胡桃醌通過促進c-Myc泛素化降解抑制宮頸癌細胞的生長和促進凋亡

c-Myc是一種轉錄因子，在細胞的生長、增殖和凋亡發揮重要重要作用。研究表明c-Myc作為轉錄中心的作用，其可轉錄調節某些miRNA 的表達，而這些miRNA為調節性小RNA家族，通過靶向蛋白質編碼基因發揮作用。泛素（Ub）是含有76 個氨基酸殘基的蛋白質，可以通過E1-E2-E3 級聯反應傳遞至底物蛋白介導蛋白質的泛素化。在真核細胞中，泛素化是一種重要的蛋白質翻譯后修飾，它可以通過26 S 蛋白酶體介導底物蛋白的降解，或者調節底物蛋白的生物學功能。有研究表明冬凌草甲素可通過促發FBW7介導的c-Myc蛋白酶體降解過程抑制白血病細胞的增殖及轉移。

有研究表面，胡桃醌具有體外抗腫瘤的作用，例如胃癌、卵巢癌、乳腺癌、結腸癌等。本課題組前期研究表明胡桃醌可抑制宮頸癌細胞得增殖并促進其凋亡，而其機制尤其是對c-Myc蛋白的影響尚不清楚，故本研究擬在針對性研究胡桃醌對轉錄因子c-Myc蛋白泛素化降解的影響旨在為胡桃醌作為靶向藥物，為宮頸癌的治療提供分子生物學依據。

1 材料和方法

1.1 材料

HeLa細胞系來自中科院上海細胞生物學研究所，保存于吉林醫藥學院實驗室，培養液用Penicillin-Streptomycin Solution、胎牛血清與 Dulbecco's Modified Eagle Medium 培養基均來自杭州四季青公司，并按1∶10∶100配制。周期與凋亡試劑盒（碧云天）；胡桃醌和溴化四氮唑藍（MTT，Sigma）。各類單克隆抗體以及二抗（Santa Cruz）。MOTIC AE31顯微鏡（北京汗盟紫星儀器儀表有限公司）；伯樂-550型全自動酶標儀（上海領成生物科技有限公司）。

1.1 RNA干擾試驗

c-Myc敲低細胞株購自長春潤一生物有限公司。構建的3條c-Myc干擾序列：1：5'-GAGGGTCAAGTT GGACAGTGT-3'；……