42%噁草酮·莎稗磷·西草凈乳油的高效液相色譜分析

陳金紅

(安徽眾邦生物工程有限公司，安徽合肥 230088)

噁草酮是含氮雜環類除草劑，主要通過雜草幼芽或莖葉吸收，對萌芽期雜草尤為敏感，當雜草一發芽，芽鞘的生長就被抑制，其組織迅速腐爛，雜草死亡。莎稗磷是內吸性有機磷除草劑。藥劑通過根系吸收，傳導至幼芽或葉片，使植株生長受抑制，顏色轉為深綠，有時脫色，停止生長，最后枯死。西草凈屬選擇性內吸傳導型除草劑，能通過雜草根、葉吸收，并傳導至植株全身，抑制雜草光合作用，使葉片缺綠變黃而死亡[1]。這3 者復配可達到優勢互補，既擴大了封閉除草的殺草譜，而且降低了用藥量和用藥成本，延緩抗性。通過黑龍江、安徽、江蘇、湖南、廣東等地試驗，42%噁草酮?莎稗磷?西草凈乳油藥效均90%以上。此復配制劑分析方法未見公開報導，西草凈的相關分析方法有報道[2]，噁草酮原藥和莎稗磷乳油有國標分析法[3,4]。本試驗建立了在同一液相色譜條件下，同柱分離檢測噁草酮、莎稗磷和西草凈的方法。該方法操作簡單、快速、準確，可用于相關產品的質量控制。

1 試驗部分

1.1 試劑

甲醇：色譜純(德國默克公司)；水：新蒸二次蒸餾水。冰乙酸(≥99.5%)，分析純(國藥集團)；噁草酮標樣：已知質量分數98.8%(北京勤誠亦信科技開發有限公司)；西草凈標樣：已知質量分數98.3%(北京勤誠亦信科技開發有限公司)；莎稗磷標樣：已知質量分數98.9% (上海市農藥研究所有限公司)；42%噁草酮·莎稗磷·西草凈乳油樣品(由安徽眾邦生物工程有限公司配制)。

1.2 儀器

shimadzu LC-20A 高效液相色譜，具有紫外可變波長檢測器和島津配套色譜工作站Labsolution (日本島津公司)；clipse Plus C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；過濾器：有機相濾膜(孔徑0.45 μm)(上海安譜實驗科技股份有限公司)；超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.3 液相色譜操作條件

流動相：甲醇+水+冰乙酸=85+15+0.4 (體積比)，流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫(溫差變化應不大于2 ℃)；檢測波長：240 nm；進樣體積：20 μL。保留時間：西草凈3.9 min、莎稗磷7.2 min、噁草酮13.2 min (圖1)。

圖1 42%噁草酮·莎稗磷·西草凈乳油的高效液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標樣溶液的配制

稱取0.02 g (精確至0.000 2 g)噁草酮標樣、0.04 g(精確至0.000 2 g)莎稗磷標樣和0.02 5 g (精確至0.000 2 g)西草凈標樣于50 mL 容量瓶中，加入約40 mL甲醇，超聲波振蕩5 min 使標樣溶解，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

1.4.2 試樣溶液配制

稱取試樣0.2 g (精確至0.000 2 g)于50 mL 容量瓶中，加入約40 mL 甲醇，超聲波振蕩5 min 使標樣溶解，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

1.4.3 測定

在上述色譜操作條件下，待儀器基線穩定后，連續注入數針標樣溶液，直至相鄰2 針響應值變化小于1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.4.4 計算

將測得的2 針試樣溶液以及試樣前后2 針標樣溶液中噁草酮、莎稗磷和西草凈峰面積分別進行平均。試樣中噁草酮、莎稗磷和西草凈質量分數X1(%)按式⑴計算：

式中：A1為標樣溶液中噁草酮(或莎稗磷、西草凈)峰面積的平均值；A2為試樣溶液中噁草酮(或莎稗磷、西草凈)峰面積的平均值；m1為噁草酮(或莎稗磷、西草凈)標樣的質量，g；m2為試樣的質量，g；P為標樣中噁草酮(或莎稗磷、西草凈)的質量分數，%。

2 結果分析

2.1 檢測波長的選擇

從紫外掃描圖可知噁草酮、莎稗磷、西草凈的最大吸收波長分別約為240、210、220 nm，而在240 nm處噁草酮、莎稗磷和西草凈都有吸收，故將檢測波長確定為240 nm。

2.2 流動相的選擇

比較了甲醇、乙腈和水為流動相分離噁草酮、莎稗磷和西草凈的效果，結果發現以甲醇和乙腈為流動相，其分離效果無明顯差異，但考慮到乙腈相對價格高和實際生產中成本控制需要，選擇更經濟的甲醇和水做流動相。由于西草凈呈弱酸性，噁草酮、莎稗磷在酸性條件下穩定，為了使其峰形對稱且具有良好的分離度，采用甲醇+水+冰乙酸=85+15+0.4 (體積比)為流動相。

2.3 特異性

本試驗采用HPLC-DAD 峰純度分析法來鑒別噁草酮、莎稗磷和西草凈。試樣中的噁草酮、莎稗磷和西草凈HPLC-DAD 峰純度均大于998，有效成分處無其他物質干擾，符合定量分析要求。

2.4 精密度

取統一均勻的樣品，在上述色譜操作條件下進行分析，重復測定5 次，結果見表1。可見噁草酮、莎稗磷和西草凈標準偏差分別為0.055、0.129 和0.065，變異系數分別為0.58%、0.69%和0.54%，說明該方法精密度高，重現性很好。

表1 測定方法精密度試驗

2.5 方法的線性關系

按1.4.1 節標樣溶液的制備方法，分別配制噁草酮(或莎稗磷、西草凈) 5 個濃度級別的標準樣品，按照本方法中所示條件，待儀器穩定后，按照順序測定每個溶液中噁草酮(或莎稗磷、西草凈)的峰面積，取2 次測定的平均結果。以噁草酮(莎稗磷、西草凈)標準溶液的質量濃度為橫坐標，峰面積平均值為縱坐標，繪制標準曲線(表2)。可見，噁草酮為0.228 1~0.532 3 mg/mL、莎稗磷為0.544 9~1.271 5 mg/mL、西草凈為0.318 9~0.744 2 mg/mL 時，線性相關系數分別為0.999 8、0.999 7 和0.999 4，完全可以滿足定量分析的要求。

表2 噁草酮(莎稗磷、西草凈)的線性方程、線性范圍、相關系數

2.6 方法的準確度

稱取已知含量的42%噁草酮·莎稗磷·西草凈乳油(噁草酮含量9.49%、莎稗磷含量18.78%、西草凈含量12.02%)樣品5 份，分別添加已知含量的噁草酮、莎稗磷和西草凈標準品溶液，在上述色譜操作條件下分別進行分析，結果見表3。可見，噁草酮回收率為98.4~100.9%，平均回收率99.9%；莎稗磷回收率為98.1%~99.5%，平均回收率98.6%，西草凈回收率為98.4~100.8%，平均回收率100.0%，說明該方法回收率好，準確度高。

表3 方法的準備度試驗

3 結 論

本文采用高效液相色譜法建立了同時測定42%噁草酮·莎稗磷·西草凈乳油產品中3 種有效成分的方法。本方法能同時測定噁草酮、莎稗磷和西草凈含量。試驗結果表明，本方法對噁草酮、莎稗磷和西草凈復配制劑進行同柱分析，具有定量準確，重復性好，分析速度快，線性關系良好，操作簡便特點，是一種可行的分析方法。