早發重度子癇前期患者胎盤組織血清M-CSF、TNF-α表達及臨床意義

劉艷云，鄢曉燕

(鄂東醫療集團市婦幼保健院/湖北理工學院附屬醫院,湖北 黃石 435003)

0 引言

早發型重度子癇前期(pre-eclampsia，PE) 一般認為是指≤28 ～34 周為重度子癇前期，其中孕周不足28 周者達70%，孕周不足20 周甚至不足12 周發生率較低[1-2]。有學者認為：早發型子癇前期與子宮胎盤灌注異常、胎盤組織功能受損有關，被稱為胎盤子癇前期；晚發型子癇前期作為母體胎盤滋養細胞侵入、過度炎性在機體的全身性反應，被稱為母體PE，具有潛在慢性炎癥條件的孕婦中發生頻率更高[3]。

有文獻報道：血清和胎盤組織中M-CSF 升高，促使巨噬細胞明顯增加，滋養細胞凋亡，螺旋小動脈重塑受阻，致胎盤血管內皮缺血缺氧，而使TNF-α 分泌增加，造成內皮細胞損傷及功能紊亂，是子癇前期的發病機制[4]。臨床關于M-CSF 與PE 發展機制的研究，取得了重大進展，目前研究對影響早發型重度PE 發展的機制尚不明確，對于胎盤組織中M-CSF 與TNF-α 的相互作用機制與早發型重度PE 發展的研究報道較少，王芝琴等研究認為TNF-α 表達水平可以評估患者疾病病情的嚴重程度[5]。本研究對早發重度子癇前期胎盤組織中M-CSF、TNF-α 的水平表達及對其相關角度進行研究，分析它們之間的相互協同作用機制，探討其對胎盤滋養細胞侵入、過度炎性反應的影響，對早發型重度PE 的病理機制與不良妊娠結局發生率的相關性進行分析。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2017年1月至2018年12月住院治療的子癇前期患者，早發重度PE 組患者91例、晚發重度PE 組患者64例和同意參與研究的正常妊娠孕婦60例為研究對象，兩組孕婦均為初產婦，單胎妊娠，年齡21～29 歲，平均（23.5±6.7）歲。依據《婦產科學，第8 版》診斷標準，排除：糖尿病、慢性高血壓、腎臟疾病、心血管等孕前相關病史。研究對象圍產期保健記錄數據（研究對象的年齡、身高、體重和營養狀態）比較P>0.05，差異無統計學意義，具備研究條件。本研究通過醫院倫理委員會審查備案，征得患者知情同意簽署同意書，保護其隱私和匿名權，所有資料僅用于研究。

1.2 方法

準備胎盤組織標本，檢驗采用免疫組化法，將小鼠抗人TNF-α 單克隆抗體試劑或兔抗人M-CSF單克隆抗體，室內4oC 溫下孵育1～2h；加入山羊抗小鼠／兔IgG 用PBS 洗滌3 次后蘇木素色劑復染5min，中性樹膠固定封片[6]。高倍鏡檢視野觀察M- CSF 的陽性顆粒為棕褐色，它主要在滋養層細胞的細胞質中表達。TNF-α 為棕黃色陽性顆粒，主要在細胞漿或細胞膜內表達，以陽性細胞數與滋養細胞總數評估陽性與染色強度之和的比率；采集10 ml 孕婦空腹靜脈血分離血清，用于M-CSF、 TNF-α 等生化指標檢測。分析M-CSF 和TNF-α在胎盤組織中的表達關系，與不良妊娠結局發生率的相關性。

1.3 統計學處理

采用SPSS 22.0統計軟件進行統計處理，M-CSF、TNF-α 陽性表達率采用例的百分比表示；兩兩比較M-CSF 與TNF-α 在不同PE 組患者胎盤組織陽性表達率，并對相關性進行分析，采用F 檢驗；比較早發重度子癇前期與晚發重度PE 和正常妊娠孕產婦不良妊娠結局發生率，采用t/χ2檢驗，當P<0.05 時差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胎盤組織M-CSF、TNF-α 表達比較早發重度PE 組、晚發重度PE 組與正常妊娠組中M-CSF 的表達F=42.47，P<0.01；陽性表達率比較F=97.36，P<0.001； TNF-α 的表達F=64.84，P<0.01；陽性表達率比較F=84.30，P<0.001。見表1。

2.2 M-CSF 與TNF-α 在胎盤組織中的相關性分析 M-CSF 與TNF-α 在子癇前期患者胎盤組織陽性表達r=47.01，P<0.001，相互之間表達關系存在正相關。見表2。

表2 M-CSF 與TNF-α 在胎盤組織陽性表達的相關性分析

3 討論

2.3 早發重度PE 組與其它妊娠組不良妊娠發生率比較P<0.01，差異有統計學意義，說明早發重度PE M-CSF、TNF-α 表達程度與不良妊娠結局的發生率高度相關。見表3。

表3 早發重度PE 組與其他妊娠組不良妊娠結局發生率比較[n(%)]

子癇前期的病理機理變化十分復雜，有研究認為胎盤組織滋養細胞侵潤能力不足，使母體子宮螺旋動脈的轉運功能異常，導致子宮胎盤灌注不良[12]，所以過度的炎癥反應致使機體組織內皮細胞活化功能障礙，是子癇前期主要病理生理特征，是導致PE 發病及影響其嚴重程度的主要因素。

M-CSF 是由子宮胎盤組織內膜、蛻膜產生和分泌的，滋養細胞侵襲不足及血管轉化不良影響其分泌量，其主要生物學活性表現為IgA 介導的吞噬作用、細胞毒性（ADCC）效應增強及細胞表面粘附分子表達水平[8]，有研究檢測子癇前期M-CSF 在PE 血清和胎盤組織的表達水平明顯增高，以致胎盤缺血、缺氧，引起先兆子癇。研究發現，由于M-CSF 異常增生，巨噬細胞的表達和蛻膜的樹突狀細胞浸潤，使血管重塑過程產生胎盤缺血缺氧，逐步改變整個生理進程[9]。

TNF-α 作為一種由胎盤組織絨毛中產生單核因子，參與胎盤內皮細胞凋亡過程，作用于機體誘導促炎性細胞因子增加，在白細胞介素-6(Interleukin-6)、白 介 素-8(Interleukin-8) 和趨化蛋白(Chemotactic protein) 的作用下，促使血管細胞粘附分子和內皮細胞活化標志物細胞間粘附分子的表達增強，TNF-α 通過NF-KB 信號通路誘導M-CSF 的分泌異常導致早發型重度PE。TNF-α 釋放機制，認為其作用于血管細胞促使炎性細胞因子的異常增生，是發生不良妊娠結局的重要因素，研究證實TNF-α 通過NF-KB 信號通路誘導M-CSF 的分泌異常導致早發型重度PE，且早發型重度PE 比較晚發型重度PE 不良妊娠發生率影響更大[10]。TNF-α 與子癇前期的嚴重程度相關，而M-CSF 可能刺激其靶細胞釋放TNF-α、IL-1 等炎性細胞通過孕婦血液循環，致使大量壞死滋養細胞進入母體，導致機體內皮細胞異常增生，炎性細胞的毒性反應是引起孕婦的圍產期疾病發生的重要因素[11]。妊娠期高血壓是早發型重度子癇前期并發癥，內皮細胞損傷致使血栓素分泌增加，而使血壓惡性增高，32 周以下早發型重度PE 是高圍生期新生兒死亡率和不良妊娠結局的重要時段。一般認為重度PE 患者24hpro 定量超過5g 需要終止妊娠, 筆者認為可根據孕婦的孕周、臨床癥狀等綜合考慮, 在不超過5 g 的情況時,采取積極的期待治療措施, 盡量延長孕婦的孕周, 改善新生兒的預后, 而當24 h 尿蛋白定量>5 g 且妊娠>34 周時,為了降低不良妊娠結局發生,可選擇終止妊娠[12]。

本研究結果顯示：早發重度PE 組與晚發重度PE 組和正常妊娠組中M-CSF、TNF-α 表達水平比較P<0.01，有統計學意義；M-CSF 的陽性表達率和TNF-α 的陽性表達率比較P<0.001，相關分析PE胎盤組織M-CSF 和TNF-α 陽性表達呈明顯的正相關系（r=47.01，P<0.001）；早發型重度子癇前期不良妊娠結局發生率均高于晚發重度PE 組與正常妊娠P<0.05，差異有統計學意義。

早發型子癇前期孕婦胎盤中M-CSF 和TNF-α的表達水平，提示早發型重度 PE 的胎盤損害程度，相關性分析顯示它們之間呈正相關，協同參與了早發重度 PE 的發生發展，說明兩者可能在早發型重度PE 的發病機制中存在相互作用。隨著早發重度 PE 的發生發展，對胎盤的損害程度加重，不良妊娠發生率P<0.05，差異有統計學意義。因此進一步研究M-CSF 和TNF-α 在子癇前期孕婦胎盤中的表達關系，為早發重度子癇前期的預防和治療提供理論依據具有重要的臨床意義。