血清miRNA-196a、miRNA-92a 表達(dá)水平與宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系

王雨村 胡拓陽 崔 靜 韓 萍 丁 燕

1.甘肅省腫瘤醫(yī)院婦瘤二科，甘肅蘭州 730050；2.甘肅省腫瘤醫(yī)院放射科，甘肅蘭州 730050

宮頸癌是僅次于乳腺癌的第二大常見女性惡性腫瘤[1-2]。外科手術(shù)仍然是當(dāng)前宮頸癌最重要的治療手段，但術(shù)后面臨較高的復(fù)發(fā)風(fēng)險[3]。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類不編碼蛋白質(zhì)的RNA，其可通過調(diào)節(jié)各種基因表達(dá)，進(jìn)而影響細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡等生物學(xué)過程，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4]。miRNA-196a、miRNA-92a 為miRNA 家族成員之一，miRNA-196a 在胃癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)[5-6]，miRNA-92a 在非小細(xì)胞肺癌、肝癌等惡性腫瘤細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)[7-8]，與腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、遷移相關(guān)。本研究旨在分析血清miRNA-196a、miRNA-92a水平與宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)及預(yù)后的關(guān)系，以期為宮頸癌診治提供新的策略。

2) 運用現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育技術(shù)手段優(yōu)化教學(xué)設(shè)計。現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育技術(shù)手段在增大教學(xué)信息量和設(shè)置交互性情景等方面能起到優(yōu)化教學(xué)設(shè)計的作用，一是要注重學(xué)習(xí)資源的全方位整合，包括課件、資源、教材以及其他學(xué)習(xí)媒體等的設(shè)計，盡可能做到資源立體化；二是要注重如何利用技術(shù)手段更好地體現(xiàn)文學(xué)課的特點，使教育技術(shù)和教學(xué)內(nèi)容能相互適配。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015 年1 月至2016 年6 月甘肅省腫瘤醫(yī)院（以下簡稱“我院”）收治的113 例行宮頸癌根治術(shù)患者為宮頸癌組，年齡24～68 歲，平均（45.15±5.36）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)術(shù)后病理確診為宮頸癌；②初次確診，未接受放化療等治療；③國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期[9]ⅠA～ⅡA；④臨床資料和隨訪資料完整；⑤患者及家屬均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位腫瘤；②嚴(yán)重心、肝、腎等臟器疾病；③血液、免疫系統(tǒng)疾病；④全身感染性疾病；⑤妊娠及哺乳期婦女。另選取我院68 名體檢健康女性為對照組，年齡18～70 歲，平均（45.07±5.24）歲。兩組年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（倫理號：20181201）。

1.2 研究方法

采集患者術(shù)前和對照組體檢時空腹靜脈血，3000 r/min 離心10 min（半徑10 cm），取上清保存于-80℃冰箱中，TRIzol 總RNA 抽提試劑盒（上海生工生物工程股份有限公司；貨號：B511321-0020）提取血清總RNA，超微量分光光度計鑒定RNA 純度為OD260/OD280為1.8～2.0，Takara 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（北京寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司；貨號：RR037A）轉(zhuǎn)錄合成cDNA，使用美國伯樂CFX qRT-PCR 儀和qRT-PCR 試劑盒（北京百奧萊博科技有限公司；貨號：JN0052）進(jìn)行qRTPCR 擴(kuò)增。miRNA-196a 正向引物序列5’-CGTCAGAACGAATGATGCACAG-3’，反向引物序列5’-ACCTGCCTAGGTACTTTCATGT-3’；miRNA-92a 正向引物序列5’-AGCTCTACGACTGTCACTCG-3’，反向引物序列5’-GTATGCATTCTATCGTAG-3’；內(nèi)參U6 正向引物序列5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’，反向引物序列5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’。反應(yīng)體系：7.5 μl SYBR GreenⅠMaster、1.0 μl 上游引物、1.0 μl下游引物、2 μl DNA 模板、8.5 μl RNase-Free H2O；反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性30 s 循環(huán)1 次，95℃5 s，60℃35 s，72℃30 s，循環(huán)40 次。2-ΔΔCt法計算血清中miRNA-196a、miRNA-92a 相對表達(dá)量，連續(xù)檢測3 次，取平均值。根據(jù)血清miRNA-196a、miRNA-92a 水平均值將宮頸癌組分為高表達(dá)和低表達(dá)。

1.3 隨訪

宮頸癌患者術(shù)后定期進(jìn)行B 超、計算機(jī)斷層掃描、磁共振成像等檢查，每6 個月1 次。統(tǒng)計宮頸癌復(fù)發(fā)情況，包括局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，局部復(fù)發(fā)指切除病灶范圍內(nèi)出現(xiàn)新的宮頸癌病灶，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移至出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移病灶。隨訪截至2021 年6 月。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

隨訪11～60 個月，中位38 個月，截至末次隨訪，113 例宮頸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)25 例（22.12%），miRNA-196a、miRNA-92a 高表達(dá)的復(fù)發(fā)率高于低表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）。見表3、圖1。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清miRNA-196a、miRNA-92a 表達(dá)比較

健全順暢高效的協(xié)調(diào)機(jī)制。充分發(fā)揮“雙重領(lǐng)導(dǎo)”優(yōu)勢和軍地橋梁紐帶作用，協(xié)調(diào)軍地各級建立常態(tài)化的計劃協(xié)調(diào)、聯(lián)席會議、聯(lián)合辦公、情況通報、雙向走訪等制度，使軍隊能夠?qū)崟r了解地方經(jīng)濟(jì)社會發(fā)展進(jìn)程、建設(shè)規(guī)劃、科技立項和技術(shù)革新等現(xiàn)狀，也使地方能及時掌握軍隊需求，切實調(diào)動軍地雙方力量協(xié)力推進(jìn)軍民融合發(fā)展各項工作有效落實。

路橋在施工過程中應(yīng)嚴(yán)格把控好質(zhì)量關(guān)，這就要求施工人員選擇質(zhì)量較高的材料。其中石子的選擇尤為重要，應(yīng)選擇配比良好的石子，控制其砂粒徑與含量，不僅能夠降低混凝土空隙率和收縮量，而且可提高混凝土強度[3]。此外，定時對混凝土進(jìn)行養(yǎng)護(hù)也可提高施工質(zhì)量，這也是整個施工過程中較為重要的環(huán)節(jié)，提高混凝土強度，從而避免失水而出現(xiàn)裂縫問題。同時，由于環(huán)境的問題，在對較多混凝土進(jìn)行保養(yǎng)時一般溫度較高，這時采用澆水降低溫度，也能在一定程度上提高施工質(zhì)量，避免混凝土裂縫問題。

表1 兩組血清miRNA-196a、miRNA-92a 表達(dá)比較（）

注 miRNA：微小RNA

2.2 宮頸癌患者臨床病理特征與血清miRNA-196a、miRNA-92a 水平的關(guān)系

ROC 曲線顯示，miRNA-196a聯(lián)合miRNA-92a預(yù)測宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的AUC 大于兩者單獨預(yù)測（Z=2.319、2.582，P=0.020、0.010）。見表6、圖1。

表2 宮頸癌患者臨床病理特征與血清miRNA-196a、miRNA-92a 水平的關(guān)系（）

注 FIGO：國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟；miRNA：微小RNA

2.3 不同血清miRNA-196a、miRNA-92a水平宮頸癌患者復(fù)發(fā)率比較

采用SPSS 26.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，比較采用χ2檢驗。正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，比較采用t檢驗。影響因素采用多因素Cox 回歸分析。預(yù)測價值采用受試者操作特征（receiver operator characteristic，ROC）曲線計算曲線下面積（area under the curve，AUC），比較采用Z 檢驗；采用Kaplan-Meier 分析生存時間。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

宮頸癌組血清miRNA-196a、miRNA-92a 表達(dá)高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）。見表1。

表3 不同血清miRNA-196a、miRNA-92a 水平宮頸癌患者復(fù)發(fā)率比較[例（%）]

2.4 影響宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素及多因素Cox回歸分析

差異因素為自變量，隨訪時間為時間變量，復(fù)發(fā)（是=1，否=0）為因變量。FIGO 分期ⅡA 期、間質(zhì)浸潤深度≥1/2、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、miRNA-196a≥5.239、miRNA-92a≥1.816 是宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立影響因素（P ＜0.05）。見表4～5。

1994年，互聯(lián)網(wǎng)第一次接入中國，24年間，網(wǎng)絡(luò)已經(jīng)將中國人的生活從線下移植到線上，人們在線上交流、購物、娛樂甚至理財與投資。人們自如地在線上與線下間切換，享受生活。當(dāng)人們剛剛習(xí)慣網(wǎng)絡(luò)互聯(lián)的世界，互聯(lián)網(wǎng)技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)悄然走進(jìn)轉(zhuǎn)型期，進(jìn)入下半場的創(chuàng)新融合之中，一個全新的數(shù)字世界正在開啟。

表4 影響宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素Cox 回歸分析[例（%）]

2.5 血清miRNA-196a、miRNA-92a 水平對宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測價值

不同F(xiàn)IGO 分期、間質(zhì)浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者血清miRNA-196a、miRNA-92a 水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）。見表2。

圖1 血清miRNA-196a、miRNA-92a 水平預(yù)測宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的ROC 曲線

表6 血清miRNA-196a、miRNA-92a 水平對宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測價值

圖1 不同血清miRNA-196a、miRNA-92a 水平宮頸癌患者無復(fù)發(fā)生存曲線

表5 影響宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素Cox 回歸分析

3 討論

術(shù)后復(fù)發(fā)是導(dǎo)致宮頸癌患者生存時間縮短和生命質(zhì)量降低的主要原因，ⅠA～ⅡA 期宮頸癌根治術(shù)后5 年復(fù)發(fā)率為10.0%～20.0%[10]。宮頸癌術(shù)后監(jiān)測旨在及早發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)，提升患者生存率和生命質(zhì)量，但目前尚無高級別證據(jù)支持最佳監(jiān)測策略，因此亟須探索宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)生物標(biāo)志物[11]。

miRNA 是一類非編碼單鏈小分子RNA，能通過與靶基因mRNA 的3’-非翻譯區(qū)負(fù)反饋調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)[4]。近年來，越來越多的研究表明，miRNA 與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系，可通過靶向特定的癌基因或抑癌基因來調(diào)控腫瘤進(jìn)展中的重要功能[12-16]。miRNA-196a 基因定位于HOX 基因簇，研究表明miRNA-196a 異常表達(dá)與多種惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[17-18]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組血清miRNA-196a高表達(dá)，且與FIGO 分期、間質(zhì)浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示miRNA-196a 在宮頸癌中可能發(fā)揮致癌基因作用。miRNA-196a 高表達(dá)復(fù)發(fā)率更高，是復(fù)發(fā)的危險因素，表明miRNA-196a 與宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。梁燕等[19]研究報道，宮頸癌組織中miRNA-196a 上調(diào)，抑制miRNA-196a 表達(dá)能抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力，驗證了本研究結(jié)果。其機(jī)制可能與miRNA-196a 能靶向孤兒核受體亞家族6 成員1、Lrig3，增強宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力和抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)[19-20]。

miRNA-92a 為miR-17-92 基因簇成員，miR-17-92 基因簇是首個被發(fā)現(xiàn)的miRNA 癌基因。因此，有研究報道了miRNA-92a 在惡性腫瘤中的作用[21-22]。本研究顯示，宮頸癌組血清miRNA-92a 高表達(dá)，與FIGO 分期、間質(zhì)浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示miRNA-92a 在宮頸癌中可能發(fā)揮致癌基因作用。本研究結(jié)果還顯示，miRNA-92a 高表達(dá)復(fù)發(fā)率更高，是復(fù)發(fā)的危險因素，提示miRNA-92a 與宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)密切相關(guān)。研究顯示，miRNA-92a 在宮頸癌細(xì)胞中高表達(dá)，干擾miRNA-92a 表達(dá)能通過下調(diào)生存素和基質(zhì)金屬蛋白酶2 表達(dá)抑制宮頸癌細(xì)胞增殖和促進(jìn)凋亡，但關(guān)于其靶向機(jī)制不明[23]。磷酸肌醇-3-激酶調(diào)節(jié)亞基1 是重要的抑癌基因，能負(fù)向調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生長、侵襲、遷移過程[24]。Wang 等[25]通過熒光素酶報告基因證實宮頸癌中miRNA-196a 能靶向下調(diào)磷酸肌醇-3-激酶調(diào)節(jié)亞基1 促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，提示miRNA-196a 可能靶向磷酸肌醇-3-激酶調(diào)節(jié)亞基1，促進(jìn)宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)。本研究顯示，miRNA-196a 聯(lián)合miRNA-92a 預(yù)測宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的AUC 大于兩者單獨預(yù)測，說明血清miRNA-196a、miRNA-92a 水平均能作為宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測指標(biāo)，且聯(lián)合檢測能更好地指導(dǎo)宮頸癌治療。

綜上所述，宮頸癌血清miRNA-196a、miRNA-92a水平升高，二者與FIGO 分期、間質(zhì)浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)有關(guān)，可作為宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測指標(biāo)。但關(guān)于miRNA-196a、miRNA-92a 影響宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)機(jī)制尚不明確，還需進(jìn)一步研究。