續(xù)斷一體化工藝優(yōu)化

吳書亮，王建科*，迮薇薇，李 妍，顧 田

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽 550025；2.畢節(jié)市中醫(yī)院，貴州 畢節(jié) 551700)

續(xù)斷是傳統(tǒng)常用中藥，為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷DipsacusasperWall.ex Henry的干燥根，在秋季采挖，除去蘆頭及須根，清洗后用微火烘至半干，堆積“發(fā)汗”至內(nèi)部變綠后再烘干[1]，含有三萜皂苷、木通皂苷、馬錢子苷、多糖、生物堿等成分[2-6]，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗衰老、抗骨質(zhì)疏松及修復(fù)肝損傷等藥理活性[7-11]。在該藥材傳統(tǒng)加工工藝中，鮮品需先經(jīng)產(chǎn)地加工得到商品藥材后再進行軟化、切制、干燥等工序處理形成飲片，其間用水、干燥工序有重復(fù)，可能會導(dǎo)致有效成分流失，增加藥材加工時間及成本。因此，本實驗在2020年版《中國藥典》的基礎(chǔ)上，將續(xù)斷產(chǎn)地加工方法與炮制方法進行整合，形成一體化加工工藝，并對其進行優(yōu)化，以期為該藥材相關(guān)應(yīng)用的研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀(UltiMate 3000型，美國賽默飛公司)；紫外-可見分光光度儀(TU-1810型，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；電子天平[AUW220D型，島津儀器(蘇州)有限公司]；粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)。

1.2 試劑與藥物 川續(xù)斷皂苷Ⅵ(批號GZDD-0006)對照品購于貴州迪大生物科技有限責(zé)任公司。續(xù)斷采自威寧縣二塘鎮(zhèn)梅花村續(xù)斷種植基地，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室魏升華教授鑒定為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷DipsacusasperWall.ex Henry的新鮮根。甲醇、乙腈均為色譜純；甲醇、乙醇、磷酸均為分析純；水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 飲片制備

2.1.1 優(yōu)化的傳統(tǒng)切制工藝 參考文獻[12]報道，取新鮮藥材，剪掉須根及蘆頭，清洗干凈，過濾水分，置于60 ℃干燥箱中減重50%，堆積“發(fā)汗”以使藥材內(nèi)部變綠，在60 ℃下烘干。加入4倍量水軟化6 h，取出，稍潤，橫切3 mm厚片，在70 ℃下烘干，即得。

2.1.2 一體化工藝(趁鮮切制) 取新鮮藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，在一定溫度下減重至一定程度，堆置“發(fā)汗”一定時間，取出，切片，干燥，即得。

2.2 川續(xù)斷皂苷Ⅵ、總皂苷、浸出物含量測定 川續(xù)斷皂苷Ⅵ、總皂苷含量測定根據(jù)李妍等[12]建立的方法進行，水溶性浸出物、醇溶性浸出物含量測定參照2020年版《中國藥典》方法進行[1]。

2.3 一體化工藝優(yōu)化

2.3.1 單因素試驗 通過查閱相關(guān)文獻資料及前期預(yù)實驗，發(fā)現(xiàn)影響續(xù)斷趁鮮切制“發(fā)汗”后飲片質(zhì)量的主要因素有藥材含水量、“發(fā)汗”溫度、“發(fā)汗”時間、烘干溫度等，同時還與“發(fā)汗”過程中出現(xiàn)的“霉變”現(xiàn)象有關(guān)。因此，本實驗以川續(xù)斷皂苷Ⅵ、總皂苷、浸出物含量為評價指標(biāo)，對減重程度(A)、“發(fā)汗”溫度(B)、“發(fā)汗”時間(C)、烘干溫度(D)進行考察，結(jié)果見表1～4。

2.3.2 正交試驗 在單因素試驗基礎(chǔ)上，采用L9(34)表設(shè)計正交試驗方案，見表5～6。

表1 不同減重程度對各成分含量的影響

表2 不同“發(fā)汗”溫度對各成分含量的影響

表3 不同“發(fā)汗”時間對各成分含量的影響

表4 不同烘干溫度對各成分含量的影響

表5 因素水平

表6 試驗計劃

取新鮮藥材，按表6工藝進行加工、粉碎、過篩，測定川續(xù)斷皂苷Ⅵ、總皂苷、浸出物含量。根據(jù)上述指標(biāo)在藥材中的重要性，設(shè)定權(quán)重分別為川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量35%、總皂苷含量25%、水溶性浸出物含量20%、醇溶性浸出物含量20%，綜合評分=川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量隸屬度×35%+總皂苷含量隸屬度×25%+水溶性浸出物含量隸屬度×20%+醇溶性浸出物含量隸屬度×20%，結(jié)果見表7，方差分析見表8。

表7 試驗設(shè)計與結(jié)果

表8 方差分析

由表7可知，各因素影響程度依次為B>A>D>C，表明“發(fā)汗”溫度最大，“發(fā)汗”時間最小，最優(yōu)工藝為A3B2C1D1。由表8可知，減重程度、“發(fā)汗”溫度、烘干溫度有顯著影響(P<0.05)，而“發(fā)汗天數(shù)”無顯著影響(P>0.05)，并且烘干溫度為80 ℃時綜合評分最高。因此，最優(yōu)工藝為A3B2C1D3，即新鮮藥材洗凈，在60 ℃下減重60%，于(25±2)℃堆置“發(fā)汗”3 d，取出，橫切2 mm片，在80 ℃下烘干，川續(xù)斷皂苷Ⅵ、續(xù)斷總皂苷、水浸出物、醇浸出物含量分別為7.71%、16.27%、53.23%、52.49%。

2.3.3 驗證試驗 取新鮮藥材3批，除去根頭和須根，水洗，瀝干表面水分，按“2.1.2”項下優(yōu)化工藝制備 一體化工藝飲片，同時按“2.1.1”項下優(yōu)化續(xù)斷傳統(tǒng)切制工藝制備3批飲片，按“2.2”項下方法測定川續(xù)斷皂苷Ⅵ、總皂苷、浸出物含量，結(jié)果見表9。由此可知，一體化工藝穩(wěn)定、合理、可行，并且所得結(jié)果高于傳統(tǒng)工藝。

表9 驗證試驗結(jié)果(n=3)

3 討論

本實驗所用的續(xù)斷均采自同一種植基地，保證了藥材質(zhì)量，并且鮮藥材較易切制，對機械設(shè)備要求不高，在種植基地內(nèi)即可進行[13]。通過多指標(biāo)綜合來優(yōu)化續(xù)斷一體化工藝，符合中藥“一藥多效”的用藥特點，也可體現(xiàn)中醫(yī)藥思維的整體觀念[14]。結(jié)果顯示，最優(yōu)工藝為新鮮藥材洗凈，在60 ℃下減重60%，于(25±2)℃堆置“發(fā)汗”3 d，取出，橫切2 mm片，在80 ℃下烘干，川續(xù)斷皂苷Ⅵ、續(xù)斷總皂苷、水浸出物、醇浸出物含量分別為7.71%、16.27%、53.23%、52.49%，經(jīng)驗證試驗表明，該工藝穩(wěn)定合理。

與續(xù)斷傳統(tǒng)切制工藝比較，一體化工藝具有生產(chǎn)周期短、貯存環(huán)節(jié)少、成品性狀佳、成本低、指標(biāo)成分含量高等優(yōu)勢，同時藥材產(chǎn)地加工與炮制的一體化有利于明確其產(chǎn)地及來源，從源頭上保證質(zhì)量[15]。今后，課題組將比較上述2種工藝所得續(xù)斷飲片的藥效學(xué)，以期進一步探討該藥材一體化工藝的可行性，并為其生產(chǎn)開發(fā)奠定基礎(chǔ)。