高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定小鼠肝、肺、腎中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白含量

高建萍，張 揚(yáng)，邢芳毓，王俊杰，徐 軍，孔英俊，羅 希，張貴鋒

(1.中國科學(xué)院過程工程研究所生化工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100190；2.中國科學(xué)院大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院，北京 100049)

膠原蛋白是由3條鏈形成的右手螺旋結(jié)構(gòu)，是動物組織細(xì)胞外基質(zhì)中的主要結(jié)構(gòu)蛋白，約占蛋白總量的25%～30%[1]，廣泛存在于皮膚、骨骼、跟腱及結(jié)締組織中[2-4]，是肝、肺、腎等內(nèi)臟的重要組成部分[5-7]。目前，文獻(xiàn)[8-9]報道的膠原蛋白有28種，不同組織中的蛋白類型及含量各不相同，不同類型膠原蛋白的含量變化與年齡、疾病及其生物機(jī)能息息相關(guān)。肝硬化組織中膠原蛋白含量是正常肝組織的4～7倍，最高可達(dá)近10倍。Ⅰ型和Ⅲ型膠原是肝包膜、門靜脈間質(zhì)、竇周間隙和纖維隔膜中最豐富的膠原。在正常新鮮的肝臟組織中，Ⅰ型/Ⅲ型膠原蛋白的比例小于1，而在肝硬化組織中的比例顯著增大[10-11]；Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白約占肺膠原蛋白總量的90%，肺纖維化組織中Ⅰ型膠原蛋白含量及Ⅰ型/Ⅲ型膠原蛋白比例顯著增大[9,12]；有研究表明[13]，在腎炎和腎小球硬化的過程中，Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的沉積均顯著增加。因此，建立組織中不同類型膠原蛋白的定量檢測方法可為相關(guān)疾病的診斷提供理論基礎(chǔ)。

不同來源、不同類型的膠原蛋白結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)無明顯差異，難以實(shí)現(xiàn)不同類型膠原蛋白的定量分析[14-15]。傳統(tǒng)的羥脯氨酸法是測定膠原蛋白水解液中羥脯氨酸的含量，再換算為膠原蛋白含量，但僅用于測定膠原蛋白總量，無法定量分析不同類型的膠原蛋白，且羥脯氨酸在膠原蛋白中的比例受物種、年齡和組織部位的影響[16]?！?br>