān)[17]。因此，本研究不僅探究了STARD8在GC中的診斷價(jià)值，也對其和GC患者的腫瘤進(jìn)展的相關(guān)性進(jìn)行了研究。本研究證實(shí)了組織中STARD8表達(dá)水平在GC進(jìn)展中的臨床意義：腫瘤組織中STARD8表達(dá)水平和GC患者的TNM分期、分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，低表達(dá)組GC患者的腫瘤惡性進(jìn)展程度更高，具體表現(xiàn)為低表達(dá)GC患者的TNM分期顯著更高、細(xì)胞分化程度顯著更低且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率顯著更高。此外臨床研究多次提及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移在GC的預(yù)后價(jià)值極高[18,19]。然而，基于淋巴結(jié)狀態(tài)臨床診斷手段的精準(zhǔn)率并不理想的現(xiàn)狀，本研究注意到STARD8在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)不同的GC患者中存在顯著差異的現(xiàn)象，認(rèn)為這可能有助于臨床上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)的評估。隨后我們通過ROC分析，首次驗(yàn)證了腫瘤組織中STARD8表達(dá)水平不僅能夠在GC篩查中存在臨床意義，且對GC患者STARD8表達(dá)水平的監(jiān)測，對于患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)有較好的評估作用。臨床上結(jié)合影像學(xué)診斷結(jié)果以及腫瘤組織中的STARD8表達(dá)水平，對患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)行評估，這可能有助于改善因影像學(xué)診斷的假陰性率造成的治療不及時(shí)的局限性。

基于上述發(fā)現(xiàn)，本研究進(jìn)一步提出猜想，認(rèn)為STARD8表達(dá)水平可能是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)的危險(xiǎn)因子。因此，我們通過單因素分析和二元logistic回歸分析，探究淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。最終分析結(jié)果表明，腫瘤組織中的STARD8低表達(dá)(OR：12.739，95%置信區(qū)間：2.681～60.533，P=0.001)是GC患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。之前有研究認(rèn)為，GC的腫瘤直徑、浸潤深度以及分化程度都是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因子[20]，而在本研究中，腫瘤直徑≥5 cm(OR：7.600，95%置信區(qū)間：1.638～35.264，P=0.010)和浸潤深度T3～T4(OR：6.171，95%置信區(qū)間：1.522～25.014，P=0.011)均是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，分化程度則未顯示出和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。我們認(rèn)為出現(xiàn)差異的原因可能在于潛在的納入樣本之間的異質(zhì)性。總體而言，本研究明確了GC中STARD8具有較高的臨床意義，或可成為GC中使用價(jià)值極高的生物標(biāo)志物。

綜上所述，本研究不僅發(fā)現(xiàn)GC患者腫瘤組織中STARD8的表達(dá)水平顯著下調(diào)，且其異常低表達(dá)對GC患者的篩查具有臨床價(jià)值。此外，GC患者腫瘤組織中STARD8的表達(dá)水平和患者的腫瘤惡性進(jìn)展程度負(fù)相關(guān)，通過檢測STARD8的表達(dá)水平，也有助于判斷患者的淋巴結(jié)狀態(tài)，且STARD8低表達(dá)是GC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。在今后的臨床診斷以及治療上，合理利用本研究的有關(guān)結(jié)論，有效利用STARD的臨床價(jià)值，可能在GC的臨床診治中發(fā)揮積極作用。