液質(zhì)聯(lián)用測(cè)試尿樣中的氟胺酮

＊張婷 林必成

（福建正中司法鑒定所 福建 350003）

1.氟胺酮的來源及性狀

國(guó)內(nèi)最早于1987年[4]報(bào)道了氟胺酮合成方法，其目的是作為麻醉藥物研究，氟胺酮的化學(xué)合成過程與氯胺酮相似。國(guó)外在2014年也有氟胺酮作為氯胺酮的衍生物進(jìn)行研究合成的報(bào)道[5]。

氟胺酮的分子式為C13H10FNO，分子量為221.2，化學(xué)名：2-(2-氟苯基)-2-甲基氨基-環(huán)己酮[3]，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1，其外觀為白色結(jié)晶粉末，與氯胺酮相似。氟氨酮作為氯胺酮的替代物或摻入氯胺酮之中被犯罪分子進(jìn)行非法吸食，在（氟氨酮被列管前）以期逃避法律制裁。

圖1 氟胺酮結(jié)構(gòu)式

2.實(shí)驗(yàn)部分

(1)儀器

島津高效液相色譜LC-20AD與三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀LCMS-8045聯(lián)用系統(tǒng)。

(2)試劑

①氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)溶液（1mg/mL）；

②氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：將1mg/mL氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇稀釋至0.1mg/mL作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，實(shí)驗(yàn)中所用其他濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液均由此標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用純水稀釋得到；

③乙腈（默克，HPLC）；

④甲醇（默克，HPLC）；

⑤甲酸（阿拉丁，HPLC）；

⑥純水（屈臣氏）。

(3)氟胺酮液質(zhì)聯(lián)用方法優(yōu)化

①用LCMS-8045做Q3掃描（圖2氟胺酮一級(jí)質(zhì)譜圖），一級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)質(zhì)量范圍m/z100～300，確定氟胺酮母離子為222.1。

圖2 氟胺酮一級(jí)質(zhì)譜圖

②使用設(shè)備軟件自動(dòng)優(yōu)化產(chǎn)物離子及MRM參數(shù)（圖3氟胺酮產(chǎn)物離子掃描質(zhì)譜圖），確定氟胺酮產(chǎn)物離子及電壓（表1氟胺酮MRM參數(shù)）。

圖3 氟胺酮產(chǎn)物離子掃描質(zhì)譜圖

表1 氟胺酮MRM參數(shù)

(4)樣品制備

①標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

將0.1mg/mL的氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用水逐級(jí)稀釋成濃度為0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

②樣品前處理

采集正常人尿樣加標(biāo)樣分別配制成濃度為1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的加標(biāo)樣后離心，取上清液過0.22μm微孔濾膜后直接用于液質(zhì)分析。空白基質(zhì)采用尿樣不加標(biāo)的方式，其余處理步驟相同。

(5)實(shí)驗(yàn)室測(cè)試條件

①LC（液相）條件

液相（LC）：LC-20AD；

液相分析柱：島津Shimadzu Shim-pack GIST C18（1.9μm×2.1mm×100mm）；

流動(dòng)相：A-0.1%甲酸：水，B-乙腈；

洗脫：梯度洗脫（梯度洗脫條件見表2）；初始流動(dòng)相：80%流動(dòng)相A，20%流動(dòng)相B；

表2 氟胺酮梯度洗脫條件

流速：0.3mL/min；

進(jìn)樣體積：2μL；

柱溫：40℃。

②MS（質(zhì)譜）條件

質(zhì)譜儀（MS）：LCMS-8045；

分析源：ESI（+）離子源；

接口電壓（離子源）：4.5kV；

離子源霧化氣：氮?dú)?.0L/min；

離子源干燥氣：氮?dú)?5L/min；

離子源碰撞氣：氬氣；

DL管（脫溶劑）溫度：250℃；

加熱器溫度：400℃；

質(zhì)譜掃描方式：MRM（多反應(yīng)監(jiān)測(cè)）。

3.結(jié)果與討論

(1)標(biāo)準(zhǔn)樣品的MRM色譜圖

10ng/mL氟胺酮加標(biāo)樣MRM色譜圖如圖4所示。

圖4 10ng/mL氟胺酮加標(biāo)樣MRM色譜圖

(2)線性關(guān)系

將濃度為1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的加標(biāo)樣按2.5的測(cè)定條件進(jìn)行檢測(cè)，以尿液匯總的不同濃度含量氟胺酮為橫坐標(biāo)，測(cè)得的氟胺酮峰面積為縱坐標(biāo)，外標(biāo)法（7點(diǎn)）建立校準(zhǔn)曲線，如圖5所示。尿樣中的氟胺酮在1～100ng/mL的濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)見表3。

表3 氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖5 氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

(3)檢出限和定量限

加標(biāo)濃度為1ng/mL的尿樣平行測(cè)定6份，儀器對(duì)氟胺酮尿樣基質(zhì)的方法檢出限為0.05ng/mL，定量限為0.195ng/mL，表明該方法具有良好的靈敏度。氟胺酮的檢出限和定量限見表4。

表4 氟胺酮檢出限和定量限

(4)精密度實(shí)驗(yàn)

濃度為5ng/mL、20ng/mL、100ng/mL的加標(biāo)樣依次進(jìn)樣，平行測(cè)定6次，氟胺酮在不同濃度下的保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.25%～0.77%之間，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.31%～3.38%之間，本液質(zhì)聯(lián)用儀的精密度良好（見表5）。

表5 氟胺酮保留時(shí)間和峰面積的重復(fù)性結(jié)果（n=6）

4.結(jié)論

本文主要研究了尿樣中氟胺酮的液質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)的前處理方法及檢測(cè)條件；在確定的檢測(cè)條件下對(duì)方法的檢出限、定量限、精密度及線性進(jìn)行了考察。儀器對(duì)氟胺酮尿樣基質(zhì)的方法檢出限為0.05ng/mL，定量限為0.195ng/mL，表明該方法具有良好的靈敏度；尿樣中的氟胺酮在1～100ng/mL的濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.9993；氟胺酮在不同濃度下的保留時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在0.31%～ 3.38%和0.25%～0.77%之間，儀器具有良好的精密度。