釀酒葡萄‘白玉霓’離體快繁技術(shù)研究

王建萍 劉萬好 李記明 阮仕立 王根杰 陳景輝 唐美玲 沙玉芬*

（1山東省煙臺市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，煙臺 265500；2煙臺張裕集團有限公司，山東省葡萄酒微生物發(fā)酵技術(shù)重點實驗室，煙臺 265709；3山東省釀酒葡萄與葡萄酒技術(shù)創(chuàng)新中心，煙臺 265400）

‘白玉霓’原產(chǎn)法國，晚熟葡萄品種，在煙臺地區(qū)10月上旬成熟。該品種樹勢強，果肉多汁、無色，出汁率達到70%，味酸甜，成熟后糖度低、總酸較高，是釀造白蘭地的重要葡萄品種[1]。本研究通過對‘白玉霓’離體快繁的滅菌時間、激素濃度配比等進行探索，初步建立了其離體快繁技術(shù)體系。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

選取‘白玉霓’當年生健壯枝條為材料。

1.2 試驗方法

將選取的枝條去掉葉片，在自來水下沖洗1 h，轉(zhuǎn)移到超凈工作臺上，去掉莖尖和底端的芽，將剩余的芽剪成2 cm左右的莖段，放入無菌瓶中，先用75%酒精浸泡30 s，然后用0.1%升汞浸泡6～10 min，中間搖晃2～3次，最后用無菌水沖洗5～6次。將消毒好的莖段兩端剪掉，插入預(yù)先配置好的培養(yǎng)基上，基本培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基，蔗糖20 g/L，瓊脂5.4 g/L。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同滅菌時間對初代培養(yǎng)成活率的影響

不同滅菌時間對初代培養(yǎng)成活率影響很大，滅菌時間越長污染率越低，但滅菌時間過長可能會導(dǎo)致材料死亡，從而使成苗率降低。從表1可知，當滅菌時間為6 min時污染率最高，為76.7%，但初代成苗率也最低，僅有30%，這是因為還未到分化成苗階段材料便污染死亡了；滅菌時間為10 min時污染率最低，為23.3%，但其成苗率相對也較低，為56.7%，這是因為滅菌時間過長導(dǎo)致材料死亡；當滅菌時間為9 min時，初代成苗率最高，為90%，污染率也較低，為33.3%，說明最佳滅菌時間為9 min。

表1 不同滅菌時間初代培養(yǎng)成活率分析

2.2 不同培養(yǎng)基對‘白玉霓’不定芽生長的影響

不同激素濃度配比對‘白玉霓’不定芽生長的影響不一樣。由表2可知，4號培養(yǎng)基上‘白玉霓’不定芽增殖系數(shù)最高，為3，而且葉片綠色，長勢強；在5號培養(yǎng)基上增殖系數(shù)為2，長勢較強，說明高濃度的6-BA和較低濃度的IBA、KT搭配適合‘白玉霓’不定芽的生長，6號培養(yǎng)基后期出現(xiàn)褐化、死亡現(xiàn)象，說明激素濃度過高抑制了‘白玉霓’不定芽的生長。

表2 不同培養(yǎng)基對‘白玉霓’不定芽生長的影響

2.3 不同培養(yǎng)基對‘白玉霓’根系生長的影響

由表3可知，在1～5號培養(yǎng)基上均能生長出根系，而6號培養(yǎng)基上無根系生長，可能是與激素濃度過高導(dǎo)致不定芽生長差、后期褐化死亡有關(guān)。在5號培養(yǎng)基上生根情況最好，生根率達100%，且根系生長健壯。在4號培養(yǎng)基上生根情況較好，生根率達92%，且生長健壯。在1號、2號培養(yǎng)基上生根情況相差不大，生根情況均較差。

表3 不同培養(yǎng)基對‘白玉霓’生根的影響

3 結(jié)論與討論

外植體形態(tài)建成的關(guān)鍵就是植物生長調(diào)節(jié)劑的種類及濃度配比[2]，植物生長調(diào)節(jié)劑的選擇應(yīng)因植物基因型而異[3]。本研究發(fā)現(xiàn)激素濃度過高或過低均不利于‘白玉霓’不定芽和根系的生長，最佳初代及增殖培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA1.0+IBA0.1+KT0.1，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA1.0+IBA0.1+IAA0.1，而‘白玉霓’進瓶最佳滅菌時間為9 min。