無尾果活性部位化學成分的研究

高燕萍，鐘國躍

(江西中醫藥大學中藥資源與民族藥研究中心，江西 南昌 330000)

無尾果ColurialongifoliaMaxim.，薔薇科無尾果屬植物，僅產于我國甘肅、青海、云南、西藏等地，生于海拔2 700～4 100 m的區域，常用于關節炎、關節疼痛等的治療[1]。魏春華等[2]研究也發現，無尾果具有顯著的抗炎、鎮痛、解熱作用。在前期研究中發現無尾果具有良好的抗類風濕性關節炎活性[3]，進一步研究表明無尾果80%乙醇提取物正丁醇萃取部位為其活性部位。前期，本課題組對其化學成分進行初步研究，從該藏藥全草中分離鑒定了三萜、黃酮和苯丙素等類化合物[4-8]。為進一步闡明其抗類風濕性關節炎活性的藥效物質基礎，本實驗繼續對其活性部位的化學成分進行研究，從中分離得到11個化合物，所有化合物均為首次從該植物中分離得到，化合物11為首次以天然產物形式分離得到。

1 材料

RY-2型熔點儀(天津分析儀器廠)；Vector 22紅外光譜儀、DRX-600 MHz型核磁共振儀(德國Bruker公司)；UV-2550紫外光譜儀、LC-2010AHT液相色譜儀器(日本島津公司)；MSD-Trap-XCT質譜儀(美國安捷倫公司)；C605中壓制備液相色譜儀(瑞士Büchi公司)；硅膠色譜硅膠、柱層析硅膠(煙臺芝罘黃務硅膠開發試驗廠)；Sephadex LH-20 (Pharmacia公司)；反相硅膠C18(50 μm，日本富士公司)。提取用乙醇為工業試劑；其余化學試劑均為分析純；液相色譜用為色譜純。

無尾果藥材購自成都荷花池藥材市場，經江西中醫藥大學鐘囯躍教授鑒定為薔薇科植物無尾果ColurialongifoliaMaxim.的干燥全草。

2 提取與分離

無尾果藥材約8 kg，用80%乙醇冷浸提取3次，每次3 d，合并醇提液，減壓濃縮得浸膏約608 g。將浸膏加水混懸，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水部位。正丁醇部位約276 g經硅膠柱層析，以二氯甲烷-甲醇(100∶0～1∶1)梯度洗脫，各流分經薄層色譜檢識、合并，得到13個組分Fr.1 ～Fr.13。Fr.1(4.1 g)經ODS反相柱層析分離，甲醇-水(30∶70～100∶0)梯度洗脫，得到組分Fr.1-1 ～ Fr.1-13，Fr.1-1(256 mg)依次經Sephadex LH-20柱色譜和制備薄層色譜分離純化得到化合物1(61.5 mg)、2(16.1 mg)。Fr.1-2(226 mg)依次經Sephadex LH-20柱色譜和制備薄層色譜分離純化得到化合物3(5 mg)、4(7 mg)。Fr.1-4(198 mg)依次經Sephadex LH-20柱色譜和制備薄層色譜分離純化得到化合物得到化合物5(8 mg)、6(42 mg)、7(29 mg)。Fr.1-6(226 mg)經過Sephadex LH-20柱色譜分離，再用半制備HPLC(甲醇-水50∶50)進行純化得到8(29 mg)、9(10 mg)、10(3 mg)、11(3 mg)。

3 結構鑒定

化合物1：淡黃色粉末。ESI-MSm/z:149.1[M + Na]+，分子式C6H6O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：7.62(1H，s，H-5)，7.29(1H，m，H-3)，6.58(1H，m，H-4)，4.72 (2H,s,H-2′)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：150.5(C-2)，118.1(C-3)，112.8(C-4)，147.3(C-5)，187.9(C-1′)，65.3(C-2′)。以上數據與文獻[9]報道基本一致，故鑒定為2-(1-oxo-2-hydroxyethyl) furan。

化合物2：無色油狀物。ESI-MSm/z:149.3[M+Na]+，分子式C6H6O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：9.55(1H，s)，7.20(1H，d，J=4.0 Hz,H-3)，6.49(1H，d，J=4.0 Hz,H-4)，4.69 (2H,s)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：152.5(C-2)，123.2(C-3)，110.2(C-4)，160.9(C-5)，177.9(-CHO)，57.8(-CH2OH)。以上數據與文獻[10]報道基本一致，故鑒定為5-hydroxymethyl-2-furancarboxaldehyde。

化合物3：無色油狀物。ESI-MSm/z:151.2[M-H]-，分子式C8H8O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：9.81(1H，s，-CHO)，3.95(3H,s,-OCH3)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：130.1(C-1)，109.0(C-2)，147.4(C-3)，151.9(C-4)，114.6(C-5)，127.8(C-6)，191.1(-CHO)，56.4(-OCH3)。以上數據與文獻[11]報道基本一致，故鑒定為4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde。

化合物4：無色油狀物。ESI-MSm/z:165.1[M-H]-，分子式C9H10O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：3.93(3H,s,-OCH3)，2.54(3H,s,-CH3)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：150.6(C-1)，146.8(C-2)，114.0(C-3)，130.4(C-4)，124.3(C-5)，109.9(C-6)，197.1(-CO-)，26.4(-CH3)，56.3(-OCH3)。以上數據與文獻[11]報道基本一致，故鑒定為4-hydroxy-3-methoxy acetophenone。

化合物5：無色油狀物。ESI-MSm/z:195.3[M-H]-，分子式C10H12O4。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：3.93(6H,s,-OCH3)，2.54(3H,s,-CH3)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：129.0(C-1)，105.9(C-2,6)，146.9(C-3,5)，139.9(C-4)，196.8(-CO-)，26.5(-CH3)，56.7(-OCH3×2)。以上數據與文獻[12]報道基本一致，故鑒定為4-hydroxy-3,5-dimethoxy acetophenone。

化合物6：無色油狀物。ESI-MSm/z:177.0[M-H]-，分子式C10H10O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：9.64(s,H-9)，3.93(3H,s,-OCH3)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：126.6(C-1)，109.7(C-2)，149.6(C-3)，147.5(C-4)，115.2(C-5)，124.3(C-6)，153.3(C-7)，126.7(C-8)，193.8(C-9)，56.2(-OCH3)。以上數據與文獻[13]報道基本一致，故鑒定為松柏醛。

化合物7：淡黃色油狀物。ESI-MSm/z:445.3[M-H]-，分子式C28H46O4。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：7.69(m,H-2,5)，7.51(m,H-3,4)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：132.7(C-1,6)，129.0(C-2,5)，131.1(C-3,4)，168.0(C-1′,1″)，68.4(C-3′,3″)，39.0(C-4′,4″)，24.0(C-5′,5″)，29.9,23.2(C-6′,6″,7′,7″,8′,8″)，29.2(C-9′,9″)，14.3(C-10′,10″)，30.6(C-11′,11″)，11.2(C-12′,12″)。以上數據與文獻[14]報道基本一致，故鑒定為bis(2-ethyloctyl) phthalate。

化合物8：淡黃色油狀物。ESI-MSm/z:245.2[M-H]-，分子式C12H22O5。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：7.69(m,H-2,5)，7.51(m,H-3,4)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：173.6(C-1)，67.4(C-2)，38.9(C-3)，170.6(C-4)，65.9,65.7(C-1′,1″)，30.6,30.5(C-2′,2″)，19.1(C-3′,3″)，14.2,13.7(C-4′,4″)。以上數據與文獻[15]報道基本一致，故鑒定為L-(-)-di-/i-butyl malate。

化合物9：白色粉末。ESI-MSm/z:208.4[M+H]+，分子式C11H13NO3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：9.50(s,H-10)，1.08(d,J=8.0 Hz,H-12)，1.04(d,J=8.0 Hz,H-13)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：166.3(C-2)，63.4(C-3)，131.5(C-5)，125.2(C-6)，106.6(C-7)，131.6(C-8)，64.2(C-9)，179.4(C-10)，33.8(C-11)，19.4(C-12)，18.4(C-13)。以上數據與文獻[16]報道基本一致，故鑒定為(S)-4-isopropyl-3-oxo-3,4-dihydro-1H-pyrrolo[2,1-c][1,4]oxazine-6-carbaldehyde。

圖1 化合物1結構式Fig.1 Structure of compound 1

表1 化合物1的13C-NMR數據(100 MHz,CDCl3)Tab.1 13C-NMR data(100 MHz,CDCl3) of compound 1

4 討論

“熱袞巴”作為常用藏藥，藏醫用以治療肝炎、高血壓、月經不調及關節炎等癥，無尾果為其市場流通量最大、資源也最為豐富的品種之一，但是，有關無尾果的相關研究卻較少[18]。為該藥材的合理開發利用提供科學依據，本課題組繼續對其活性部位化學成分進行研究，從中分離鑒定了11個化合物，所有化合物均為首次從該藥材中分離得到，其中，呋喃化合物和生物堿為首次從該屬植物中發現。