靶向細(xì)胞焦亡
——治療缺血性卒中的可能途徑

李錫萱，譚婧萱，李琳杰，翟學(xué)佳，呂永寧

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430022)

卒中是全球第二大致死原因，且卒中患者的預(yù)后較差，有80%會(huì)出現(xiàn)永久性殘疾[1]。根據(jù)腦生理及血流變化的差異，卒中大致能夠分為兩大類(lèi)型：因腦內(nèi)血管破裂引起的出血性卒中(intracerebral hemorrhage，ICH)以及因腦內(nèi)動(dòng)脈阻塞引起的缺血性卒中(ischemic stroke，IS)，其中缺血性卒中占比85%～87%[2-3]。缺血性卒中的基本成因是流向腦實(shí)質(zhì)的血流因大動(dòng)脈粥樣硬化、小血管閉塞或心肌梗死等發(fā)生中斷，從而造成腦局部的氧氣及能量供應(yīng)中斷[4]。缺血性卒中發(fā)生后，腦組織的缺血缺氧往往造成興奮性毒性、氧化應(yīng)激、蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊、神經(jīng)炎癥、細(xì)胞死亡及血腦屏障破壞等一系列腦損傷事件[5-8]。其中，細(xì)胞死亡事件不僅造成了缺血性卒中后神經(jīng)細(xì)胞的損失，也會(huì)造成腦小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞的丟失，直接導(dǎo)致了大腦損傷，使卒中患者的恢復(fù)變得十分困難，造成終身殘疾[9]。

細(xì)胞的死亡包括細(xì)胞凋亡、自噬依賴(lài)性細(xì)胞死亡、細(xì)胞壞死等，許多研究表明這些過(guò)程密切地影響著缺血性卒中的預(yù)后[10-11]。近年來(lái)，研究表明一種與炎癥密切相關(guān)的新型細(xì)胞程序性死亡方式——細(xì)胞焦亡能夠引發(fā)缺血后的炎癥反應(yīng)，加重腦組織的損傷[12]。細(xì)胞焦亡為闡明缺血性卒中的機(jī)制提供了新的途徑，抑制細(xì)胞焦亡過(guò)程也成為了缺血性卒中治療的新方向。本文將闡釋細(xì)胞焦亡與缺血性卒中機(jī)制的關(guān)聯(lián)，并對(duì)與細(xì)胞焦亡相關(guān)治療靶點(diǎn)及藥物研究進(jìn)行綜述。

1 細(xì)胞焦亡與凋亡的異同

細(xì)胞焦亡(pyroptosis)于2001年被首次提出，最初用來(lái)描述被沙門(mén)菌或志賀菌感染的巨噬細(xì)胞中發(fā)生的半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)依賴(lài)性細(xì)胞程序性死亡過(guò)程[13]。雖然細(xì)胞焦亡過(guò)程也會(huì)出現(xiàn)DNA損傷及染色質(zhì)濃縮的現(xiàn)象，但與最早被提出的程序性細(xì)胞死亡過(guò)程——細(xì)胞凋亡(apoptosis)相比，它在發(fā)生機(jī)制及細(xì)胞形態(tài)都有很大的不同。

在機(jī)制方面，參與細(xì)胞凋亡過(guò)程的半胱氨酸蛋白酶(caspase)主要是caspase-3、caspase-8、caspase-6；而細(xì)胞焦亡在最初被定義為caspase-1依賴(lài)性的過(guò)程，后來(lái)的研究中發(fā)現(xiàn)caspase-11/4/5、caspase-3、caspase-8也參與到了細(xì)胞焦亡的非經(jīng)典途徑中[14]。此外，細(xì)胞焦亡又在2015年的一項(xiàng)研究中被稱(chēng)為gasdermin蛋白介導(dǎo)的程序性死亡[15]，說(shuō)明gasdermin蛋白家族，尤其是gasdermin D(GSDMD)在焦亡中是必需的，發(fā)揮了執(zhí)行者作用。它能夠被caspase-1及caspase-11/4/5特異性切割為C-末端(C-GSDMD)和N-末端(N-GSDMD)裂解片段，隨后N-GSDMD穿透細(xì)胞膜使其形成孔隙，導(dǎo)致細(xì)胞膜的穿孔，釋放細(xì)胞內(nèi)的促炎內(nèi)容物[16]；而細(xì)胞凋亡時(shí)，細(xì)胞不會(huì)破裂及釋放炎癥因子，而是進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)容物的包裝及凋亡小體的非炎性吞噬攝取過(guò)程[17]?？偟膩?lái)說(shuō)，細(xì)胞焦亡是一種炎癥性的細(xì)胞反應(yīng)，這一過(guò)程一般在細(xì)胞感應(yīng)到潛在的損傷事件時(shí)發(fā)生，包括病原體相關(guān)的分子模式(pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)、損傷相關(guān)分子模式(damage associated molecular patterns，DAMPs)、代謝水平改變以及環(huán)境刺激等[18]。

2 細(xì)胞焦亡發(fā)生的機(jī)制

2.1經(jīng)典途徑 細(xì)胞焦亡的經(jīng)典途徑是由caspase-1介導(dǎo)的炎癥小體途徑，能夠由微生物或非微生物刺激激活，是先天免疫的重要組成部分[19]。細(xì)胞焦亡的經(jīng)典途徑是由炎癥小體介導(dǎo)的。它們是一系列結(jié)構(gòu)相似的大型多蛋白復(fù)合物的總稱(chēng)，較典型的炎癥小體如NLRP1、NLRP3、NLRC4、AIM2一般都包含三部分：①細(xì)胞溶質(zhì)模式識(shí)別受體(pattern recognition receptors，PRRs)，如NOD樣受體(NLRs)及AIM2(ALR member absent in melanoma 2)樣受體(ALRs)；②含有半胱天冬酶募集結(jié)構(gòu)域(caspase recruitment domain，CARD)的凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(apoptosis-associated speck-like protein，ASC)；③caspase-1前體(pro-caspase-1)[20]。炎癥小體中不同的PRRs能夠識(shí)別相應(yīng)的PAMPs或DAMPs后激活，在經(jīng)歷寡聚化后與激活的ASC及pro-caspase-1一同組裝成為炎癥小體[21-22]。炎癥小體激活后被作為半胱氨酸蛋白酶caspase-1的激活平臺(tái)，將caspase-1的前體裂解形成激活的二聚體形式。激活的caspase-1隨后對(duì)gasdermin家族效應(yīng)蛋白GSDMD進(jìn)行切割[23]。GSDMD由N-端及C-端結(jié)構(gòu)域組成，C端-結(jié)構(gòu)域在分子中起到內(nèi)在抑制劑的作用。一旦C-端結(jié)構(gòu)域被切割，剩下的N-端結(jié)構(gòu)域就會(huì)被激活釋放，自由寡聚化并插入質(zhì)膜中，形成10～14 nm的孔隙，導(dǎo)致細(xì)胞滲透壓平衡的喪失，導(dǎo)致細(xì)胞焦亡[24]。此外，caspase-1還能使促炎因子白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)及白細(xì)胞介素-18(IL-18)的前體(pro- IL-1β和pro- IL-18)裂解成熟后通過(guò)GSDMD形成的孔隙釋放到胞外，加重炎癥反應(yīng)[25](圖1)。

Canonical pathway:經(jīng)典途徑；Non-canonical pathway：非經(jīng)典途徑；DAMPs(damage associated molecular patterns)：損傷相關(guān)分子模式；PAMPs(pathogen-associated molecular patterns)：病原體相關(guān)的分子模式；LPS(Lipopolysaccharide):細(xì)菌內(nèi)脂多糖；Death stimulation signal：死亡刺激信號(hào)；inflammasome：炎癥小體；pro-caspase-1：半胱氨酸蛋白酶-1前體；pro-caspase-11：半胱氨酸蛋白酶-11前體；pro-caspase-3：半胱氨酸蛋白酶-3前體；caspase-11：半胱氨酸蛋白酶-11；caspase-3：半胱氨酸蛋白酶-3；caspase-1：半胱氨酸蛋白酶-1；pro-IL-18：白細(xì)胞介素-18前體；pro-IL-1β：白細(xì)胞介素-1β前體；IL-18：白細(xì)胞介素-18；IL-1β：白細(xì)胞介素-1β；GSDMD：Gasdermin D；GSDME：Gasdermin E。圖1 細(xì)胞焦亡發(fā)生的途徑 Fig.1 Pathways of pyroptosis

2.2非經(jīng)典途徑 焦亡的非經(jīng)典途徑主要是由caspase-11(在人類(lèi)中為caspase-4/5)介導(dǎo)的，它與caspase-1同屬于促炎caspase家族，具有相似的結(jié)構(gòu)，但序列之間存在差異。這意味著它們?cè)诩?xì)胞焦亡的過(guò)程中通過(guò)不同的途徑發(fā)揮著相似的作用。Caspase-11能夠?qū)-尾端的CARD直接與革蘭陰性菌細(xì)菌內(nèi)脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)結(jié)合，從而變?yōu)榧せ顟B(tài)，隨后切割裂解GSDMD生成N-GSDMD，最終形成質(zhì)膜孔隙[26]。但與caspase-1不同的是，caspase-11無(wú)法直接裂解pro- IL-1β和pro- IL-18，它通過(guò)將GSDMD裂解后間接地激活NLRP3炎癥小體啟動(dòng)NLRP3/caspase-1途徑來(lái)介導(dǎo)IL-1β和IL-18的成熟與分泌[27](圖1)。此外，過(guò)去認(rèn)為凋亡相關(guān)的半胱氨酸蛋白酶caspase-3、caspase-8無(wú)法刺激gasdermin家族蛋白誘導(dǎo)焦亡。但近年發(fā)現(xiàn)腫瘤化療藥物能夠作為死亡刺激信號(hào)誘導(dǎo)caspase-3 裂解gasdermin家族的另一種蛋白gasdermin E(GSDME)，形成N-GSDME，釋放IL-1β，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的焦亡，這一發(fā)現(xiàn)為化療對(duì)癌癥的作用機(jī)制提供了全新的思路[28]。并且在對(duì)乳腺癌相關(guān)的研究中也發(fā)現(xiàn)化療藥物如PD-L1能夠誘導(dǎo)caspase-8將乳腺癌細(xì)胞的凋亡轉(zhuǎn)化為GSDME依賴(lài)性焦亡[29]。此外，也有研究表明耶爾森氏菌感染能夠誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞中caspase-8相關(guān)的GSDMD裂解[30]。

3 缺血性卒中與焦亡的關(guān)系

大腦的缺血會(huì)造成腦組織的缺氧及葡萄糖供應(yīng)不足，從而造成包括神經(jīng)元死亡、腦水腫、血腦屏障損傷、神經(jīng)功能障礙等一系列腦損傷事件[31]。從缺血性卒中發(fā)作的幾分鐘內(nèi)，乃至后幾天內(nèi)的急性期，甚至幾個(gè)月的損傷恢復(fù)期，都伴隨著神經(jīng)炎癥的發(fā)生。腦損傷導(dǎo)致炎癥因子的分泌，而炎癥因子又反過(guò)來(lái)激活神經(jīng)系統(tǒng)的常駐免疫細(xì)胞——小膠質(zhì)細(xì)胞，并募集外周免疫細(xì)胞，加重神經(jīng)炎癥反應(yīng)[32]。在缺血性卒中發(fā)作后損傷或死亡的細(xì)胞還會(huì)釋放包括高遷移率族蛋白B1(HMGB1)、腺苷三磷酸(ATP)及熱休克蛋白等內(nèi)源性物質(zhì)的DAMPs，隨后激活存在于先天免疫細(xì)胞表面或內(nèi)部的PRRs，NLRs及Toll樣受體(TLRs)等[33]。一些PRRs的激活使炎癥小體在胞漿形成，誘導(dǎo)半胱氨酸蛋白酶如上述的caspase-1、-4/5/11活化后使炎癥因子IL-1β和IL-18成熟，并通過(guò)激活GSDMD蛋白形成細(xì)胞膜孔，使炎癥因子釋放，由此造成細(xì)胞的焦亡[34]。

由于介導(dǎo)焦亡炎癥小體組成部分之一——PRRs主要表達(dá)在小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞等免疫細(xì)胞上介導(dǎo)先天免疫反應(yīng)，故在缺血性腦卒中后引起的細(xì)胞焦亡也主要發(fā)生在小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞中[35-36]。一項(xiàng)研究表明在腦缺血/再灌注的小鼠模型中出現(xiàn)里顯著的小膠質(zhì)細(xì)胞焦亡，而焦亡關(guān)鍵執(zhí)行蛋白GSDMD基因的敲除導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞焦亡程度顯著降低并降低了全腦的神經(jīng)炎癥水平，預(yù)示了小膠質(zhì)細(xì)胞在腦缺血后焦亡及炎癥中的重要作用[37]。除小膠質(zhì)細(xì)胞外，以往研究MCAO體內(nèi)模型及OGD體外模型中都證實(shí)了星形膠質(zhì)細(xì)胞中細(xì)胞焦亡的程度顯著增強(qiáng)；并且有報(bào)道表明星形膠質(zhì)細(xì)胞中的細(xì)胞焦亡嚴(yán)重?fù)p害了血腦屏障的完整性并對(duì)星形膠質(zhì)末端淋巴系統(tǒng)中水通道蛋白-4(aquaporin-4，AQP-4)介導(dǎo)的腦內(nèi)Aβ-(amyloid-beta peptide，Aβ)的清除過(guò)程產(chǎn)生不良影響，從而使缺血后腦內(nèi)穩(wěn)態(tài)失衡，并容易造成卒中后的癡呆[38]。

許多研究中都說(shuō)明了細(xì)胞焦亡過(guò)程與缺血性卒中的密切聯(lián)系。炎癥小體作為焦亡通路中的關(guān)鍵蛋白，密切參與了細(xì)胞焦亡啟動(dòng)及神經(jīng)炎癥發(fā)生過(guò)程，POH等[39]在小鼠大腦中動(dòng)脈閉塞/再灌注(MCAO/R)模型中檢測(cè)了NLRP1、NLRP3、NLRC4、AIM2四種典型炎癥小體的狀態(tài)及相關(guān)炎性組分的表達(dá)，并且在BV2小膠質(zhì)細(xì)胞體外缺氧缺糖(OGD)模型敲除BV2細(xì)胞中的NLRC4基因或使用caspase-1、caspase-8的抑制劑對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞凋亡及焦亡的情況進(jìn)行了進(jìn)一步驗(yàn)證，結(jié)果顯示小膠質(zhì)細(xì)胞中炎癥小體及其相關(guān)炎癥組分如IL-1β及IL-18表達(dá)顯著上升，而NLRC4基因的敲除及caspase-1、caspase-8抑制劑的干預(yù)能夠抑制炎性組分的活化，防止小膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡及焦亡；此外，神經(jīng)炎癥的重要調(diào)節(jié)分子——在髓細(xì)胞上表達(dá)的觸發(fā)受體(TREM)-1能夠通過(guò)與脾酪氨酸激酶(SYK)相互作用而激活促炎通路CARD9/NF-κB和NLRP3/caspase-1，并上調(diào)小膠質(zhì)細(xì)胞中GSDMD、GSDMD-N的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞膜孔形成并釋放炎癥因子，從而導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞的焦亡[40]。除了對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞焦亡的研究外，在針對(duì)MCAO大鼠及神經(jīng)細(xì)胞OGD模型的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)鏈非編碼RNA母源表達(dá)基因-3(MEG3)，miR-485及AIM2炎癥小體的互作通路通過(guò)激活caspase-1介導(dǎo)了腦缺血后的神經(jīng)元細(xì)胞焦亡[41]。這些研究說(shuō)明通過(guò)靶向細(xì)胞焦亡的各關(guān)鍵分子來(lái)治療缺血性卒中可能是一個(gè)十分可行的策略。

4 細(xì)胞焦亡過(guò)程作為潛在的缺血性卒中治療靶點(diǎn)

在目前的臨床實(shí)踐中，早期溶栓及動(dòng)脈取栓被認(rèn)為是治療缺血性卒中最有效的方法，但大部分患者因錯(cuò)過(guò)時(shí)間窗或合并禁忌證而失去早期治療機(jī)會(huì)，故目前臨床對(duì)缺血性卒中仍主要以抗血小板聚集、抗凝、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)、神經(jīng)保護(hù)劑等藥物治療為主[42-43]。由于細(xì)胞焦亡在缺血性卒中中扮演了重要的角色，這使得細(xì)胞焦亡相關(guān)的各個(gè)關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)成為了潛在的缺血性卒中治療靶點(diǎn)。

4.1靶向炎癥小體 炎癥小體是細(xì)胞焦亡經(jīng)典途徑啟動(dòng)的關(guān)鍵復(fù)合物。大量的文獻(xiàn)顯示很多藥物能夠通過(guò)干預(yù)炎癥小體而對(duì)缺血性卒中產(chǎn)生治療作用。例如，一種新型化合物JLX001能夠縮小MCAO大鼠的腦梗死面積，改善缺血性腦損傷，并抑制NLRP3炎癥小體相關(guān)蛋白的表達(dá)，使促炎細(xì)胞因子IL-1β水平降低，并增加抗炎表型小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量[44]。生姜中提取的一種天然產(chǎn)物6-姜酚被證明能夠通過(guò)顯著降低NLRP3炎癥小體介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥水平和神經(jīng)元凋亡，并上調(diào)自噬，從而減輕腦缺血/再灌注后造成的損傷[45]。隨著研究的深入，研究者們發(fā)現(xiàn)一些傳統(tǒng)藥物也能夠通過(guò)抑制炎癥小體介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡過(guò)程產(chǎn)生療效。注射用丹酚酸已被我國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)用于臨床缺血性卒中的治療，MA等[46]的研究表明其能夠通過(guò)促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞促炎M1表型向抗炎M2表型轉(zhuǎn)換及抑制NLRP3炎癥小體/細(xì)胞焦亡軸發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。此外，SHE等[47]的研究表明補(bǔ)陽(yáng)還五湯的主要藥效成分黃芪總皂苷能夠顯著改善MCAO大鼠的神經(jīng)功能障礙及神經(jīng)元損傷，并顯著抑制NLRP3/caspase-1介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡經(jīng)典途徑。人參皂苷Rd及當(dāng)歸提取物Z-藁本內(nèi)酯合用能夠顯著抑制BV2小膠質(zhì)細(xì)胞體外OGD模型的NLRP3炎癥小體激活及細(xì)胞焦亡過(guò)程[48]。上述研究都證明了靶向炎癥小體-細(xì)胞焦亡過(guò)程能夠有效地改善神經(jīng)炎癥及缺血性腦損傷，具有很大的治療潛力。

4.2靶向半胱氨酸蛋白酶caspase 半胱氨酸蛋白酶caspase家族是細(xì)胞死亡與炎癥反應(yīng)的重要參與者，它在以往的研究中已經(jīng)成為缺血性卒中的治療靶點(diǎn)，研究較多的主要是caspase-3/8、caspase-9及caspase-12。缺血性卒中的神經(jīng)保護(hù)劑丁苯酞及依達(dá)拉奉在臨床上應(yīng)用廣泛，它們的聯(lián)用能夠通過(guò)降低細(xì)胞損傷及caspase-3介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，增加神經(jīng)元和血管內(nèi)皮細(xì)胞的數(shù)量，減少星形膠質(zhì)細(xì)胞的形成，從而減少M(fèi)CAO小鼠的腦梗死體積和神經(jīng)功能缺損，發(fā)揮多靶點(diǎn)作用[49]。另一項(xiàng)研究表明葡萄籽原花青素能夠通過(guò)抑制caspase-12減輕MCAO小鼠缺血后誘發(fā)的細(xì)胞凋亡，具有治療缺血性卒中的潛力[50]。我國(guó)的名方片仔癀也被報(bào)道能夠顯著降低caspase-3和caspase-9的表達(dá)，減輕神經(jīng)元凋亡及缺血后的神經(jīng)炎癥[51]。近年來(lái)，許多更進(jìn)一步的研究將caspase家族與細(xì)胞焦亡聯(lián)系起來(lái)，其中caspase-1及caspase-11分別介導(dǎo)了細(xì)胞焦亡的經(jīng)典與非經(jīng)典途徑。已有報(bào)道在小鼠腦缺血模型中證明了caspase-1的藥理抑制劑Vx765能夠通過(guò)下調(diào) caspase-1的表達(dá)顯著降低細(xì)胞焦亡過(guò)程中各關(guān)鍵分子的激活水平，并顯著縮小腦梗死體積，恢復(fù)模型小鼠的認(rèn)知與行為功能[52]。經(jīng)典的抗癲癇及抗躁郁藥物丙戊酸也被研究證實(shí)其通過(guò)調(diào)節(jié)半胱氨酸蛋白酶補(bǔ)充域[32]/caspase-1/IL-18，IL-1β途徑抑制神經(jīng)細(xì)胞的焦亡，產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用[53]。此外，通心絡(luò)被證實(shí)能夠下調(diào)caspase-11及caspase-1，緩解MCAO大鼠缺血腦組織星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞焦亡，并減少細(xì)胞周?chē)鶤β的積聚，對(duì)腦組織產(chǎn)生保護(hù)作用。

4.3靶向執(zhí)行蛋白GSDMD gasdermin家族蛋白，特別是GSDMD在細(xì)胞焦亡過(guò)程中扮演著執(zhí)行者的重要作用，它能夠在裂解后使細(xì)胞穿孔，以釋放胞漿中的炎性介質(zhì)。WANG等[37]研究發(fā)現(xiàn)，將MCAO小鼠的GSDMD 基因敲除后能夠有效抑制小鼠腦中小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β及IL-18的分泌，抑制缺血區(qū)周?chē)?xì)胞焦亡，改善損傷的神經(jīng)功能，說(shuō)明下調(diào)GSDMD的表達(dá)可能稱(chēng)為缺血性卒中治療的潛在策略。中藥石斛中提取的有效成分之一石斛生物堿被報(bào)道具有抗氧化、抗炎及抗真菌活性，一項(xiàng)研究表明石斛生物堿在體內(nèi)及體外缺血模型中均能夠通過(guò)降低焦亡相關(guān)蛋白Caspase-1和GSDMD的表達(dá)，并下調(diào)炎癥因子IL-1β、IL-6和IL-18，從而抑制細(xì)胞焦亡及神經(jīng)炎癥反應(yīng)，發(fā)揮腦保護(hù)作用[54]。中藥姜黃中最主要的有效成分姜黃素被報(bào)道能夠通過(guò)抑制線(xiàn)粒體凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激以及刺激神經(jīng)發(fā)生而對(duì)腦產(chǎn)生保護(hù)作用，RAN等[55]研究進(jìn)一步表明姜黃素能夠顯著改善MCAO小鼠卒中后的腦白質(zhì)損傷，并顯著降低腦中caspase-1、GSDMD陽(yáng)性的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量，有效抑制細(xì)胞的焦亡。LI等[56]的研究基于大鼠MCAO/R模型及PC12細(xì)胞的體外OGD模型探究了臨床一線(xiàn)用藥阿司匹林、吲哚布芬分別與氯吡格雷、替卡雷洛聯(lián)用對(duì)缺血性腦損傷的保護(hù)作用，結(jié)果表明兩類(lèi)抗血小板藥聯(lián)用時(shí)能夠比單藥更顯著地改善模型組的缺血損傷狀態(tài)，并通過(guò)干預(yù) NF-κB/NLRP3信號(hào)通路，顯著降低NLRP3，Caspase-1，IL-18，IL-1β及GSDMD的表達(dá)，抑制神經(jīng)炎癥與細(xì)胞焦亡相關(guān)因子的水平，為傳統(tǒng)的缺血性卒中用藥方案增添了全新的機(jī)制闡釋[57]。雖然目前為止還沒(méi)有特定的GSDMD抑制劑用于治療缺血性卒中，但越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)研究表明GSDMD十分有希望成為未來(lái)缺血性卒中的治療靶點(diǎn)。

5 結(jié)束語(yǔ)

目前對(duì)于缺血性卒中的研究大多集中于興奮性毒性、氧化應(yīng)激及神經(jīng)炎癥等領(lǐng)域；對(duì)于腦缺血后細(xì)胞死亡的研究也大多聚焦于細(xì)胞凋亡、壞死及自噬過(guò)程。現(xiàn)行治療缺血性卒中的首選臨床療法仍是采用靜脈溶栓、機(jī)械取栓或使用抗血小板藥物等方法恢復(fù)腦血流；雖然對(duì)于缺血性卒中的發(fā)生和進(jìn)展機(jī)制已有較為深入和廣泛的研究，但作用于上述機(jī)制的特異性藥物轉(zhuǎn)化進(jìn)入臨床實(shí)踐的比例卻并不樂(lè)觀，其主要原因是缺血性卒中的發(fā)生涉及到神經(jīng)、免疫等多個(gè)系統(tǒng)的相互作用，針對(duì)某一特定通路或蛋白的藥物其靶向性不足，易產(chǎn)生其他系統(tǒng)的非特異性結(jié)合而導(dǎo)致廣泛的不良反應(yīng)；同時(shí)由于缺血性卒中的發(fā)生及進(jìn)展是全身多個(gè)系統(tǒng)共同作用的復(fù)雜結(jié)果，針對(duì)單一通路或蛋白的藥物難以全面的糾正多系統(tǒng)的損傷與紊亂；此外，一些藥物在動(dòng)物及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)上缺少穩(wěn)定的效果，實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性不強(qiáng)，這增大了其從臨床前實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)化至臨床階段的難度。

細(xì)胞焦亡最初于感染性疾病的進(jìn)程中被發(fā)現(xiàn)，后在其他與炎癥相關(guān)的非感染性疾病中也證實(shí)了細(xì)胞焦亡過(guò)程的關(guān)鍵作用，它作為與炎癥密切相關(guān)的細(xì)胞程序性死亡方式成為了溝通細(xì)胞死亡及免疫炎癥途徑的一座橋梁，為缺血性卒中這樣同時(shí)存在器質(zhì)性損傷及免疫激活反應(yīng)的疾病提供了新的潛在治療思路。缺血性卒中的疾病發(fā)展過(guò)程中，細(xì)胞焦亡一方面造成了腦內(nèi)神經(jīng)元及免疫細(xì)胞的丟失，引起神經(jīng)缺損及大腦功能的損害；另一方面，焦亡過(guò)程最終導(dǎo)致胞內(nèi)炎癥因子的釋放，使腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞不斷激活，并且造成外周免疫細(xì)胞在腦中的浸潤(rùn)，加重炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步對(duì)大腦造成損傷，形成惡性循環(huán)。所以，靶向細(xì)胞焦亡通路中的關(guān)鍵蛋白可能在減少腦部實(shí)質(zhì)損傷的同時(shí)降低腦內(nèi)炎癥水平，改善缺血性卒中后造成的神經(jīng)損傷?？傊?xì)胞焦亡作為一種新型細(xì)胞死亡方式，可能作為治療缺血性卒中的潛在靶點(diǎn)。

然而，細(xì)胞焦亡的相關(guān)研究仍處于實(shí)驗(yàn)室階段，并且缺少相關(guān)通路蛋白的特異性抑制劑用于進(jìn)一步的機(jī)制研究。此外，細(xì)胞焦亡與缺血性卒中其他機(jī)制之間的關(guān)系仍未完全闡明，需要更多的研究將細(xì)胞焦亡與傳統(tǒng)的作用通路聯(lián)系起來(lái)，以期開(kāi)發(fā)出多通路、多靶點(diǎn)的缺血性卒中新療法，達(dá)到提高治愈率，改善預(yù)后的效果。