胃癌組織中lncRNA UCA1、miR-590-3p 表達及與病理參數和預后的關系

李艷梅 李 偉 王海芹

1.河北省唐山市中醫醫院腔鏡中心，河北唐山 063000；2.河北省唐山市中醫醫院中西醫結合科，河北唐山 063000

胃癌是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，是全球癌癥死亡的第四大原因，2020 年我國胃癌發病率和死亡率分別為47.9 萬、37.4 萬[1-3]。非編碼RNA 是一類不能反映為蛋白質的RNA，可作為促癌基因或抑癌基因的轉錄調控分子，參與腫瘤發生和發展[4]。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）尿路上皮癌相關基因1（urothelial cancer associated 1，UCA1）與微小RNA（micro RNA，miR）-590-3p 是新近發現的非編碼RNA，研究報道lncRNA UCA1 在非小細胞肺癌、子宮內膜癌等惡性腫瘤中異常表達[5-6]，miR-590-3p在宮頸鱗狀細胞癌、肝細胞癌等惡性腫瘤中異常表達，均與癌細胞增殖、遷移、侵襲有關[7-9]。本研究分析胃癌組織中lncRNA UCA1、miR-590-3p 表達及與病理參數和預后的關系，以期為臨床評估患者病情進展和預后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年1 月至2018 年7 月河北省唐山市中醫醫院收治的107 例胃癌患者，收集術中切除部分癌組織和距離＞5 cm 的癌旁組織，液氮冷凍至檢測。納入標準：①經術后病理檢查確診為胃癌；②初診，未接受任何抗腫瘤治療；③可接受隨訪；④病理參數和隨訪資料完整；⑤患者及家屬均知情本研究。排除標準：①合并其他部位腫瘤；②年齡＜18 歲；③合并嚴重心、肝、腎等臟器疾病；④全身感染性疾病。患者出院后通過門診或電話方式隨訪3 年，隨訪至2021 年7 月，統計術后3 年累積生存率，隨訪期間死亡或隨訪截止則研究結束。本研究經河北省唐山市醫院倫理委員會批準。

1.2 研究方法

取50 mg 組織液氮中研磨，TRIzol 試劑盒（廠家：上海創賽科技有限公司，批號：15589226）提取組織中總RNA，Narodrop 驗證cDNA 濃度及純度，使OD260/OD280為1.8～2.0，Takara 試劑盒（廠家：武漢科昊佳生物科技有限公司，批號：DRR420A）轉錄合成cDNA，使用qRT-PCR 試劑盒（廠家：北京寶日醫生物技術有限公司，批號：639505）進行qRT-PCR 擴增。lncRNA UCA1 正向引物序列5’-TTTGCCAGCCTCAGCTTAAT-3’，反向引物序列5’-TTGTCCCCATTTTCCATCAT-3’，長度22 bp；miR-590-3p 正向引物序列5’-GCGCTAATTTTATGTATAA-3’，反向引物序列5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’，長度18 bp；lncRNA UCA1 內參β-actin 正向引物序列5’-GACCTCTATGCCAACACAGT-3’，反向引物序列5’-AGTACTTGCGCTCAGGAGGA-3’；miR-590-3p 內參U6 正向引物序列5’-AGAGCCTGTGGTGTCCG-3’，反向引物序列5’-CA -TCTTCAAAGCACTTCCCT-3’。10.0 μl 反應體系：5.0 μl SYBR Premix Ex Taq；0.2 μl 上游引物；0.2 μl 下游引物；0.2 μl ROX 參考染料；1.0 μl cDNA 模板；3.4 μl 經DEPC 處理水。反應條件：95℃預變性90 s 循環1 次，再95℃變性30 s、63℃退火30 s、72℃延伸15 s 循環40 次，反應結束后得到各反應管Ct，采用2-ΔΔCt法計算組織中lncRNA UCA1 和miR-590-3p 的相對表達量。

1.3 統計學方法

采用SPSS 27.0 對數據進行統計分析，計數資料以例數和百分比表示，比較采用χ2檢驗；計量資料均呈正態分布，以均數±標準差（）表示，比較采用t檢驗；Pearson 相關性分析明確相關性；采用K-M 法繪制生存曲線，組間生存率采用log-rank 檢驗。以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胃癌組織與癌旁組織中lncRNA UCA1、miR-590-3p 表達比較及相關性

胃癌組織中lncRNA UCA1 表達高于癌旁組織，miR-590-3p 表達低于癌旁組織（P ＜0.05）。見表1、圖1。Pearson 相關性分析顯示，胃癌組織中lncRNA UCA1 與miR-590-3p 表達呈負相關（r=-0.720，P ＜0.001）。

表1 胃癌組織與癌旁組織中lncRNA UCA1、miR-590-3p 表達比較（）

表1 胃癌組織與癌旁組織中lncRNA UCA1、miR-590-3p 表達比較（）

注 lncRNA：長鏈非編碼RNA；UCA1：尿路上皮癌相關基因1；miR：微小RNA

圖1 胃癌組織與癌旁組織中lncRNA UCA1、miR-590-3p 電泳圖

2.2 lncRNA UCA1、miR-590-3p 表達與胃癌患者病理參數的關系

不同臨床病理分期和淋巴結轉移患者lncRNA UCA1 和miR-590-3p 表達比較，差異有統計學意義（P ＜0.05）。見表2。

表2 lncRNA UCA1、miR-590-3p 表達與胃癌患者病理參數的關系（）

表2 lncRNA UCA1、miR-590-3p 表達與胃癌患者病理參數的關系（）

注 lncRNA：長鏈非編碼RNA；UCA1：尿路上皮癌相關基因1；miR：微小RNA

2.3 lncRNA UCA1、miR-590-3p 表達與胃癌患者生存率的關系

隨訪3 年，107 例胃癌患者累積生存率為63.55%（68/107），以胃癌組織中lncRNA UCA1、miR-590-3p表達均值為基準將患者分為高低表達組。高lncRNA UCA1 表達組（≥1.042，n=53）累積生存率為52.83%（28/53），低lncRNA UCA1 表達組（＜1.042，n=54）累積生存率為74.07%（40/54），高miR-590-3p 表達組（≥0.974，n=52）累積生存率為76.92%（40/52），低miR-590-3p 表達組（＜0.974，n=55）累積生存率為50.91%（28/55）。K-M 生存曲線顯示，高lncRNA UCA1 表達組累積生存率低于低lncRNA UCA1 表達組，高miR-590-3p 表達組累積生存率高于低miR-590-3p 表達組，差異有統計學意義（Log-rank χ2=8.140、11.624，P=0.004、0.001）。見圖2。

圖2 不同lncRNA UCA1、miR-590-3p 表達胃癌患者K-M 生存曲線

3 討論

胃癌是消化道常見惡性腫瘤，其發生是從胃黏膜至慢性胃炎、萎縮性胃炎、腸上皮化生、不典型增生、癌變的連續過程，早期常無癥狀，大多患者確診時已達中晚期，由于惡性程度較高，轉移率和復發率高，預后較差[10-11]。lncRNA UCA1 定位于人染色體19p13.12，最初于膀胱移行細胞癌細胞中發現，后續研究表明，lncRNA UCA1 參與多種惡性腫瘤發生發展[12-14]。本研究結果顯示，胃癌組織中lncRNA UCA1 表達上調，并與臨床病理分期和淋巴結轉移有關，提示lncRNA UCA1在胃癌中也可能作為一種促癌基因參與胃癌發生，其機制可能與lncRNA UCA1 促進胃癌細胞上皮-間充質轉化有關。上皮-間質轉化是上皮來源惡性腫瘤細胞獲得遷移和侵襲能力的重要生物學過程，鋅指E 盒結合同源框1（Zinc E-box-binding homobox 1，ZEB1）能通過調控上皮間質轉化過程參與多種惡性腫瘤的發生、發展[15]。ZEB1 為miR-204 下游靶基因，miR-204可負向調控ZEB1 表達，抑制腫瘤細胞上皮-間質轉化[16]。鐘定福等[17]研究顯示，lncRNA UCA1 能通過抑制miR-204 上調ZEB1 表達，促進胃癌細胞上皮-間質轉化。本研究進一步發現，高lncRNA UCA1 表達組術后3 年累積生存率明顯降低，提示lncRNA UCA1可能成為胃癌患者預后評估的生物標志物。

miR-590-3p 定位于人染色體7q11.23，已有研究發現其在多種惡性腫瘤中呈異常表達，如miR-590-3p 在胰腺癌中表達上調[18-20]，但其在結直腸癌中表達下調[21]。本研究顯示，胃癌組織中miR-590-3p 表達下調，并與臨床病理分期和淋巴結轉移有關，提示miR-590-3p 在胃癌中也可能作為一種抑癌基因參與胃癌發生，其低表達與胃癌惡性進展有關，與劉明輝等[22]報道一致。其機制可能與miR-590-3p 能負向調節環磷酸腺苷反應元件結合蛋白（cAMP-response element binding protein 1，CREB1）有關。CREB1 是新近發現的一種癌基因，能異常啟動腫瘤相關基因轉錄，通過調節具有細胞增殖、分化、凋亡、細胞周期、抗凋亡、血管新生等功能的靶基因促進腫瘤細胞生長和增殖，參與包括胃癌在內的多種惡性腫瘤進展[23]。Gu 等[24]研究顯示，miR-590-3p 能靶向抑制CREB1 表達，進而抑制胃癌細胞增殖、集落形成能力和侵襲。進一步分析發現，高miR-590-3p 表達組術后3 年累積生存率明顯升高，提示miR-590-3p 亦可成為胃癌患者預后評估的生物標志物。lncRNA 對miRNA 具有海綿吸附作用，可吸附特定miRNA，干擾miRNA 對下游靶基因的調控[25]。本研究顯示，胃癌組織中lncRNA UCA1 與miR-590-3p 表達呈負相關，提示二者可能共同影響患者預后，考慮與miR-590-3p 為lncRNA UCA1 調控靶點有關。Gu 等[24]通過雙熒光素酶報告基因、放射免疫沉淀試驗技術、RNA 下拉試驗證實miR-590-3p 為lncRNA UCA1靶標，lncRNA UCA1 能負調控miR-590-3p 上調CREB1 表達，促進胃癌細胞增殖和侵襲。

綜上所述，胃癌組織中lncRNA UCA1 高表達，miR-590-3p 低表達，與臨床病理分期、淋巴結轉移及預后有關，可能作為預后評估指標。但本研究樣本量較少，隨訪時間較短，且關于兩指標參與胃癌發生發展機制尚未完全明確，有待進一步研究。