基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接探討桿努盡煙治療慢性支氣管炎的作用機制

袁桃花，黃雨霄，殷智鑫，石 雪，胡 盼，孫見飛，劉 華，徐 紅，吳 寧*

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2.貴州醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；3.貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

慢性支氣管炎是一種常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，臨床多以反復(fù)的咳嗽、咳痰或伴喘息的慢性病程為特征[1-2]，常用抗生素、氣管舒張藥物等西藥進行治療，起效快且療效明顯，但慢性支氣管炎病程長且易復(fù)發(fā)，長期服用，副作用較大[3]。中草藥有整體調(diào)節(jié)、多途徑、多環(huán)節(jié)的特點，療效持久，短期內(nèi)病癥復(fù)發(fā)現(xiàn)象少，毒副作用小，可長期堅持服用，使其在治療慢性支氣管炎方面顯示出明顯優(yōu)勢[4]。桿努盡煙(苗藥名Cherh nex jenl vieeb)是貴州凱里苗族地區(qū)治療慢性支氣管炎的特色藥方，藥源豐富、應(yīng)用范圍廣、歷史長、療效顯著，但其作用機制尚不明確，仍處于經(jīng)驗用藥階段[5-6]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的整體性和系統(tǒng)性與中草藥特征不謀而合，為中藥方劑潛在活性成分與作用靶點的深入研究開辟新手段[7-8]。因此，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，獲得桿努盡煙治療慢性支氣管炎的主要活性成分、關(guān)鍵靶標(biāo)及信號通路，并構(gòu)建慢性支氣管炎大鼠模型，對篩選出的關(guān)鍵通路中重要靶點進行動物實驗驗證，探究苗藥桿努盡煙治療慢性支氣管炎的分子機制，為深入研究桿努盡煙治療慢性支氣管炎的作用機制奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 動物 SPF級SD大鼠30只，雄性，體質(zhì)量(200±20)g，購自重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司，實驗動物使用許可證號SYXF(黔)2018-0001。

1.2 試劑與藥物 貴煙黃果樹藍佳品(焦油量10 mg，煙氣煙堿量0.9 mg，一氧化碳量12 mg，貴陽卷煙廠)；桿努盡煙全草采自貴州省凱里市爐山鎮(zhèn)，經(jīng)貴陽中醫(yī)藥大學(xué)潘爐臺教授鑒定為吊石苣苔屬植物吊石苣苔LysionotuspauciflorusMaxim.。桂龍咳喘寧膠囊(大連天山藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字Z20050149)。TNF-α酶聯(lián)免疫試劑盒(批號A38281155)、NF-κB p65兔抗大鼠一抗(批號3560144117)、qPCR反應(yīng)試劑盒(批號Q311-02，南京諾唯贊生物科技股份有限公司)。

1.3 儀器 SynGeneTM凝膠成像系統(tǒng)(美國Synoptics公司)；ABI StepOnePlusTM實時熒光定量PCR儀(美國Thermo公司)。

2 方法

2.1 桿努盡煙潛在活性成分篩選 通過TCMSP(http://tcmspw.com/tcmsp.php)及化學(xué)專業(yè)數(shù)據(jù)庫(http://www.organchem.csdb.cn/scdb/default.htm?nCount=13303008)發(fā)掘桿努盡煙的化學(xué)成分，文獻資料進行補充，根據(jù)成分的吸收(Absorption)、分布(Distribution)、代謝(Metabolism)及排泄(Excretion)，即ADME參數(shù)篩選有效成分[7]，篩選條件為藥物口服生物利用度(OB)≥30%，藥物相似性(DL)≥0.18，結(jié)合文獻資料保留對慢性支氣管炎有效、活性大的成分[5]，利用PubChem數(shù)據(jù)庫(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/#query=Nevadensia)對篩選出的藥物活性成分的SMILES化學(xué)式進行補充。

2.2 活性成分潛在靶點預(yù)測與篩選 采用TCMSP數(shù)據(jù)庫預(yù)測篩選桿努盡煙有效成分作用靶點，通過SwissTargetPredicition數(shù)據(jù)庫(http://www.swisstargetprediction.ch/)補充空缺成分靶點，并輸入UniProt數(shù)據(jù)庫(https://www.uniprot.org/)，限定物種為人，將名稱校正，獲取UniProt號。

2.3 “桿努盡煙活性成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將活性成分與靶點整理后導(dǎo)入Cytoscape 3.6.1軟件，構(gòu)建“桿努盡煙活性成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)圖。

2.4 慢性支氣管炎靶點檢索 以“Chronic bronchitis”為關(guān)鍵詞，通過TTD數(shù)據(jù)庫(http://db.idrblab.net/ttd/)、Durgbank數(shù)據(jù)庫(https://www.drugbank.ca/)、DisGeNT數(shù)據(jù)庫(https://www.disgenet.org/)檢索慢性支氣管炎靶點，取交集并去重，獲得UniProt號。

2.5 桿努盡煙活性成分治療慢性支氣管炎作用靶點預(yù)測 利用藥物靶點和慢性支氣管炎靶點，通過VENNY 2.1軟件繪制Venn圖，將圖中交集靶點輸入String Version 10.5數(shù)據(jù)庫(https://string-db.org/)，限定物種為人，并隱藏出現(xiàn)的游離蛋白，獲得桿努盡煙-慢性支氣管炎蛋白互作(PPI)網(wǎng)絡(luò)圖，并利用Cytoscape Version 3.6.1軟件進行可視化分析。

2.6 分子對接 利用sybyl-x 2.0進行配體分子的前處理，小分子加Gasteiger-Huckel電荷，設(shè)置最大優(yōu)化步數(shù)10 000，初始優(yōu)化的能量梯度收斂條件0.005 kcal/(mol*A)，能量優(yōu)化算法為Powell，其他值為系統(tǒng)默認(rèn)。靶標(biāo)蛋白前處理在sybyl-x2.0中進行：蛋白質(zhì)分子全部除去晶體水、加氫并除去占據(jù)結(jié)合位點的共結(jié)晶配體分子，補上缺失氨基酸殘基及末端殘基，設(shè)定氨基酸質(zhì)子化狀態(tài)，賦予力場為AMBER7 FF99，Kollman電荷。利用AutoDockTools(ADT)生成對接所需的pdbqt文件，最后用AutoDock-vina軟件計算得到九個優(yōu)勢結(jié)合構(gòu)象，以打分最高(結(jié)合能力最強的構(gòu)象)記錄各配體分子與靶標(biāo)間的結(jié)合能大小[9]。

2.7 關(guān)鍵靶點的富集分析 用DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫(http：//www.david.niaid.nih.gov)對上述關(guān)鍵靶點進行GO富集和KEGG通路分析，其中GO注釋包括生物學(xué)過程(BP)、細(xì)胞組成(CC)和分子功能(MF) 模塊，KEGG通路篩選以P<0.05作為顯著性強的臨界篩選，以Count值降序排列，列出桿努盡煙活性成分治療慢性支氣管炎的前15位關(guān)鍵通路。

2.8 分組與造模 SD大鼠分為正常對照組，模型組，桿努盡煙高、低劑量組，陽性藥物組(桂龍咳喘寧)，每組6只。將正常對照組置于無煙環(huán)境中飼養(yǎng)，其余各組均采用煙熏聯(lián)合脂多糖氣管注射法復(fù)制慢性支氣管炎大鼠模型[10]。制備被動吸煙箱(55 cm×45 cm×35 cm，上壁留有通氣孔)。第1天和第14天以8%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉大鼠后，氣道內(nèi)注射200 mg/mL脂多糖溶液0.2 mL，手術(shù)當(dāng)天不作煙熏，其余時間各組大鼠每次用4只香煙煙熏，每天2次，每次30 min。造模28 d后，每組隨機取1只大鼠，用4%多聚甲醛灌注處理，取左肺上葉制作HE切片，鏡下觀察大鼠肺組織病理改變，驗證造模成功。

2.9 桿努盡煙水提液制備 取2 kg桿努盡煙，蒸餾水浸泡，于90 ℃電熱恒溫水箱中連續(xù)浸提12 h，收集并過濾浸提液；合并浸提液，濃縮至生藥量為2.5 kg/L，分裝滅菌，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.10 給藥 造模結(jié)束后第2天開始給藥，桿努盡煙高、低劑量組大鼠分別灌胃給予桿努盡煙水提液8、2 g/kg(按生藥量計)，陽性藥物組灌胃給予桂龍咳喘寧1 g/kg，正常對照組及模型組灌胃給予等量生理鹽水，每天1次，連續(xù)給藥28 d。

2.11 肺組織采集 麻醉大鼠，心臟取血，打開胸腔，取下肺組織，將左肺上葉固定于4%多聚甲醛中，用于制作HE切片；另取右肺經(jīng)RNA保存液處理后置于-80 ℃冰箱保存，用于后續(xù)指標(biāo)的檢測。

2.12 病理組織切片制作 操作流程為常規(guī)脫蠟→染色→水洗→分化→漂洗→脫水Ⅰ→復(fù)染→脫水Ⅱ→烤片→中性樹膠封片→顯微鏡下觀察支氣管及肺組織病理形態(tài)學(xué)變化。

2.13 ELISA法檢測肺組織中TNF-α水平 取50 mg肺組織，置于研缽中，用眼科剪快速剪碎組織塊，加入PBS，充分研磨，4 ℃、5 000 r/min離心10 min，取上清液，根據(jù)ELISA試劑盒說明書操作，檢測細(xì)胞因子TNF-α水平。

2.14 RT-qPCR檢測肺組織NF-κBmRNA表達 Trizol法提取大鼠肺組織勻漿總RNA，取1 μg RNA進行逆轉(zhuǎn)錄，按說明書合成cDNA。內(nèi)參照GADPH、NF-κB引物序列見表1。按qPCR反應(yīng)試劑盒說明書進行反應(yīng)，反應(yīng)條件為預(yù)變性95 ℃ 5min；循環(huán)反應(yīng)為95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，40個循環(huán)；熔解曲線為95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，95 ℃ 15 s，采用2-△△CT法進行相對定量分析，以GAPDH為內(nèi)參。

表1 引物序列

2.15 Western blot檢測NF-κB蛋白表達 實驗操作步驟依次為提取蛋白→BCA法進行蛋白濃度定量→蛋白變性→SDS-PAGE電泳后轉(zhuǎn)膜→5%脫脂奶粉封閉→加入一抗，4 ℃過夜→TBST洗膜3次→加入二抗，室溫下振蕩2 h→洗滌后將PVDF膜置于ECL混合液中→應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)對掃描圖像的目的條帶→進行灰度分析。

3 結(jié)果

3.1 桿努盡煙潛在活性成分篩選結(jié)果 去除重復(fù)成分后，共得到8種，同時滿足OB≥30%和DL≥0.18或結(jié)合文獻報道對慢性支氣管炎有效且滿足其中1個條件的桿努盡煙活性成分共5種，見表2。

表2 桿努盡煙潛在化學(xué)成分

3.2 繪制“桿努盡煙活性成分-關(guān)鍵靶點”網(wǎng)絡(luò)圖 共獲得5種活性成分靶點514個，刪除重復(fù)并去除假陽性項，整合得到苗藥桿努盡煙作用靶點共340個。“桿努盡煙活性成分-關(guān)鍵靶點”網(wǎng)絡(luò)圖(圖1)顯示，5種關(guān)鍵成分共同作用的靶點有8個，包括11號染色體的基因(BACE1)、誘導(dǎo)型—氧化氮合酶(NOS2)、蛋白酪氨酸磷酸酶—非受體1型(PTPN1)、花生四烯5-脂氧合酶基因(ALOX5)、雌激素受體2(ESR2)等，其中ALOX5、PTPN1等能介導(dǎo)慢性支氣管炎炎癥反應(yīng)，提示這些靶點可能是桿努盡煙的作用于慢性支氣管炎的靶點。

注：LPM-1～LPM-5分別為1-(4-羥基-3-甲氧苯基)乙酮、3-(4-羥基-3-甲氧苯基)敗脂酸、β-谷甾醇、石吊蘭素、熊果酸。菱形代表桿努盡煙成分，橢圓形代表靶點；自由度越大，顏色越深。圖1 “桿努盡煙活性成分-關(guān)鍵靶點”網(wǎng)絡(luò)圖

3.3 桿努盡煙活性成分治療慢性支氣管炎作用靶點預(yù)測 檢索整合得到的慢性支氣管炎靶點共103個，將其與桿努盡煙活性成分作用靶點進行基因映射，共得潛在作用靶點23個，見圖2。

圖2 “桿努盡煙-慢性支氣管炎”基因映Venn圖

3.4 桿努盡煙-慢性支氣管炎蛋白互作(PPI)網(wǎng)絡(luò)分析 桿努盡煙-慢性支氣管炎蛋白互作(PPI)網(wǎng)絡(luò)圖中(圖3A)，去除2個游離蛋白，該圖包括23個節(jié)點，55條邊，平均自由度為4.78，其中互作蛋白評分≥0.9的包括NR3C2-NR3C1、CYP1B1-ADORA1、NR3C2-PGR、CHRM2-ADORA3等。利用Cytoscape Version 3.6.1軟件對PPI網(wǎng)絡(luò)圖進行可視化，得到桿努盡煙-慢性支氣管炎蛋白互作(PPI)網(wǎng)絡(luò)圖(圖3B)，該圖包括21個節(jié)點，平均自由度為5.24，得到自由度大于平均自由度的的靶點共7個，按自由度從高到低排序依次為ALB、CYP1A1、CYP1B1、ADORA1、PGR、NR3C1、GSTP1、CYP1A2，見表3。

圖3 桿努盡煙-慢性支氣管炎蛋白互作(PPI)網(wǎng)絡(luò)圖

表3 PPI網(wǎng)絡(luò)關(guān)鍵節(jié)點及其拓?fù)鋮?shù)

3.5 桿努盡煙-慢性支氣管炎靶點網(wǎng)絡(luò)圖 桿努盡煙-慢性支氣管炎靶點網(wǎng)絡(luò)圖(圖4)中包含節(jié)點74個，靶標(biāo)37個，其中ALOX5、多藥耐藥性蛋白(ABCB1)靶點的介數(shù)較大，被預(yù)測為桿努盡煙治療慢性支氣管炎的靶點，其次是腺苷受體A3(ADORA3)、核受體亞家族3C組成員1/2(NR3C1/2)、膽堿能受體毒蕈堿2(CHRM2)、絲氨酸蛋白酶抑制劑家族成員6(SERPINA6)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)、細(xì)胞色素P450家族1亞家族B成員1(CYP1B1)等發(fā)揮治療慢性支氣管炎的可能性較大。

圖4 桿努盡煙-慢性支氣管炎靶點網(wǎng)絡(luò)圖

3.6 分子對接分析 利用AutoDock-vina軟件對桿努盡煙的5種主要活性成分與篩選出的關(guān)鍵靶點(ALOX5、CYP1A1、CYP1B1、TNF-α、NF-κB、ADORA1)進行分子對接，對接模式見圖5，對接親合能量值見表4。桿努盡煙的成分中熊果酸、β谷甾醇、石吊蘭素分別與TNF-α和NF-κB親和能量值低，其中熊果酸親和力最強。3-(4-羥基-3-甲氧苯基)敗脂酸、1-(4-羥基-3-甲氧苯基)乙酮與ALOX5親合力較強，3-(4-羥基-3-甲氧苯基)敗脂酸親和力較強。石吊蘭素、3-(4-羥基-3-甲氧苯基)敗脂酸、1-(4-羥基-3-甲氧苯基)乙酮與CYP1A1和CYP1B1的親和能低，其中石吊蘭素親和力最強。β谷甾醇、熊果酸、石吊蘭素與ADORA1親合能低，β谷甾醇親和力最強。從以上結(jié)果可知，CYP1A1、CYP1B1、ADORA1、TNF-α、NF-κB可能為桿努盡煙治療慢性支氣管炎的主要靶點。

注：A～E分別為TNF-α與熊果酸、NF-κB與熊果酸、ALOX5與3-(4-羥基-3-甲氧苯基)敗脂酸、CYP1A1與石吊蘭素、CYP1B1與石吊蘭素、ADORA1與β谷甾醇。圖5 主要化合物與靶點最優(yōu)結(jié)合模式圖

3.7 關(guān)鍵靶點的富集分析 采用DAVID軟件篩選“桿努盡煙”治療慢性支氣管炎的潛在生物效應(yīng)，根據(jù)設(shè)置閾值P<0.05篩選GO生物過程和KEGG通路。GO富集分析中，主要生物過程包括腺苷受體信號通路、嘌呤核苷酸分解過程等；細(xì)胞成分主要涉及細(xì)胞液，細(xì)胞連接，細(xì)胞內(nèi)膜上細(xì)胞器等；分子功能主要涉及G蛋白偶聯(lián)腺苷受體活性、嘌呤核苷酸分解過程。KEGG通路富集分析結(jié)果顯示，靶點通路主要包括核受體轉(zhuǎn)錄途徑、色氨酸代謝、細(xì)胞色素P450對異生物質(zhì)的代謝、花生四烯酸代謝、cAMP信號通路等(圖6～7)，這些通路直接或間接介導(dǎo)參與慢性支氣管炎的發(fā)生發(fā)展過程。結(jié)果表明，桿努盡煙主要化學(xué)成分的作用靶點涉及多樣化的生物學(xué)過程，并分布于不同的代謝通路，體現(xiàn)了其多成分、多靶點、多途徑的治療特點。為此，本研究結(jié)合富集分析結(jié)果及慢性支氣管炎發(fā)病機制，繪制桿努盡煙治療慢性支氣管炎分子作用機制的信號通路圖，主要包括NF-κB、TNF-α、cAMP、IL信號通路等，并選取了NF-κB、TNF-α通路關(guān)鍵靶點進行實驗驗證，見圖8。

圖6 關(guān)鍵靶點的GO富集

圖7 KEGG富集排名前15位的信號通路

圖8 桿努盡煙治療慢性支氣管炎分子作用機制圖

3.8 大鼠一般情況 正常對照組大鼠未見明顯癥狀；模型組大鼠毛發(fā)光澤度下降，體質(zhì)量減輕，并伴有咳嗽、喘息等癥狀；與模型組大鼠比較，陽性藥物組、桿努盡煙各劑量組大鼠的一般情況均有改善，其中桿努盡煙高劑量組癥狀改善最為明顯。

3.9 大鼠肺組織病理學(xué)改變 正常對照組大鼠肺泡壁完整均一，細(xì)支氣管上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，排列整齊，未見炎性細(xì)胞浸潤；模型組大鼠肺泡壁結(jié)構(gòu)完整性受到破壞，肺泡間和氣管旁有大量炎性細(xì)胞浸潤，細(xì)支氣管上皮細(xì)胞排列不整齊，管腔內(nèi)可見明顯分泌物，提示炎性損傷發(fā)生，造模成功；與模型組比較，陽性藥物組大鼠肺泡壁及細(xì)支氣管周圍炎細(xì)胞浸潤程度減輕，桿努盡煙低劑量組大鼠炎性細(xì)胞浸潤程度較低，細(xì)支氣管上皮細(xì)胞有所改善，桿努盡煙高劑量組大鼠肺組織肺泡壁增厚情況得到改善，炎細(xì)胞浸潤程度減輕，管腔內(nèi)分泌物減少，細(xì)支氣管上皮細(xì)胞排列整齊，見圖9。

3.10 桿努盡煙對大鼠肺組織中TNF-α水平的影響 與正常對照組比較，模型組大鼠肺組織中TNF-α水平升高(P<0.05)；與模型組比較，陽性藥物組和桿努盡煙各劑量組大鼠組織中TNF-α水平均降低(P<0.05)，見表5。

表5 桿努盡煙對大鼠肺組織中TNF-α水平的影響

3.11 桿努盡煙對大鼠肺組織中NF-κB蛋白和mRNA表達的影響 與正常對照組比較，模型組大鼠肺組織中NF-κB蛋白和mRNA表達升高(P<0.05)；與模型組比較，陽性藥物組和桿努盡煙各劑量組大鼠肺組織中NF-κB蛋白和mRNA表達均降低(P<0.05)，見圖10。

4 討論

本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法挖掘苗藥桿努盡煙活性成分，獲得桿努盡煙活性成分5種，分別為3-(4-羥基-3-甲氧苯基)敗脂酸、1-(4-羥基-3-甲氧苯基)乙酮、石吊蘭素、熊果酸、β-谷甾醇，其中熊果酸、石吊蘭素、β-谷甾醇為“桿努盡煙-慢性支氣管炎靶點”網(wǎng)絡(luò)圖的核心節(jié)點，具有良好的抗炎、止咳等作用。

PPI網(wǎng)絡(luò)圖篩選出的關(guān)鍵靶點包括ALB、CYP1A1、CYP1B1等，“桿努盡煙-慢性支氣管炎靶點”網(wǎng)絡(luò)圖中ALOX5、ABCB1被預(yù)測為桿努盡煙治療慢性支氣管炎的靶點，其中ALOX5、CYP1B1、CYP1A2等靶點與炎癥密切相關(guān)，而炎癥反應(yīng)作為慢性支氣管炎發(fā)展的核心機制，提示其可能參與桿努盡煙發(fā)揮治療慢性支氣管炎的作用過程。

圖9 各組大鼠肺組織切片

注：與正常對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05。圖10 桿努盡煙對大鼠肺組織中NF-κB蛋白和mRNA表達的的影響

為進一步探究桿努盡煙治療慢性支氣管炎的作用機制，進行GO富集與KEGG分析，結(jié)果主要包括核受體轉(zhuǎn)錄途徑、色氨酸代謝、花生四烯酸代謝、細(xì)胞色素P450對異生物質(zhì)的代謝等途徑。核受體超家族包括很多的轉(zhuǎn)錄因子，其中NF-κB是細(xì)胞內(nèi)重要的核轉(zhuǎn)錄因子，能誘導(dǎo)腫瘤壞死因子受體1/2/4，白介素1等表達，在炎癥和免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要[11-12]。色氨酸作為人體必需的氨基酸，而5-羥色胺(5-HT)代謝途徑是其重要降解途徑，研究表明，5-HT的主要代謝物5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)與炎癥、氧化應(yīng)激等多種免疫反應(yīng)密切相關(guān)[13-14]。花生四烯酸(AA)代謝途徑活化會產(chǎn)生ALOX5、CYP1A1和CYP1B15等因子，進而激活TNF-α、IL-1等炎癥因子，刺激花生四烯酸分泌，促使炎癥反復(fù)發(fā)生[15-16]。由此可知，TNF-α、NF-κB參與色氨酸代謝、核受體轉(zhuǎn)錄途徑、花生四烯酸代謝等眾多生物過程，二者激活，可導(dǎo)致炎癥反應(yīng)，進而加重慢性支氣管炎病情，提示桿努盡煙可通過調(diào)控TNF-α、NF-κB表達抑制炎癥反應(yīng)，達到治療慢性支氣管炎的目的。

基于TNF-α、NF-κB靶點初步探究桿努盡煙治療慢性支氣管炎的作用機制，驗證網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果。采用煙熏加脂多糖氣管注射法成功建立慢性支氣管炎大鼠模型，給藥物28 d后，病理切片顯示桿努盡煙能減輕慢性支氣管炎大鼠肺組織炎癥；ELISA、RT-qPCR、Western blot結(jié)果提示桿努盡煙能降低大鼠肺組織勻漿中TNF-α、NF-κB表達，減緩炎癥反應(yīng)。

綜上所述，本研究體現(xiàn)了桿努盡煙治療慢性支氣管炎多成分、多靶點、多途徑的作用特點，其可能通過抑制TNF-α、NF-κB表達，降低慢性支氣管炎肺部炎癥，進而發(fā)揮治療慢性支氣管炎的作用，為深入探究桿努盡煙治療慢性支氣管炎作用機制及其臨床運用提供理論依據(jù)。