湖羊SREBP1基因編碼區(qū)序列克隆及表達(dá)分析

李樊 舒嘉傲 李隱俠 孟春花 張晨儉 張俊 錢勇 曹少先

摘要： SREBP1是一個重要的核轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)控膽固醇和脂肪酸等合成和代謝，本研究旨在基于獲得湖羊SREBP1基因序列并分析其組織表達(dá)譜和卵巢中的表達(dá)定位，了解其在湖羊中可能的生物學(xué)功能。本研究利用RT-PCR技術(shù)對周歲湖羊卵巢組織中SREBP1基因編碼區(qū)序列進(jìn)行克隆和測序，用生物信息學(xué)軟件對序列進(jìn)行拼接、同源比對和功能預(yù)測分析，熒光定量PCR檢測其在湖羊組織中的表達(dá)模式，免疫組織化學(xué)染色法鑒定其在卵巢組織中的定位。結(jié)果顯示：SREBP1基因在湖羊卵巢組織中有2種剪接體，對應(yīng)編碼區(qū)長度分別為3 369 ?bp和3 441 ?bp，分別編碼1 122 個和1 146 個氨基酸殘基;SREBP1在哺乳動物中相對保守，含有經(jīng)典的bHLH-Zip結(jié)構(gòu)域，通過識別E-boxes或者固醇調(diào)節(jié)元件調(diào)控靶基因的表達(dá);組織表達(dá)譜分析結(jié)果顯示，SREBP1在湖羊組織中廣泛表達(dá)，提示SREBP1基因可能參與調(diào)控湖羊多種生物學(xué)過程。免疫組織化學(xué)染色法分析結(jié)果顯示，SREBP1基因在湖羊卵巢腔前卵泡和有腔卵泡中均有表達(dá)，主要定位于顆粒細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞和黃體細(xì)胞中，推測SREBP1可能在湖羊繁殖調(diào)控中發(fā)揮重要的作用。這些結(jié)果為進(jìn)一步研究湖羊SREBP1基因的功能提供了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞： SREBP1; 克隆; 序列特征; 湖羊

中圖分類號： S858.26?? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A?? 文章編號： 1000-4440（2022）03-0721-09

Sequence cloning and expression analysis of SREBP1 gene in ?Hu ?sheep

LI Fan 1，2 ， SHU Jia-ao 2 ， LI Yin-xia 2 ， MENG Chun-hua 2 ， ZHANG Chen-jian 2 ， ZHANG Jun 2 ， QIAN Yong 2 ， ?CAO Shao-xian 1，2

（1.College of Animal Science and Technology， Nanjing Agricultural University， Nanjing 210095， China; 2.Institute of Animal Science， Jiangsu Academy of Agricultural Sciences， Nanjing 210014， China）

Abstract：? SREBP1 is an important nuclear transcription factor， which is involved in regulating the synthesis and metabolism of cholesterol and fatty acids and other biological functions. The purpose of this study is to understand the possible biological functions of SREBP1 gene in ?Hu ?sheep based on its coding sequence， tissue expression profile and location in ovary. In this study， the coding region of SREBP1 gene in ?Hu ?sheep ovarian tissue was cloned and sequenced by RT-PCR. Bioinformatics software was used for splicing， homologous alignment and functional prediction analysis. The expression pattern in ?Hu ?sheep tissue was detected by real-time PCR， and its localization in ovarian tissue was identified by immunohistochemistry. The results showed that SREBP1 gene had two kinds of spliceosomes in ?Hu ?sheep ovary， and the length of corresponding coding regions was 3 369 ?bp and 3 441 ?bp， and encoding 1 122 ?and 1 146 ?amino acid residues， respectively. SREBP1 was relatively conserved in mammals and contained the classical bHLH-Zip domain. In addition it could regulate the expression of target genes by identifying E-boxes or sterol regulatory elements. The results of tissue expression profile analysis showed that SREBP1 was widely expressed in ?Hu ?sheep， suggesting that SREBP1 gene may be involved in regulating a variety of biological processes in ?Hu ?sheep. The results of immunohistochemical staining showed that SREBP1 gene was expressed in both antral follicles and preantral follicles of ?Hu ?sheep ovary， mainly located in granulosa cells， theca cells and luteal cells， suggesting that SREBP1 may play an important role in the reproductive regulation of ?Hu ?sheep. These results provide a basis for further study on the function of SREBP1 gene in ?Hu ?sheep.

Key words： SREBP1; clone; sequence characteristics; ?Hu ?sheep

固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（Sterol regulatory element binding protein， SREBP）是機(jī)體內(nèi)重要的核轉(zhuǎn)錄因子家族，參與調(diào)控膽固醇和脂肪酸的合成，對維持動物體內(nèi)脂質(zhì)代謝穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要 [1-3] 。SREBP屬于螺旋-莖環(huán)-螺旋亮氨酸拉鏈（Basic-loop-helix-leucine zipper，bHLH-Zip）家族，由3個結(jié)構(gòu)域組成，分別包含由1個反式激活區(qū)域、1個富含脯氨酸的區(qū)域和bHLH-Zip結(jié)構(gòu)域組成的NH2 端，2個疏水跨膜片段和1個COOH末端結(jié)構(gòu)域 [4] 。SREBP一般在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成之后被運(yùn)輸?shù)礁郀柣w，在高爾基體中依次經(jīng)過蛋白酶 S1 P 和 ?S2 P 水解，從膜中釋放出NH2 末端結(jié)構(gòu)域然后異位到細(xì)胞核，在細(xì)胞核內(nèi)作為轉(zhuǎn)錄因子與靶基因的啟動子結(jié)合從而激活相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄 [5] 。

SREBP 主要包括SREBP1和SREBP2 2個基因，其中SREBP1在哺乳動物中有2種亞型：SREBP1A和SREBP1C [6] 。研究結(jié)果顯示，SREBP1A主要參與調(diào)控膽固醇、脂肪酸和甘油三酯合成，而SREBP1C更能促進(jìn)與脂肪酸相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄 [7] 。截至目前，人、小鼠、山羊和雞中的SREBP1A和SREBP1C 2個基因亞型的序列及功能差異已有報道 [8-11] ，但在綿羊中鮮見研究。本研究以江蘇省特色綿羊品種——湖羊為研究對象，擴(kuò)增湖羊卵巢組織中SREBP1基因編碼區(qū)序列并進(jìn)行序列特征分析，鑒定其在湖羊各個組織中的表達(dá)模式和在卵巢組織中的定位，為進(jìn)一步研究該基因在綿羊中的功能及調(diào)控機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

試驗羊為3只健康狀況良好的周歲湖羊母羊，來自江蘇西來原生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司，體質(zhì)量（33.0± 1.6） kg，屠宰后立即采集心、肝、脾、腎、大腸、小腸、卵巢、子宮和肌肉等，樣品分成2份，1份置液氮中帶回實驗室，存放于-80 ℃ 備用，1份放入4%多聚甲醛中固定備用。

1.2 RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄

參照動物組織總RNA提取試劑盒（百泰克生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，北京）說明書提取湖羊各組織樣品RNA，Nandrop分光光度計測定RNA質(zhì)量和濃度，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（諾唯贊生物科技有限公司產(chǎn)品，南京）將mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，反應(yīng)體系：1 000 ?ng RNA，4 μl 4× g DNA wiper Mix，加RNase Free ddH2 O至16 μl，混合均勻，置于PCR儀上進(jìn)行基因組DNA去除，程序為42 ℃ 2 min，隨后加入5× HiScript II qRT SuperMix II 4 μl吹打混勻，50 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，置-20 ℃ 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 引物合成與PCR擴(kuò)增

根據(jù)NCBI上綿羊SREBP1預(yù)測序列 （XM_027974784.2和XM_027974786.2），采用Primer Premier5.0軟件設(shè)計4對特異性引物P1～ P4，用于分段擴(kuò)增湖羊SREBP1基因編碼區(qū)序列;設(shè)計SREBP1 Real-time PCR引物，以 β-actin 為內(nèi)參基因進(jìn)行湖羊各組織SREBP1基因表達(dá)譜的鑒定。引物由南京擎科公司合成，引物序列見表1。

RT-PCR反應(yīng)體系為25.0 μl，其中含12.5 μl 2×? Taq ?master Mix，1.0 μl cDNA，上游和下游引物各1.0 μl，9.5 μl ddH2 O。反應(yīng)條件為：預(yù)變性95 ℃ 3 min;95 ℃ 15 s變性，退火15 s （具體退火溫度見表1），72 ℃ 90 s，共35個循環(huán);72 ℃ 5 min。

1.4 克隆測序

RT-PCR擴(kuò)增獲得的片段經(jīng)過膠回收試劑盒獲得純化的目的片段，將目的片段與pMD-19T載體充分混合，16 ℃連接30 min，連接液轉(zhuǎn)化DH5 α 感受態(tài)，涂布在LB板上，37 ℃過夜。挑取單克隆培養(yǎng)菌， PCR鑒定陽性的菌液送南京擎科公司測序。

1.5 湖羊SREBP1基因生物信息學(xué)分析

分段擴(kuò)增、克隆測序得到的SREBP1序列用Lasergene和DNAMAN6.0軟件比對、拼接和翻譯。SREBP1基因開放閱讀框的預(yù)測采用NCBI的ORF Finder （http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/gorf）在線軟件進(jìn)行。使用ExPASy數(shù)據(jù)庫在線工具（http：//web.expasy.org/cgi-bin/protparam/protparam）進(jìn)行SREBP1氨基酸序列特征及蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析，采用SMART網(wǎng)站在線工具（http：//smart.embl-heidelberg.de）進(jìn)行蛋白質(zhì)功能域預(yù)測分析。

1.6 湖羊各組織中SREBP1基因的實時熒光定量PCR

以 β-actin 為內(nèi)參基因，Real-time PCR檢測湖羊心、肝、脾、腎、大腸、小腸、卵巢、子宮和肌肉組織中SREBP1基因的表達(dá)水平。每20.0 μl反應(yīng)體系中含2.0 μl cDNA，10.0 μl 2×ChamQ SYBR qPCR Master Mix，上游引物和下游引物各0.4 μl，7.2 μl ddH2 O。反應(yīng)條件為：95 ℃ 30 s;95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，共40個循環(huán);最后95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，95 ℃ 15 s。每個樣本重復(fù)3次。

1.7 湖羊卵巢組織的免疫組織化學(xué)染色

采用免疫組織化學(xué)檢測SREBP1在湖羊卵巢組織中的表達(dá)情況，具體操作如下：取4%多聚甲醛中固定36 h的湖羊卵巢組織，依次置于70%、80%、90%、95%、100%（體積比）頤乙醇中脫水，置于二甲苯中進(jìn)行透明后，用石蠟包埋并切片（厚4 μm）。石蠟切片用二甲苯脫蠟，依次在逐步降低濃度的乙醇中水化處理，然后在檸檬酸三鈉溶液中高火熱修復(fù)10 min，自然冷卻，隨后3%的雙氧水敷育30 min，阻斷內(nèi)源性過氧化氫酶，PBS充分漂洗3次，1次5 min，用10% BSA封閉1 h后，兔源抗SREBP1抗體（稀釋濃度：1∶ 100，體積比）4 ℃孵育過夜。PBS充分漂洗3次，1次 5 min，二抗（Abcam;稀釋濃度：1∶ 500）室溫孵育60 min，PBS充分漂洗3次，1次 5 min，DAB（Sigma-Aldrich）顯色劑顯色5 min，自來水沖洗終止染色，用蘇木精復(fù)染，用乙醇脫水并置于二甲苯中透明，中性樹膠封片。將切片置于顯微鏡下觀察，采集圖像，用imageJ軟件進(jìn)行光密度值分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 湖羊SREBP1基因克隆

根據(jù)NCBI上綿羊SREBP1預(yù)測序列，分段設(shè)計4對引物（圖1A），以湖羊卵巢組織cDNA為模板，擴(kuò)增湖羊SREBP1基因編碼區(qū)全序列（圖1B），目的條帶清晰，片段大小與預(yù)測結(jié)果一致。回收擴(kuò)增的目的條帶測序，發(fā)現(xiàn)與預(yù)測序列高度同源，說明獲得的序列為湖羊SREBP1編碼區(qū)序列。

2.2 湖羊SREBP1基因序列特征分析

將PCR擴(kuò)增獲得的SREBP1分段序列進(jìn)行拼接，得到SREBP1在湖羊卵巢組織中的2個剪接體，拼接好的2個序列用ORF Finder在線軟件分析SREBP1基因的開放閱讀框，預(yù)測對應(yīng)編碼區(qū)長度分別為3 441 ?bp和3 369 ?bp，命名為SREBP1L和SREBP1S。DNAMAN比對結(jié)果顯示，擴(kuò)增獲得的湖羊SREBP1L核苷酸序列與NCBI上綿羊預(yù)測SREBP1的剪接體X1 （XM_027974784.2）、X2 （XM_042255744.1）、X3 （XM_042255745.1）和X4 （XM_027974786.2） 編碼區(qū)的同源性分別為99.91%、96.89%、96.48%和96.81%，其中與X1編碼區(qū)的同源性最高，僅在c.1855T> C、c.2365A> C和c.2799A> C有3個突變，沒有插入和缺失;SREBP1S核苷酸序列與NCBI綿羊預(yù)測剪接體X1、X2、X3和X4編碼區(qū)的同源性分別為96.89%、100.00%、99.29%和94.05%，與X2編碼區(qū)序列完全一致。

以擴(kuò)增獲得的湖羊SREBP1L序列為對象，與其他物種序列的同源性比對后發(fā)現(xiàn)，與人類（XM_024450894.1）、豬 （NM_214157.1）、小鼠 （NM_011480.4）、牛 （NM_001113302.1）、山羊 （NM_001285755.1） 和雞 （NM_204126.2）編碼區(qū)的同源性分別為83.79%、87.79%、78.88%、96.48%、98.88%和67.94%，與反芻動物牛和山羊的同源性較高，與禽類的同源性較低。

2.3 湖羊SREBP1蛋白氨基酸序列和結(jié)構(gòu)分析

擴(kuò)增獲得的湖羊SREBP1 2個剪接體序列分別編碼1 146 和1 122 個氨基酸殘基（SREBP1L和SREBP1S）（圖2）。氨基酸序列比對結(jié)果顯示，SREBP1L、SREBP1S氨基酸序列分別與小鼠SREBP1A（NP_035610 ）、SREBP1C（NP_001345243）的氨基酸序列同源性為79.40%、79.76%;與人的SREBP1A（NP_001375318）、SREBP1C（NP_001308025）的氨基酸序列同源性為85.03%、85.24%;SREBP1S氨基酸序列與SREBP1L氨基酸序列相比，僅在 N 端缺失了24個氨基酸殘基，這與小鼠、人SREBP1C相對于SREBP1A的 N 末端缺失24個氨基酸殘基類似，且在 N 端24個氨基酸殘基中，湖羊與小鼠的同源性為70.8%，與人類的同源性為83.3%（圖3）。

湖羊SREBP1L和SREBP1S編碼的蛋白質(zhì)氨基酸序列中亮氨酸（Leu，L）的比例最高，分別為14.0%和13.8%，其次為丙氨酸（Ala，A），比例分別為12.6%和12.3%，二者均不含吡咯賴氨酸（Pyl，O）和硒半胱氨酸（Sec，U）（圖4）。

2.4 湖羊SREBP1蛋白理化性質(zhì)

湖羊SREBP1基因編碼的2個蛋白質(zhì)（SREBP1L和SREBP1S）預(yù)測相對分子質(zhì)量分別為121 050.78 和118 550.99 ，理論等電點分別為8.81和9.16。預(yù)測正電荷氨基酸殘基數(shù)均為104個，負(fù)電荷氨基酸殘基數(shù)分別為93個和86個，體外半衰期均為30 h。SREBP1蛋白是一個疏水性蛋白，湖羊SREBP1基因編碼的2個蛋白質(zhì)親/疏水性總和（ GRAVY ）分別為-0.099 和-0.106 。此蛋白質(zhì)不存在信號肽，與其他物種的SREBP1蛋白一樣，湖羊SREBP1編碼的2個不同蛋白質(zhì)均在 N 端有一段脯氨酸富集區(qū)域及典型的bHLH結(jié)構(gòu)域（圖2）。

2.6 SREBP1基因在湖羊卵巢組織中的表達(dá)

湖羊卵巢組織經(jīng)免疫組織化學(xué)染色后，其不同發(fā)育階段卵泡中均存在棕黃色陽性產(chǎn)物，結(jié)果顯示SREBP1在湖羊卵巢腔前卵泡和有腔卵泡中均有表達(dá)，主要定位于顆粒細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞和黃體細(xì)胞中（圖6），且SREBP1蛋白表達(dá)量無顯著差異（圖7）。

3 討 論

固醇調(diào)節(jié)元件蛋白SREBP1，1995年從人hela細(xì)胞核抽提物中分離并鑒定 [8] ，隨后，小鼠 [9] 、雞 [10] 和山羊 [11] 的 SREBP 序列被成功克隆，為后續(xù)SREBP1相關(guān)功能的研究提供了重要的基礎(chǔ)。SREBP1主要由2個亞型組成，SREBP1A和SREBP1C，序列差異主要在NH2 末端的24個氨基酸殘基，其他序列完全一致 [11] ，其核酸序列差異主要在啟動子區(qū)和第一外顯子區(qū)。本試驗通過PCR分段擴(kuò)增和序列拼接獲得湖羊SREBP1基因編碼區(qū)全序列，分析發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增后獲得的2個SREBP1不同剪接體SREBP1L和SREBP1S。相對于SREBP1L，SREBP1S的氨基酸序列在NH2端有24個氨基酸缺失，其余的氨基酸序列完全一致，推測本研究中得到的SREBP1L和SREBP1S可能是湖羊SREBP1的2個亞型，SREBP1A和SREBP1C。

研究結(jié)果表明，SREBP1A主要參與膽固醇合成，而SREBP1C參與脂肪酸代謝。當(dāng)細(xì)胞里的膽固醇供應(yīng)充足時，SCAP（SREBP裂解活化蛋白）-SREBP復(fù)合物通過固醇原件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白SCAP與胰島素調(diào)節(jié)蛋白INSIG結(jié)合形成SCAP-SREBPs-INSIG復(fù)合物嵌入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中 [3，12] 。當(dāng)膽固醇水平變低或者膽固醇的需求變高時，SCAP與INSIG分離，SCAP-SREBP復(fù)合物易位到高爾基體，被高爾基體中的蛋白水解酶S1P加工，使SREBP與SCAP裂解，裂解后有活性的SREBP轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核，激活膽固醇合成通路中關(guān)鍵酶羥甲基戊二酰輔酶A還原酶（ HMGCR ）基因或者脂肪合成關(guān)鍵基因（ LDLR ） ?[3] ，增加膽固醇和脂肪合成，調(diào)控機(jī)體內(nèi)膽固醇和脂肪合成的穩(wěn)態(tài)。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，SREBP1中含有的bHLH-Zip結(jié)構(gòu)域能與E-boxes（5′-CANNTG-3′） 和固醇調(diào)節(jié)元件（Sterol regulatory element， SRE） （5′-TCACNCCAC-3′）結(jié)合，調(diào)控靶基因表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控各種生物學(xué)過程 [13] 。本研究發(fā)現(xiàn)，湖羊SREBP1基因序列與哺乳動物SREBP1基因序列同源性較高，特別是與反芻動物同源性高達(dá)96.48%以上，說明SREBP1是比較保守的轉(zhuǎn)錄因子。氨基酸序列分析結(jié)果表明，與其他物種的SREBP1相似，湖羊SREBP1L和SREBP1S都含有經(jīng)典的bHLH-Zip結(jié)構(gòu)，與前人的研究結(jié)果一致 [13] 。

組織表達(dá)譜分析結(jié)果顯示，SREBP1在牛、雞等動物組織中廣泛表達(dá)，可能參與調(diào)控各種生物學(xué)進(jìn)程 [14-16] ?。在HT29 細(xì)胞中過表達(dá)SREBP1導(dǎo)致 MMP7 表達(dá)量上調(diào)、激活NF-kappa B信號通路并促進(jìn)結(jié)腸癌、直腸癌的侵襲 [17] 。在腎臟中，SREBP1激活TGF- β 信號，在腎纖維化中發(fā)揮重要的調(diào)控作用 [18] ;SREBP1與子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)聯(lián) [19] 。湖羊組織表達(dá)譜顯示，SREBP1在湖羊的所有組織中均有表達(dá)，提示湖羊SREBP1參與多種組織生物學(xué)過程。但有研究結(jié)果顯示，SREBP1在牛的背最長肌中高表達(dá)，而本研究結(jié)果顯示其在湖羊肌肉組織中表達(dá)量最低，可能是因為背最長肌脂肪含量較高，與樣品采集的部位有關(guān) [15] 。

包梅等 [20] 的研究結(jié)果顯示，SREBP1蛋白主要分布在牦牛乳腺腺泡上皮細(xì)胞、乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞，且SREBP1 mRNA表達(dá)量與牦牛泌乳量有關(guān)。而本研究的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SREBP1在湖羊卵巢各級卵泡膜細(xì)胞、顆粒細(xì)胞和黃體細(xì)胞中均有表達(dá)，且研究發(fā)現(xiàn)SREBP1在卵巢組織中也發(fā)揮功能。多囊卵巢綜合征女性和子宮內(nèi)膜癌女性子宮內(nèi)膜的SREBP1 基因表達(dá)水平與正常女性相比顯著增加 [21] ，且SREBP1調(diào)控人的卵巢顆粒-黃體細(xì)胞中LHCGR（促黃體生成素受體）表達(dá)和孕酮水平 [22] 。提示SREBP1可能參與調(diào)控湖羊卵巢發(fā)育進(jìn)而調(diào)控繁殖性能。

本研究獲得湖羊SREBP1基因2個剪接體，分別編碼SREBP1L和SREBP1S，含有經(jīng)典的bHLH-Zip結(jié)構(gòu)域。SREBP1在湖羊組織中廣泛表達(dá)，在湖羊卵巢各級卵泡均有表達(dá)，主要定位于顆粒細(xì)胞和黃體細(xì)胞中。這些結(jié)果為進(jìn)一步研究湖羊SREBP1的生物學(xué)功能提供了線索。

參考文獻(xiàn)：

[1] SHIMANO H， SATO R. SREBP-regulated lipid metabolism： convergent physiology-divergent pathophysiology[J]. Nature Reviews Endocrinology， 2017， 13（12） ：710-730.

[2] XUE L， QI H， ZHANG H， et al. Targeting SREBP-2-regulated mevalonate metabolism for cancer therapy[J]. Frontiers in Oncology， 2020， 10： 1510.

[3] BROWN M， RADHAKRISHNAN A， GOLDSTEIN J. Retrospective on cholesterol homeostasis： the central role of scap[J]. Annual Review of Biochemistry， 2017， 87： 1-25.

[4] GAO Y， ZHOU Y， GOLDSTEIN J， et al. Cholesterol-induced conformational changes in the sterolsensing domain of the Scap protein suggest feedback mechanism to control cholesterol synthesis[J]. The Journal of Biological Chemistry， 2017， 292（21）：8729-8737.

[5] GOLDSTEIN J， DEBOSE-BOYD R， BROWN M. Protein sensors for membrane sterols[J]. Cell， 2006， 124： 35-46.

[6] LEE S， KANG S， ANG M J， et al. Deficiency of sterol regulatory element-binding protein-1c induces schizophrenia-like behavior in mice[J]. Genes， Brain and Behavior， 2018， 18（4）：e12540.

[7] YU X， LIN Q， WU Z， et al. ZHX2 inhibits SREBP1c -mediated de novo lipogenesis in hepatocellular carcinoma via miR-24-3p[J]. The Journal of Pathology， 2020， 252（4）：358-370.

[8] HUA X， WU J， GOLDSTEIN J， et al. Structure of the human gene encoding sterol regulatory element binding protein-1 （SREBF1） and localization of SREBF1 and SREBF2 to chromosomes 17p11.2 and 22q13[J]. Genomics， 1995， 25： 667-673.

[9] INOUE J， SATO R. A novel splicing isoform of mouse sterol regulatory element-binding protein-1 （SREBP-1）[J]. Bioscience， Biotechnology， and Biochemistry， 1999， 63： 243-245.

[10] ASSAF S， HAZARD D， PITEL F， et al. Cloning of cDNA encoding the nuclear form of chicken sterol response element binding protein-2 （SREBP-2）， chromosomal localization， and tissue expression of chicken SREBP-1 and SREBP-2 genes[J]. Poult Sci， 2003， 82（1）： 54-61.

[11] HF X， J L， HP W， et al. Sterol regulatory element binding protein-1 （SREBP-1） c promoter： characterization and transcriptional regulation by mature SREBP-1 and liver X receptor alpha in goat mammary epithelial cells[J]. J Dairy Sci， 2016， 99（2）： 1595-1604.

[12] ADAMS C， REITZ J， BRABANDER J， et al. Cholesterol and 25-hydroxycholesterol inhibit activation of SREBPs by different mechanisms， both involving SCAP and insigs[J]. The Journal of Biological Chemistry， 2005， 279： 52772-52780.

[13] KIM J B， SPOTTS G， HALVORSEN Y D， et al. Dual DNA binding specificity of ADD1/SREBP1 controlled by a single amino acid in the basic helix-loop-helix domain[J]. Molecular and Cellular Biology， 1995， 15： 2582-2588.

[14] 張 樂，彭 燮，劉 揚(yáng)，等. 牛 A-FABP 與SREBP1基因的組織表達(dá)規(guī)律研究[J].家畜生態(tài)學(xué)報，2014，35（11）：18-23.

[15] 程 景，張元慶，王 曦，等.晉南牛固醇結(jié)合原件蛋白1基因在不同組織中表達(dá)規(guī)律及其與肌內(nèi)脂肪含量的相關(guān)性研究[J].動物營養(yǎng)學(xué)報，2021，33（7）：4079-4087.

[16] ASSAF S，HAZARD D，PITEL F，et al. Cloning of cDNA encoding the nuclear form of chicken sterol response element binding protein-2 （SREBP-2）， chromosomal localization， and tissue expression of chicken SREBP-1 and -2 genes[J].Poult Sci，2003，82（1）：54-61.

[17] GAO Y， NAN X， SHI X， et al. SREBP1 promotes the invasion of colorectal cancer accompanied upregulation of MMP7 expression and NF- κ B pathway activation[J]. BMC Cancer， 2019， 19：685.

[18] DOROTEA D， KOYA D， HA H. Recent insights into SREBP as a direct mediator of kidney fibrosis via lipid-independent pathways[J]. Frontiers in Pharmacology， 2020， 11：265.

[19] TAPIA PIZARRO A， VILOS C， MARIN J， et al. Bioinformatic detection of E47， E2F1 and SREBP1 transcription factors as potential regulators of genes associated to acquisition of endometrial receptivity[J]. Reproductive Biology and Endocrinology ： RB&E， 2011， 9： 14.

[20] 包 梅，趙生賢，馬 悅，等. 不同生理狀態(tài)下牦牛乳腺組織中SREBP1的表達(dá)[J]. 中國獸醫(yī)科學(xué)，2021，51（5）：656-662.

[21] SHAFIEE M N， MONGAN N， SEEDHOUSE C， et al. Sterol regulatory element binding protein-1 （SREBP1） gene expression is similarly increased in polycystic ovary syndrome and endometrial cancer[J]. Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica， 2017， 96 （5）：556-562.

[22] LI Y， GUO X， GULAPPA T， et al. SREBP plays a regulatory role in LH/hCG receptor mRNA expression in human granulosa-lutein cells[J]. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism，2019， 104 （10）：4783-4792.

（責(zé)任編輯：陳海霞）

收稿日期：2021-11-25

基金項目：江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新基金項目[CX（20）3013];國家自然科學(xué)基金項目（31902155）

作者簡介：李 樊（1997-），女，湖北孝感人，碩士研究生，主要從事動物分子生物學(xué)研究。（E-mail）lf15205159110@163.com

通訊作者：曹少先， （E-mail）sxcao@jaas.ac.cn