云南省不同產(chǎn)地土壤有機質(zhì)對山珠半夏產(chǎn)量和質(zhì)量的影響研究

趙光國 趙玉琴 李建強 羅先平

（云南新興職業(yè)學(xué)院，云南 昆明 650501）

0 引言

半夏在我國云南省各地均有分布，是一種適應(yīng)性很強的植物，常生長于海拔1 500 ～2 300 m 的荒野山坡、路旁。但由于其經(jīng)濟價值極高，野生半夏藥材資源遭到了嚴(yán)重破壞，加之人工種植的半夏生長又比較緩慢，很難滿足市場需求，故云南省藥材市場常以山珠半夏代半夏入藥。山珠半夏為天南星科天南星屬植物山珠南星（Arisaema yunnanense Buchet）的干燥塊莖，常夏、秋兩季采挖，去除莖葉、外皮、須根，曬干后呈類扁球形或類球形，表面白色或類白色，頂端圓平，中部向內(nèi)凹陷，有明顯環(huán)紋，周圍有球形凸起及須根痕，下部鈍圓光滑。山珠半夏質(zhì)地堅硬，不易破碎，粉性，味辛，性溫，有毒，具有燥濕化痰、降逆止嘔、消痞散結(jié)之功效，用于治療痰多咳喘、嘔逆暈厥、頭痛胸悶等，是一味常用傳統(tǒng)中藥，不僅能供中醫(yī)臨床配方使用，也是藿香正氣水、參蘇宣肺丸等多種常用中成藥的原料。

山珠半夏的相關(guān)研究很少，特別是山珠半夏的種植方面的研究等還未見有報道。山珠半夏藥材已被載入《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2005 年版）第七冊（云YNZYC-0313—2010）。該標(biāo)準(zhǔn)收載的山珠半夏有效成分含量依照脂溶性浸出物測定法項下的熱浸法進行測定。然而，僅憑浸出物的含量很難全面評價山珠半夏原藥材的產(chǎn)品質(zhì)量，在指導(dǎo)臨床用藥和藥材質(zhì)量保證上也很難做到客觀評價。因此，筆者采用重鉻酸鉀容量法依據(jù)《土壤檢測 第6 部分：土壤有機質(zhì)的測定》（NY/T 1121.6—2006）測定云南省山珠半夏4 個不同產(chǎn)地土壤有機質(zhì)的含量，并采用高效液相色譜法測定山珠半夏中代表性成分鹽酸麻黃堿、琥珀酸、腺苷的含量，綜合評價藥材的質(zhì)量，為種植戶對種植基地的選擇提供一定的理論依據(jù)，為制訂合理的保護措施及規(guī)模化發(fā)展山珠半夏產(chǎn)業(yè)提供參考。

1 土壤有機質(zhì)含量測定

1.1 供試材料

1.1.1 材料。土壤來源于云南省山珠半夏4 個不同產(chǎn)地即昭通市（巧家縣）、曲靖市（宣威市）、楚雄彝族自治州（祿豐縣）、昆明市（尋甸回族彝族自治縣）。

1.1.2 試劑。重鉻酸鉀（分析純）；硫酸（分析純）；硫酸亞鐵（分析純）；鄰菲啰啉（CHgN·HO）指示劑；《分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法》（GB/T 6682—2008）中規(guī)定的三級水。

1.1.3 主要儀器設(shè)備。試驗所需儀器設(shè)備主要有電爐（1 000 W）、25.0 mL 酸式滴定管、硬質(zhì)試管（Φ25 mm×200 mm）、油浴鍋、鐵絲籠、溫度計 （300 ℃）、自動調(diào)零滴定管。

1.2 方法

采用重鉻酸鉀容量法，依據(jù)《土壤檢測 第6 部分：土壤有機質(zhì)的測定》（NY/T 1121.6—2006）對土壤有機質(zhì)進行檢測。

1.3 檢測結(jié)果

云南省山珠半夏4 個不同產(chǎn)地土壤有機質(zhì)的含量委托昆明市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院土壤肥料檢測中心檢測得到，結(jié)果如表1 所示。

表1 云南省四個不同產(chǎn)地土壤有機質(zhì)的含量

2 山珠半夏有效成分含量測定

2.1 供試材料

2.1.1 藥品。山珠半夏藥材來源于昭通市（巧家縣）、曲靖市（宣威市）、楚雄彝族自治州（祿豐縣）、昆明市（尋甸回族彝族自治縣）4 個不同產(chǎn)地，均為人工種植品種，經(jīng)云南新興職業(yè)學(xué)院基礎(chǔ)教研室教師胡德美鑒定為天南星科植物山珠南星的干燥塊莖。

2.1.2 試劑。甲醇（購自天津市致遠化學(xué)試劑有限公司，分析純）；乙腈（購自天津星馬克科技發(fā)展有限公司，色譜純）；娃哈哈純凈水；鹽酸麻黃堿（購自中國食品藥品檢定研究院，批號：171241-201809）；琥珀酸（購自中國食品藥品檢定研究院，批號：110896-201602）；腺苷（購自中國食品藥品檢定研究院，批號：110879-201703）。

2.1.3 儀器。島津LC-20A 高效液相色譜儀，LabSolutions 工作站；多功能粉碎機（永康市鉑歐五金制品有限公司）；超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司，型號：SB-4200DT）；電子天平（美國康州HZ 電子有限公司）。

2.2 樣品的制備

2.2.1 供試品的制備。準(zhǔn)確稱取各產(chǎn)地山珠半夏粉末（經(jīng)打粉機粉碎后過孔徑0.18 mm 篩）2.0 g 置于 150 mL 錐形瓶中，再量取20 mL 甲醇置錐形瓶中，定重，放入超聲清洗機超聲處理45 min，取出，放冷，補重，搖勻，靜置后用0.45 μm 濾膜過濾，取續(xù)濾液。

2.2.2 混合對照品溶液的制備。精密稱取琥珀酸（含量為100%）0.006 9 g，置于50 mL 的容量瓶中，加入甲醇定量至50 mL，搖勻，待用；精密稱取腺苷（含量為98%）0.009 5 g，置于50 mL 的容量瓶中，加入甲醇定量至50 mL，搖勻，待用。精密稱取鹽酸麻黃堿（含量為100%）0.021 0 g，置于100 mL 的容量瓶中，加入甲醇定量至100 mL，搖勻，待用。取50 mL 容量瓶，精密吸取14 mL上述已配制好的琥珀酸溶液于該容量瓶中，精密吸取10 mL 上述已配制好的腺苷溶液于該容量瓶中，精密吸取10 mL 上述已配制好的鹽酸麻黃堿溶液于該容量瓶中，得琥珀酸38.46 μg/mL、腺苷37.24 μg/mL、鹽酸麻黃堿42.00 μg/mL 的混合對照品溶液。

2.3 色譜條件

采 用SHIMADZU Shim-pack GIST C色 譜 柱 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；以乙腈（A）-水（B）為流動相，梯度洗脫（見表2）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為265 nm；柱溫為30 ℃；進樣量為10 μL。

表2 流動相梯度洗脫條件

2.4 檢測結(jié)果

圖1 體現(xiàn)了混合對照品中腺苷、琥珀酸、鹽酸麻黃堿這3 種成分的出峰情況，圖2 體現(xiàn)了供試品中腺苷、琥珀酸、鹽酸麻黃堿這3 種成分的出峰情況。通過保留時間的對比，可以看出圖2 中腺苷、琥珀酸、鹽酸麻黃堿3 種成分的峰（已標(biāo)注）的保留時間與圖1 中腺苷、琥珀酸、鹽酸麻黃堿3 種成分的峰（已標(biāo)注）的保留時間一致。這說明該方法對腺苷、琥珀酸、鹽酸麻黃堿這3 種成分的含量測定適用性良好，結(jié)果可靠。

2.4.1 線性關(guān)系考察。精密吸取2.2.2 混合對照品溶液10、12、14、16、18、20、22 μL，根據(jù)表2色譜條件測定峰面積，以進樣量（μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，得出3 種成分的回歸方程、相關(guān)系數(shù)與線性范圍（見表3），3 種曲線的回歸曲線、線性相關(guān)系數(shù)見圖3、圖4、圖5。

表3 腺苷、琥珀酸、鹽酸麻黃堿3 種成分的回歸方程、相關(guān)系數(shù)與線性范圍

圖1 腺苷、琥珀酸、鹽酸麻黃堿混合對照品高效液相色譜圖

2.4.2 供試品中腺苷、琥珀酸、鹽酸麻黃堿的含量測定。精密吸取2.2.1 制備的供試品溶液10 μL，平行進樣2 次，根據(jù)表2 色譜條件測定峰面積，按照外標(biāo)法-標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算得出4 個產(chǎn)地山珠半夏中3個代表性成分的含量（見表4）。

3 云南省四個不同產(chǎn)地山珠半夏產(chǎn)量

云南省4 個不同產(chǎn)地山珠半夏產(chǎn)量檢測結(jié)果見表5。

4 結(jié)論與討論

云南省山珠半夏4 個不同產(chǎn)地土壤有機質(zhì)含量分別為昭通市（巧家縣）41.10 g/kg、曲靖市（宣威市）59.56 g/kg，楚雄彝族自治州（祿豐縣）61.20 g/kg、昆明市（尋甸回族彝族自治縣）66.12 g/kg；每667 m山珠半夏產(chǎn)量分別為昭通市（巧家縣）350 kg、曲靖市（宣威市）360 kg、楚雄彝族自治州（祿豐縣）370 kg、昆明市（尋甸回族彝族自治縣）400 kg；山珠半夏有效成分腺苷、琥珀酸、鹽酸麻黃堿的總含量分別為昭通市（巧家縣）1.93 mg/g、曲靖市（宣威市）2.22 mg/g、 楚雄彝族自治州（祿豐縣）2.42 mg/g、昆明市（尋甸回族彝族自治縣）2.66 mg/g。根據(jù)所測結(jié)果的數(shù)據(jù)進行分析，云南省4 個產(chǎn)地山珠半夏隨著土壤有機質(zhì)含量的升高，產(chǎn)量和3 種有效成分的總含量也隨之相應(yīng)升高。因此，土壤有機質(zhì)對山珠半夏產(chǎn)量和3 種有效成分的總含量具有一定的影響作用。故在選取山珠半夏的種植基地時，種植戶可將土壤有機質(zhì)含量作為一個參考條件進行考慮。

圖2 腺苷、琥珀酸、鹽酸麻黃堿供試品高效液相色譜圖

圖3 腺苷的回歸曲線、回歸方程、相關(guān)系數(shù)

圖4 琥珀酸的回歸曲線、回歸方程、相關(guān)系數(shù)

圖5 鹽酸麻黃堿的回歸曲線、回歸方程、相關(guān)系數(shù)

表4 4 個產(chǎn)地山珠半夏腺苷、琥珀酸、鹽酸麻黃堿含量、平均含量及RSD 值 mg/g

表5 4 個不同產(chǎn)地山珠半夏產(chǎn)量