不同產地紅花主要成分比較研究

郭繼娜，劉圣紅

（1.新疆巴音郭楞蒙古自治州食品藥品檢驗所，新疆 庫爾勒 841000；2.新疆農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所，新疆烏魯木齊 830091）

紅花為菊科紅花屬植物紅花（Carthamus tinctorius L.）的干燥花[1]，具有活血、化瘀和止痛等功效[2]，是我國傳統中藥材，主要分布于河南、新疆、四川、內蒙古、甘肅和云南等地[3]。紅花的化學成分有黃酮類、生物堿和脂肪酸類等物質[4]。目前，研究紅花的栽培技術[5]、加工技術[6]、化學成分[7]以及藥理作用[8]的報道比較多，但是在對不同產地紅花的化學成分比較研究較少。

本文以不同產地的紅花為研究對象，采用高效液相色譜法對羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素等4種化學成分進行測定和對比分析，以期為紅花的質量評價提供參考。

1 實驗材料與儀器

1.1 樣品

采自河南、云南、新疆和四川等產地的紅花材料，經由新疆巴音郭楞蒙古自治州食品藥品檢驗所鑒定。樣品編號和采集地見表1。

表1 紅花樣品來源信息Table 1 Carthamus tinctorius sample source information

1.2 儀器

Agilent 1220 LC高效液相色譜儀（DAD檢測器），十萬分之一電子分析天平（梅特勒-托利多），KQ-250V型超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。對照品羥基紅花黃色素A（批號：111637-200905，中國藥品生物制品檢定所）；蘆丁（批號：0080-9705，中國藥品生物制品檢定所）；槲皮素（批號：100081-200907，中國藥品生物制品檢定所）；山柰酚（批號：110861-200405，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純，磷酸為優級純，水為超純水。

2 試驗方法與結果

2.1 制備

取不同產地的紅花樣品，干燥，研磨成粉末，備用。

2.1.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁、山柰素對照品適量，加入甲醇配置成含對羥基紅花黃色素A 77.6g/mL、槲皮素6.4g/mL、蘆丁46.0g/mL、山柰素12.8g/mL的混合對照品溶液，經0.45m微孔濾膜過濾，備用。

2.1.2 供試品溶液的制備 取1～9號紅花藥材粉末，精密稱重1.0 g置于具塞錐形瓶內，加50 mL甲醇，精密稱定重量，超聲40 min，再次精密稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，經0.45m微孔濾膜過濾，備用。

2.2 色譜條件

色譜柱：Waters Symmetry C18（250 mm 4.6 mm，5m）；柱溫為30℃；流動相：甲醇-0.75%磷酸溶液；檢測波長：360 nm；流速：0.8 mL/min；進樣量：10L；梯度洗脫程序見表2。色譜圖見圖1，在此色譜條件下，理論塔板數按羥基紅花黃色素A峰計算不低于3 000。

表2 流動相線性梯度Table 2 Linear gradient of mobile phase

圖1 紅花中4種化學成分的色譜圖Fig.1 Chromatogram diagran of four chemical components in Carthamus tinctorius

2.3 線性關系研究

量取對照品混合溶液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、8.0 mL分別置于10mL容量瓶中，加甲醇定容，混勻，按“2.2”色譜條件進行測定。以對照品濃度（g/mL）為橫坐標x，以對應峰面積為縱坐標y，繪制回歸曲線，結果見表3。

表3 線性回歸方程及相關數據Table 3 Linear regression equation and related data

2.4 精密度試驗

取制備的混合對照品溶液，連續進樣6次，根據峰面積計算羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素的RSD值分別為0.68%、0.87%、0.57%和0.62%，表明儀器的精密度良好。

2.5 穩定性試驗

稱取紅花樣品（編號4）1份，按“2.1.2”制備供試品溶液，分別在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、16 h和24 h進樣，測定峰面積，計算羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素的RSD值分別為1.78%、1.98%、1.86%和2.03%，結果表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.6 重復性試驗

分別稱取1.0 g紅花樣品（編號4）6份，按“2.1.2”制備供試品溶液，進行色譜測定，計算4種成分的RSD值。羥基紅花黃色素A平均含量為6.02 mg，RSD=1.12%；槲皮素平均含量為0.27 mg，RSD=1.27%、蘆丁平均含量為2.13 mg，RSD=1.83%、山柰素平均含量為0.45 mg，RSD=1.64%，結果表明方法重復性良好。

2.7 回收率試驗

稱取6份已知含量的紅花樣品（編號4），每份約0.50 g，分別加入一定量的羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁及山柰素對照品，按“2.1.2”制備供試品溶液，測定含量，計算回收率，結果見表4。

表4 紅花加樣回收試驗Table 4 Carthamus tinctorius sample recovery test

2.8 樣品含量測定

取9種不同產地的紅花樣品，各3個重復，按“2.1.2”制備供試品溶液，在“2.2”色譜條件下測定峰面積，代入線性回歸方程，計算對羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素4種成分含量，結果取平均值，見表5。

表5 不同產地紅花樣品中的4種成分含量測定Table 5 Determination of four components in Carthamus tinctorius samples from different producing areas

續表

3 討論

關于紅花成分含量檢測的多為同省份不同產地的紅花多種成分檢測或建立成分含量的檢測方法。黃壯壯等[9]檢測了新疆不同產區的紅花藥材的6-羥基山柰酚-3,6,7-三-O-葡萄糖苷、羥基紅花黃色素A和脫水紅花黃色素B 3種化學成分含量，發現各個產區的紅花成分含量存在差異；還有報道云南不同產地紅花揮發性成分的研究方法[10]；耿維鳳[11]對河南、四川、內蒙、新疆和云南5個產區的紅花中黃色素和紅色素進行對比分析，不同產區的含量存在明顯差異；吳晶等[12]建立了HPLC雙波長同時檢測紅花中沒食子酸、羥基紅花黃色素A、原兒茶酸、蘆丁和槲皮素5種化學成分含量的方法，靈敏度高；何婷等[3]建立了同時測定紅花中4種化學成分含量的方法，該方法簡便、準確，靈敏度高。

紅花作為藥食同源的中藥材，富含多種活性成分，如黃酮類、生物堿類、甾醇類和聚乙炔類等，其中黃酮類成分是紅花的主要活性成分，有抗炎、抗凝血和抗血栓等功效，主要發揮活血化瘀、保護急性缺血心肌等作用[13]。黃酮類成分主要包括羥基紅花黃色素A、山柰素、槲皮素、蘆丁、腺苷和芹菜素等。其中，《中國藥典》2020版中將羥基紅花黃色素A和山柰素列為紅花藥材的質量指標成分，可用于對紅花藥材質量評價[14]。為對比不同產地的紅花藥材質量，本試驗選取了河南、云南、新疆和四川等4個紅花主產區的共9批紅花藥材進行成分含量檢測，采用準確度和靈敏度高的HPLC法同時對的羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素4種成分含量進行測定，對比分析不同產區的紅花藥材中4種化學成分的含量，發現不同產地的紅花中的成分含量存在差異[15-18]。在本試驗中，紅花中的4種化學成分含量因產地不同而存在較大差異，羥基紅花黃色素A含量在12.183 9～24.972 7 mg/g范圍內變化，槲皮素含量在0.072 1～6.122 3 mg/g范圍內變化，蘆丁含量在0.787 8～1.347 2 mg/g范圍內變化，山柰素含量在0.161 0～0.286 3 mg/g范圍內變化。以新疆地區的紅花藥材中含有的羥基紅花黃色素A含量最高，其次為河南產區、云南產區，四川產區最低；河南產區的槲皮素含量較高，四川產區的蘆丁含量較高。這可能是由于受到不同環境因素、土壤條件和氣候條件等多方面的影響導致不同產區紅花樣品中的成分含量不同[9,12,19]。本試驗檢測對比了4個不同產區紅花中羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素4種成分含量，以期為研究不同產區紅花質量評價提供參考。