12種中草藥提取物對殺鮭氣單胞菌的抑制效果

張振國，尤宏爭，郝 爽，羅 璋，錢 紅，馮守明

( 1.天津市動物疫病預防控制中心，天津 300400；2.天津市水產研究所，天津 300221)

虹鱒魚細菌病主要有弧菌病、細菌性腸炎、癤瘡病、柱狀病以及細菌性腎病。癤瘡病的病原是殺鮭氣單胞菌，其宿主較為廣泛，鮭科魚類是癤瘡病的易感魚類，感染后一周左右發病，病原經皮膚入侵，在軀干內形成小的感染病灶，肌肉組織壞死，出血、漿液滲出，患部皮膚軟化，形成癤瘡，也可經過鰓和口感染，進而侵入內臟，形成病灶。目前，治療癤瘡病主要以使用抗生素為主，長期使用抗生素會導致細菌耐藥性、環境污染等問題，不適宜目前的綠色健康養殖的理念。中草藥在水產養殖疾病預防和治療中得到廣泛應用，如預防水霉病、維氏氣單胞菌、鏈球菌有較好的效果。

1 材料與方法

1.1 菌株及藥品

殺鮭氣單胞菌()分離于發病虹鱒魚體內，黃柏、黃芩、金銀花、板藍根、苦參、大黃、魚腥草、穿心蓮、黃芪、大青葉、黃柏、連翹購自同仁堂藥店。

1.2 方法

稱取10 g所選藥物, 加入超純水100 mL浸泡0.5 h, 煎煮0.5 h, 不時進行攪拌, 藥液用紗布過濾, 濾渣再次煎煮、過濾, 合并藥液后,水浴濃縮至50 mL,藥液濃度即為200 mg/mL, 5 000 r/min離心，取上清，0.22 μm濾膜過濾除菌。配制好的藥物分裝于1.5 mL滅菌離心管中, -20 ℃保存備用。

1.3 藥物的初篩

采用紙片擴散法，殺鮭氣單胞菌(1.0×10CFU/mL)均勻涂布于腦心浸液培養基平板上, 將空白藥敏紙片平貼于平板上(4片/平板),每個空白紙滴加5 μL藥液， 28 ℃培養24 h,用精度1 mm尺子測量抑菌環的直徑, 并記錄結果。

1.4 最小抑菌濃度測定

根據初篩結果，選取抑菌效果較好的藥物進行最小抑菌濃度測定。在1.5 mL離心管進行，第1管中加入900 μL液體培養基，第2管至第12管分別加入500 μL培養基，第1管加入100 μL藥液，混勻后吸出500 μL加入第2管，依次2倍稀釋，直至最后1管。每個管加入10 μL菌液，28 ℃振蕩培養24 h，觀察有無細菌生長。另外，做1個陽性對照(加菌不加藥)和1個陰性對照(不加藥不加菌)。

2 試驗結果

2.1 初篩藥敏結果

用12種中草藥藥液對殺鮭氣單胞菌進行藥物敏感性測試，參照常用抗生素藥物敏感性試驗判斷標準分析,殺鮭氣單胞菌對黃芩和連翹2種藥物敏感，其余藥物不敏感(見表1)。

表1 12種中草藥對殺鮭氣單胞菌的抑菌效果

2.2 最小抑菌濃度

依據2.1藥敏初步篩選試驗結果，按照1.4中的方法測定黃芩和連翹對殺鮭氣單胞菌的最小抑菌濃度，結果顯示黃芩的最小抑菌濃度為10 mg/mL，連翹的最小抑菌濃度為20 mg/mL。

3 結論

本試驗選取了黃柏、黃芩、金銀花、板藍根、苦參、大黃、魚腥草、穿心蓮、黃芪、大青葉、黃柏、連翹12種常見中草藥對殺鮭氣單胞進行了體外抑制試驗，結果顯示10種中草藥無任何效果，黃芩和連翹抑菌效果較好，可以在試劑生產中應用，而且黃芩和連翹市場價格便宜，可操作性強，具有一定的實用價值。