新疆鼠疫血清學檢驗室間質控結果與評價

貴有軍 郝俊暉 王啟果 羅勇軍 木尼熱·木合買提 卡斯木江·玉素甫 李博 王誠 王效俊

（新疆維吾爾自治區疾病預防控制中心 830002）

鼠疫是由鼠疫耶爾森氏菌（Yersinia Pestis）引起的廣泛流行于野生嚙齒動物間的一種以鼠、蚤傳播為主的自然疫源性疾病，以發病急、傳播快、病死率高、傳染性強為主要特征，是《中華人民共和國傳染病防治法》 規定的甲類傳染病[1]。鼠疫血清學檢驗具有快速、敏感、特異性高、成本低、操作簡便實用等特點，同時對實驗室設備和人員水平要求較低，適合基層開展規模檢測[2]，在流行病學調查、常規監測、腐敗材料檢驗、鼠疫快速檢驗和追溯診斷等方面有非常重要的作用。為提高全區鼠疫血清學檢測水平，建立一套行之有效的質量管理體系，確保檢測結果的科學性和準確性，2021 年7 月在全區13個鼠疫監測實驗室開展室間質量控制，對檢驗工作進行全面分析，并作質控結果評價。

1 材料與方法

1.1 質控項目

間接血凝試驗（IHA）和反向間接血凝試驗（RIHA）。

1.2 質控材料制備

將鼠疫F1 抗體（抗原）間接血凝診斷試劑中陽性血清和菌體制劑分別按一定比例稀釋，充分混勻后分裝于離心管中，置于4℃冰箱中冷藏。各質控樣本每天檢測1 次，觀察記錄結果，連續測試5 次，已出現最多次數的滴度作為該批質控血清的標準滴度。試劑盒由蘭州生物制品研究所有限責任公司生產，均在有效期內使用。

1.3 質控方法

將質控樣本分裝于Eppendorf（1ml）管中分發到各考核點，統一時間進行檢測并報告結果。質控樣本的操作按照《新疆鼠疫防治手冊》 和試劑盒說明書進行。判定標準：鼠疫IHA 和RIHA 結果判定以反應強度(++) 為陽性反應界限，出現陽性反應的最高稀釋度作為該血清的陽性滴度。

1.4 結果評定標準

質控樣本檢測滴度與“標準滴度”比較相差不超過±1 個稀釋滴度，視為質控合格，超過則判定為不合格。

2 結果

2.1 鼠疫血清學檢測質控結果

由附表可知，2021 年7 月開展鼠疫血清學檢驗室間質控發放質控樣本共26 份，質控實驗室13 個，IHA 和RIHA 室間質控樣本標準滴度均為1:256，經對檢驗結果全面分析和質控評價，質控總合格率為80.76%，IHA 的合格率為84.62%，RIHA的合格率為76.92%。表明全區鼠疫監測點基本具備鼠疫血清學檢驗能力，檢驗結果基本能反映監測地區的客觀事實。

附表 2021 年新疆鼠疫血清學檢驗室間質控結果

2.2 質控結果影響因素分析

2.2.1 檢測人員實操能力

質控結果顯示，由于檢測人員操作不當、理論基礎差或工作崗位調整等原因，導致實驗操作和結果判定存在誤差，致使質控結果不合格。此類因素質控不合格頻率較高，有2 個實驗室3 次質控不合格，占質控不合格次數的60%。

2.2.2 儀器設備及試劑材料

質控結果顯示，由于儀器設備選擇或使用不當，導致1 個實驗室1 次質控不合格，此類因素占不合次數20%。由于試劑配制、保存不規范，導致1 個實驗室1 次質控不合格，此類因素占不合次數20%。

3 討論

20 世紀70、80 年代，新疆鼠防專業隊伍曾是全國最強的陣容之一，但隨著鼠疫防控老專家相繼退休，出現鼠防人才斷層，隊伍不穩的局面，很多醫學專業畢業生不愿投身到這種條件艱苦、經常出野外的鼠疫防控事業中來[3]。多數基層疾病預防控制中心編制短缺，專業技術人員承擔多病種防治任務，單病種檢測規范化操作水平較低，專門從事鼠疫防控工作的人員更少，加之新入職和頻繁轉崗的人員缺乏專業知識培訓[4]，造成目前新疆鼠疫防控專業能力和技術水平不高的局面。

專業人員理論基礎和實操水平對整個實驗起關鍵主導作用。實驗人員要掌握專業理論知識，經專業培訓可熟練操作后持證上崗。實驗人員因自身經驗不足會影響試驗結果的準確性，如在倍比稀釋過程中，移液量不準確、移液器吹打力度或次數不同，均會造成稀釋滴度不準確；檢測人員對檢測原理、流程不熟悉、操作不規范，極易造成試劑或樣本交叉污染而導致整個試驗的失敗，如在使用移液器滴加陽性參考、F1 抗原（抗體）血球時，吸頭不小心接觸到反應孔（此時孔內已有稀釋液、血清、抗原等），又沒有及時更換吸頭，會造成試劑和各孔內液體交叉污染；實驗人員因專業理論掌握不扎實、責任性不強、樣本或試劑保存不規范等原因，會造成整批樣本腐敗或試劑失效，如在現場指導培訓時發現，有人將樣本和試劑一起長期在4℃冰箱中冷藏存放導致樣本腐敗；試驗人員（尤其是有最終復判權和出具報告的省級疾控監測人員）要充分了解儀器檢測原理和性能，對實驗結果具有一定的分析能力，否則，即便是完全按照操作步驟進行試驗，當遇到復雜樣品或出現異常現象時也不一定能得出準確可靠的結果[5]。

實驗室質量控制是為了排除誤差，保證檢驗結果實事求，它包括室內質控(IQC) 和室間質控(EQA)，且參與EQA 的實驗室應首先做好IQC[6]。隨著鼠疫監測關口前移和監測點標準化建設的不斷推進，提高鼠疫監測質量成為監測工作的重要內容，自治區疾控中心作為全區鼠疫監測技術指導和復判機構，對全區監測工作質量起督促與指導作用，在日常工作中應加強對地、縣級鼠防機構的現場指導和培訓力度，對IQC 人員進行組織管理、儀器設備（檢測儀應在校準）、取材運輸、試劑盒質控、檢驗程序、結果判定、風險評估及疫情報告等的培訓；對EQA 過程中涉及的樣本制備、專技培訓及結果分析等要做到認真負責；分析質控中發現問題的原因，提出解決辦法，再次進行考核，直至合格；對室間質控工作中出現的薄弱環節及時提出改進措施。為確保檢測質量，完善體制，建立長效機制，每年監測工作開始前應對鼠防點實驗室進行儀器設備校準和質控考核，通過發現、分析和解決問題，使各實驗室檢驗工作都能達到質控要求，保檢測結果準確、可靠[7]。