白細胞分化抗原40 配體G 基因多態性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化相關性及預后的關系

范柏華 陸筱祎

1.中國人民解放軍聯勤保障部隊第九〇四醫院干部病房，江蘇無錫 214000；2.江蘇省蘇州市立醫院東區消化內科，江蘇蘇州 215000

慢性乙型肝炎是我國常見的傳染性疾病，是由于感染乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）所引發的病毒性肝炎。在疾病的進展中，慢性乙型肝炎患者隨著肝小葉結構的破壞，可進展為肝硬化[1-2]。既往有研究報道[3]，肝硬化的發生、發展與白細胞分化抗原40配體（leukocyte differentiation antigen 40 ligand，CD40L）信號轉導途徑相關。大量研究顯示[4-5]，CD40L 單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism，SNP）與自身免疫性疾病的發生、發展有關。CD40L 基因多態性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化的發生及預后的關系，目前尚鮮見報道。本研究旨在探究CD40L 基因多態性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化的發生及預后，為早期對該類患者的預后進行干預提供一定的理論指導。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016 年5 月至2019 年3 月中國人民解放軍聯勤保障部隊第九〇四醫院（以下簡稱“我院”）收治的82 例老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者，記為研究組，并選擇同一時間段在我院進行體檢的80 名健康者為對照組。其中研究組中男45 例，女37 例；年齡61～78 歲，平均（70.15±6.38）歲。對照組中男42 例，女38 例；年齡61～80 歲，平均（70.33±6.52）歲。

納入標準：年齡≥60 歲；研究組均符合肝硬化的診斷標準[6]，且均由慢性乙型肝炎導致；對照組均為體檢健康者。

排除標準：合并肝癌或其他惡性腫瘤；妊娠或哺乳期婦女；合并膽汁淤積性、酒精性等肝病；非HBV感染導致的肝硬化。

1.2 血液樣本采集及CD40L 基因多態性檢測

抽取所有研究對象全血清晨空腹靜脈血5 ml，加入抗凝管內，3000 r/min 離心5 min（離心半徑8 cm），收集細胞沉淀用于基因組DNA 檢測。通過PCRRFLP 檢測進行基因型鑒定。提取全血基因組DNA（試劑盒購于江蘇昱安生物科技有限公司，生產批號：BD20190915），通過使用NanoDrop 分光光度計（Thermo Fisher，USA），檢測其純度和濃度；采用Sequenom軟件進行SNP 基因分型。根據電泳條帶，確定CD40L基因多態性：有兩條DNA 條帶（258、172 bp）為CC型；有3 條DNA 條帶（258、172、100 bp）為CG 型；1 條DNA 條帶（258 bp）為GG 型。

1.3 治療方法

所有患者均進行抗病毒、常規常規保肝、免疫調節、抗纖維化、利尿等相應對癥治療。

1.4 統計學方法

應用SPSS 22.0 軟件行統計學分析，計量資料采用均數±標準差（）表示，組間比較采用t 檢驗，計數資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；采用logistic 回歸模型進行多因素分析。繪制Kaplan-Meier生存曲線。以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較

兩組性別、年齡、吸煙史及飲酒史比較，差異均無統計學意義（P ＞0.05）。見表1。

2.2 兩組CD40L 基因型Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗

兩組CD40L 基因型分別經Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗，差異均無統計學意義（P ＞0.05），符合Hardy-Weinberg 平衡定律。見表2。

表2 兩組CD40L 基因型Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗

2.3 兩組CD40L 基因多態性比較

研究組G 等位基因頻率高于對照組，差異有統計學意義（P ＜0.05）。見表3。

表3 兩組CD40L 基因型分布、等位基因頻率比較[例（%）]

2.4 CD40L 基因多態性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化的相關性

以差異性的CD40L 基因型為自變量，老年慢性乙型肝炎后肝硬化預后情況為因變量，死亡=1，生存=0，進一步采用logistic 回歸模型分析，CG（OR=1.809）和GG（OR=2.264）基因型老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者預后不良發生的相對危險度分別是CC 基因型的1.809 倍和2.624 倍（P ＜0.05）。見表4。

表4 CD40L 基因多態性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化預后不良發生的logistic 回歸分析

2.5 CD40L 基因多態性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者預后分析

隨訪1 年結束，CD40L G 基因老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者生存率為62.90%（39/62）；CD40L 非G基因老年慢性乙型肝炎后肝硬化患生存率為85.00%（17/20）；CD40L G 基因與非G 基因患者生存曲線比較，差異有統計學意義（χ2=6.138，P ＜0.05）。見圖1。

圖1 老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者白細胞分化抗原40 配體基因生存曲線

3 討論

慢性乙型肝炎后肝硬化的發生與HBV 的感染、侵襲有關，同時也與患者的遺傳易感性及免疫功能有關[7-11]。相關研究報道[12-14]，宿主免疫功能障礙是其病理損害的主要原因，CD40-CD40L 通路參與和維持機體正常生理狀態中具有重要作用。探討CD40L G 基因多態性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化相關性，是預防、改善預后的重要途徑。

本研究結果顯示，兩組CD40L 基因型分別經Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗，差異均無統計學意義（P >0.05），說明本研究所選群體代表性良好。本研究結果提示與健康者比較，老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者G 等位基因頻率明顯偏高。Martínez-Fernández 等[15]研究顯示，在急性冠狀動脈綜合征患者中rs4810485與高sCD40 水平相關。logistic 回歸模型分析結果顯示以CC 基因型作為參照，CG 和GG 基因型老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者預后不良發生的相對危險度分別是CC 基因型的1.809 倍和2.624 倍，具有更高的預后不良發生風險，推測突變雜合基因型CG 及純合的GG 基因型可增加老年慢性乙型肝炎后肝硬化預后不良發生的風險，為預后不良發生的危險基因型。CD40L 表達于活化的T 細胞、血小板中，在機體的免疫調控中發揮著重要作用[16-20]。有關研究發現[21-25]，乙肝肝硬化患者CD40-rs1883832 的CT 基因型、TT 基因型高于健康對照組。本研究發現，CD40L G 基因與非G 基因患者的死亡率曲線比較，差異有統計學意義，提示CD40L 基因C→G 突變可能會對老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者臨床表現產生一定的影響，近而影響預后，此基因多態性可能是決定個體肝硬化預后產生差異的分子基礎。

綜上所述，CD40L 基因多態性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者預后死亡有關，該基因位點GG、CG基因型可增加死亡的發生風險，其所涉及的有關機制目前還尚不清楚，有待后續進一步進行深入研究。