基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和斑馬魚(yú)模型的杜仲抗帕金森病作用

張鵬宇，靳 夢(mèng)，商學(xué)良，張姍姍，李麗娜

(1.華北理工大學(xué)心理與精神衛(wèi)生學(xué)院，河北 唐山 063200；2.齊魯工業(yè)大學(xué)(山東省科學(xué)院)生物研究所， 山東省科學(xué)院藥物篩選技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250103)

帕金森病(Parkinson′s disease，PD)，是世界第二大神經(jīng)退行性疾病，其患病率隨著患者年齡的增加而上升。主要表現(xiàn)出行動(dòng)遲緩、靜止性震顫、肌肉僵直等癥狀。.造成PD的主要原因?yàn)槟X內(nèi)多巴胺神經(jīng)元的減少，進(jìn)而對(duì)紋狀體分泌多巴胺(dopamine，DA)產(chǎn)生影響[1]。DA主要通過(guò)多巴胺受體(dopamine receptor，DR)發(fā)揮正常功能。DR包括激活性受體D1類(lèi)(DRD1和DRD5)和抑制性受體D2類(lèi)(DRD2、DRD3和DRD4)[2]。其中，DRD1、DRD2和DRD3常見(jiàn)于黑質(zhì)-紋狀體和中腦-邊緣系統(tǒng)，并且在腦內(nèi)有豐富的表達(dá)量，主要參與行為和情緒的調(diào)控[3]；DRD4主要分布于海馬區(qū)，對(duì)神經(jīng)傳遞起到調(diào)節(jié)作用[4]；DRD5是信息傳遞和神經(jīng)沖動(dòng)傳遞的重要功能性受體[5]。

臨床大多采用化學(xué)制劑治療PD，雖然PD癥狀在一定程度上有所緩解，但長(zhǎng)期服用會(huì)出現(xiàn)一系列不良反應(yīng)，藥效也會(huì)逐漸減退。此外，這些藥物無(wú)法修復(fù)多巴胺神經(jīng)元的損傷，也不能緩解多巴胺神經(jīng)元的退化。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中，PD的發(fā)病機(jī)制尚不明確，大多認(rèn)為與多巴胺神經(jīng)元有關(guān)。杜仲是中國(guó)特有的木本植物，廣泛生長(zhǎng)于中國(guó)中南部。早在2000多年前，杜仲已有入藥記載，并且杜仲在保護(hù)神經(jīng)元方面具有較好的效果。因此，研究杜仲可能具有抗PD活性。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)以中醫(yī)理念為基本研究方法，是闡明活性成分和中藥潛在機(jī)制的可行策略。斑馬魚(yú)模型是一種新型生物模型，因其體積小，繁殖快且產(chǎn)量大，身體透明易于觀察等特點(diǎn)已廣泛應(yīng)用于活性評(píng)價(jià)中。此外，斑馬魚(yú)神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和發(fā)育過(guò)程與人類(lèi)高度相似，實(shí)驗(yàn)中常用來(lái)模擬人類(lèi)相關(guān)疾病研究。本研究根據(jù)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果，對(duì)杜仲抗PD可能存在的活性成分、作用靶點(diǎn)和通路進(jìn)行預(yù)測(cè)，然后利用斑馬魚(yú)PD模型進(jìn)行檢驗(yàn)，明確杜仲抗PD的相關(guān)作用機(jī)制。

1 材料

1.1 藥物提取將干燥的杜仲進(jìn)行磨粉處理，將粉末和純凈水按照1 ∶10的比例進(jìn)行回流提取，回流2次，每次2 h，回流結(jié)束后將得到的混合液進(jìn)行離心，取上清液進(jìn)行抽濾，將抽濾后得到的液體進(jìn)行旋蒸，待旋蒸瓶?jī)?nèi)的水分全部旋出，將其放入抽真空箱24 h，最終得到較為純凈的杜仲干燥粉末。以上藥物提取在山東省科學(xué)院藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室完成并檢測(cè)。

1.2 儀器北京愛(ài)生公司斑馬魚(yú)養(yǎng)殖系統(tǒng)，Viewpoint公司Zebrabox斑馬魚(yú)行為分析儀；羅氏有限公司實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀器、蔡司光學(xué)有限公司熒光顯微鏡、伯樂(lè)生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司C1000 Touch梯度PCR儀、基因有限公司超微量分光光度計(jì)。

1.3 動(dòng)物野生型斑馬魚(yú)AB和轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)Vmat:GFP由山東省科學(xué)院生物研究所提供，在恒溫28 ℃的斑馬魚(yú)養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行飼養(yǎng)，遵循照明黑暗14 h：10 h的生物節(jié)律，定點(diǎn)投食。

2 方法

2.1 杜仲活性成分篩選在藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)TCMSP(http://lsp.nwsuaf.edu.cn/tcmsp.php)，以“杜仲”為關(guān)鍵詞對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行檢索。然后根據(jù)口服生物利用度(oral bioavailability，OB)≥30%，藥物相似性(drug likeness，DL)≥0.18篩選有效活性成分。

2.2 杜仲活性成分潛在靶點(diǎn)收集在TCMSP中收集杜仲活性成分的相應(yīng)靶點(diǎn)信息，然后通過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行分析轉(zhuǎn)化，獲取與活性成分作用的相關(guān)靶點(diǎn)(人源)。

2.3 PD疾病相關(guān)靶點(diǎn)的篩選與收集以“Parkinson′s disease”為關(guān)鍵詞，在DISGENET數(shù)據(jù)庫(kù)(http:/ /www.disgenet.org/)中進(jìn)行檢索，收集PD相關(guān)疾病靶點(diǎn)，篩選條件為：得分(score值)>0.1。

2.4 杜仲活性成分-潛在靶點(diǎn)-PD疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建根據(jù)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出與杜仲活性成分相關(guān)的潛在靶點(diǎn)，利用cytoscape 3.7.2軟件繪制出杜仲活性成分-潛在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，再將其結(jié)果與PD疾病靶點(diǎn)進(jìn)行比對(duì)，生成杜仲活性成分-PD疾病網(wǎng)絡(luò)圖，并利用FUNRICHNEW.exe繪制杜仲和PD共有靶點(diǎn)的韋恩圖。

2.5 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建(protein-protein interaction，PPI)在STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)(http:/ /string-db.org /cgi /input．Pl)輸入杜仲和PD共有的交集靶點(diǎn)蛋白名稱，獲取交集靶點(diǎn)蛋白信息，收集數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件，根據(jù)Drgee值拓?fù)浞治鰳?gòu)建出PPI網(wǎng)絡(luò)圖。

2.6 杜仲對(duì)治療PD靶點(diǎn)蛋白的GO功能富集分析和 KEGG通路富分析為了表明杜仲的藥物靶蛋白在基因功能中的作用，利用Metascape數(shù)據(jù)庫(kù)(https://metascape.org/gp/index.html)對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)中篩選出的核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能富集分析。之后使用Metascape對(duì)KEGG通路富集分析進(jìn)行篩選，探討其緩解PD的作用通路并進(jìn)一步對(duì)富集信號(hào)通路進(jìn)行分析，獲得各通路相關(guān)網(wǎng)絡(luò)圖。

2.7 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法

2.7.1實(shí)驗(yàn)分組及處理 上午10時(shí)將1 dpf(day post fertilization，dpf)的胚胎進(jìn)行脫膜處理，脫膜后的斑馬魚(yú)用養(yǎng)魚(yú)水反復(fù)沖洗2-3次，洗掉多余的脫膜劑。放入孵育箱2-3 h，使其適應(yīng)溫度。本實(shí)驗(yàn)分為以下3組:空白對(duì)照組、50 μmol·L-11-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶 (1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-terahydropyridine，MPTP)處理組、50 μmol·L-1MPTP與25 mg·L-1的杜仲共處理組。每日按時(shí)換藥，換完藥后放入培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

2.7.2行為學(xué)監(jiān)測(cè) 在6 dpf時(shí)，用48孔板進(jìn)行斑馬魚(yú)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，每孔1條，放入Zebrabox斑馬魚(yú)行為分析儀中，先使其適應(yīng)環(huán)境10 min。之后開(kāi)始檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)間為20 min。運(yùn)用Zeblab軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)算每條魚(yú)游動(dòng)總距離和平均速度。

2.7.3斑馬魚(yú)腦內(nèi)多巴胺神經(jīng)元檢測(cè) 本實(shí)驗(yàn)從1 dpf時(shí)給藥，連續(xù)給藥3 d，在3 dpf時(shí)用蔡司顯微鏡觀察轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)Vmat：GFP多巴胺神經(jīng)元的發(fā)育情況。

2.7.4熒光定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR) 在6 dpf時(shí)，每組選取30條斑馬魚(yú)幼魚(yú)進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)，將斑馬魚(yú)按組別放入EP管中，用清水沖洗2-3次，洗去多余的藥物殘留，最后將EP管中的水全部吸出，加入裂解液，在破碎機(jī)中研磨，使其完全裂解，然后將研磨后的裂解物放入離心機(jī)中離心，取上清液。RNA提取后，利用超微量分光光度計(jì)檢測(cè)所有組RNA的濃度，之后對(duì)RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)，將反轉(zhuǎn)得到的cDNA進(jìn)行稀釋，然后加入相應(yīng)的引物用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀對(duì)各個(gè)基因進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增結(jié)束后，計(jì)算各組基因的相對(duì)表達(dá)量。

3 結(jié)果

3.1 杜仲抗PD有效成分及與PD靶點(diǎn)應(yīng)用TCMSP數(shù)據(jù)分析平臺(tái)對(duì)杜仲活性成分進(jìn)行收集，以類(lèi)藥性五原則、OB≥30%、DL≥0.18為篩選條件。篩選結(jié)果去除重復(fù)項(xiàng)后，共得到26個(gè)杜仲有效活性成分(Tab 1)，包括β-谷甾醇(beta-sitosterol)、槲皮素(quercetin)和β-胡蘿卜素(beta-carotene)等。通過(guò)DISGENET數(shù)據(jù)庫(kù)檢索“Parkinson′s disease”，共挖掘到359個(gè)PD靶點(diǎn)。最終得到杜仲抗PD的潛在作用靶點(diǎn)共33個(gè)(Fig 1)，包括DRD1、DRD2、DRD3等。

Fig 1 Venn diagram of Eucommia ulmoides anti-PD targetVenn diagram of anti-PD targets of Eucommia ulmoides; Blue:The number of active components of Eucommia ulmoides was 199; Yellow:The number of PD targets was 359; Green:The number of intersection targetswas 33.

Tab 1 Information of active components of Eucommia ulmoides

3.2 杜仲抗PD作用靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)通過(guò)STRING數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)篩選出的杜仲抗PD的33個(gè)潛在作用靶點(diǎn)進(jìn)行分析，獲取靶點(diǎn)相互作用信息(Fig 2)，得到33個(gè)節(jié)點(diǎn)和189條邊，提示杜仲抗PD的多靶點(diǎn)、多通路的作用特點(diǎn)。

Fig 2 PPI network of anti-PD targets of Eucommia ulmoides

3.3 GO功能富集分析對(duì)杜仲抗PD潛在靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能富集分析，共富集到41條結(jié)果，生物過(guò)程方面包括調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)(regulation of neurotransmitter levels)，分子功能方面涉及多巴胺神經(jīng)受體活性(dopamine neurotransmitter receptor activity)(Tab 2)，提示多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)可能參與杜仲抗PD功能。

Tab 2 GO functional enrichment analysis results(top 20)

3.4 KEGG通路富集分析結(jié)果共富集得到10條通路與杜仲改善PD相關(guān)，包括癌癥的途徑(Pathways in cancer)、流體剪切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化(fluid shear stress and atherosclerosis)、糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號(hào)通路(AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications)、鉑耐藥(platinum drug resistance)、小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer)、多巴胺能突觸(dopaminergic synapse)等(Tab 3和Fig 3)。值得注意的是，多巴胺能突觸相關(guān)信號(hào)通路與PD密切相關(guān)。

Tab 3 Results of KEGG pathway enrichment analysis

Fig 3 Bar chart of KEGG pathway enrichment analysis

3.5 杜仲改善斑馬魚(yú)PD樣癥狀——行為學(xué)驗(yàn)證斑馬魚(yú)PD模型行為會(huì)表現(xiàn)出與PD患者類(lèi)似的運(yùn)動(dòng)遲緩等現(xiàn)象，為了驗(yàn)證杜仲的抗PD活性，本研究利用行為學(xué)進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果如Fig 4。Fig 4A表示不同實(shí)驗(yàn)組(n=10)斑馬魚(yú)游動(dòng)的總距離，與空白對(duì)照組相比，造模組斑馬魚(yú)的游動(dòng)距離明顯減少，游動(dòng)速度也明顯降低(Fig 5B)；與造模組相比，杜仲處理組的游動(dòng)總距離明顯增加(Fig 4A，杜仲處理組所示)，游動(dòng)速度明顯變快(Fig 4B，杜仲處理組所示)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)果顯示，杜仲可以改善由MPTP造成的斑馬魚(yú)PD樣行為。

Fig 4 Eucommia ulmoides improved PD-like behavior of zebrafishA:The total swimming distance of zebrafish. B:The average speed of a zebrafish in the dark. The total distance of each zebrafish was analyzed by Zeblab software (**P<0.01 vs blank control group; #P<0.05,##P<0.01 vs Eucommia ulmoides treatment group).

Fig 5 Statistics of length of dopamine neurons in each group of zebrafishA:The picture shows the length of dopaminergic neurons in the head of each group of zebrafish given 3 dpf. The scale:100 μm. B:**P<0.01 vs blank control group;#P<0.05 vs model group.

3.6 杜仲改善斑馬魚(yú)PD樣癥狀——多巴胺神經(jīng)元驗(yàn)證多巴胺神經(jīng)元損傷是PD特征之一，本研究通過(guò)觀察斑馬魚(yú)腦內(nèi)多巴胺神經(jīng)元損傷情況來(lái)驗(yàn)證杜仲抗PD的活性(Fig 5)(n=8)。與空白對(duì)照組相比，造模組斑馬魚(yú)腦內(nèi)多巴胺神經(jīng)元長(zhǎng)度明顯減少；與造模組相比，杜仲處理組斑馬魚(yú)腦內(nèi)的多巴胺神經(jīng)元長(zhǎng)度有所恢復(fù)。該實(shí)驗(yàn)表明，杜仲可以緩解斑馬魚(yú)腦內(nèi)多巴胺神經(jīng)元的損傷。本研究以行為和多巴胺神經(jīng)元兩個(gè)指標(biāo)對(duì)杜仲緩解PD樣癥狀進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果提示杜仲具有抗PD活性。

3.7 杜仲改善斑馬魚(yú)PD樣癥狀——DA相關(guān)基因驗(yàn)證為進(jìn)一步驗(yàn)證和挖掘杜仲抗PD活性的作用機(jī)制，本研究利用qRT-PCR對(duì)不同實(shí)驗(yàn)組的PD相關(guān)基因drd1、drd2和drd3進(jìn)行檢測(cè)(Fig 6)。與空白對(duì)照組相比，造模組中的drd1、drd2和drd3的表達(dá)明顯下調(diào)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與造模組相比，杜仲處理組中drd1和drd2的表達(dá)明顯增加，drd3雖不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但也出現(xiàn)了上調(diào)的趨勢(shì)。研究結(jié)果表明，杜仲可以對(duì)DA相關(guān)基因的異常表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。

Fig 6 Expression of dopamine-related genes in PDA:gene drd1, B:gene drd2, C:gene drd3. *P<0.05, **P<0.01 vs blank control group; ##P<0.01 vs model group

4 討論

通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，本研究篩選得到了26個(gè)杜仲有效成分，構(gòu)建杜仲活性成分-潛在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，并從中預(yù)測(cè)β-谷甾醇、槲皮素和β-胡蘿卜素為杜仲抗PD的重要有效成分。以往研究表明[6]，β-谷甾醇具有抗炎、抗氧化和神經(jīng)保護(hù)功效。槲皮素可以通過(guò)降低神經(jīng)元活性氧水平，增加谷胱甘肽的表達(dá)發(fā)揮抗氧化功能，從而起到保護(hù)神經(jīng)的作用[7]。研究發(fā)現(xiàn)[8]，PD患者血清中α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素水平均明顯降低，且與病情嚴(yán)重程度相關(guān)，推測(cè)PD的發(fā)生與血清中類(lèi)胡蘿卜素的水平有關(guān)。因此上述成分可能作為杜仲改善PD的有效藥物成分。

本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)[9-10]，斑馬魚(yú)PD模型在運(yùn)動(dòng)能力方面出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)遲緩、游動(dòng)總距離降低、游動(dòng)速度變慢等現(xiàn)象。杜仲葉顯著降低了斑馬魚(yú)PD模型腦中多巴胺能神經(jīng)元和神經(jīng)血管的丟失，改善了運(yùn)動(dòng)障礙，減少了腦部細(xì)胞凋亡數(shù)量。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)杜仲葉可以激活自噬，促進(jìn)α-syn降解，從而減輕斑馬魚(yú)PD樣癥狀。有研究發(fā)現(xiàn)[11]，MPTP誘導(dǎo)的小鼠PD模型與健康組小鼠相比，自主運(yùn)動(dòng)能力、協(xié)調(diào)性和耐受力都有所下降。崔爽等[12]研究發(fā)現(xiàn)，在6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的大鼠PD模型中，杜仲可以減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)，使多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞減少。本研究結(jié)果顯示，造模組多巴胺神經(jīng)元長(zhǎng)度比對(duì)照組明顯減少，運(yùn)動(dòng)距離和運(yùn)動(dòng)速度明顯降低，造模成功，杜仲處理組與造模組相比多巴胺神經(jīng)元長(zhǎng)度顯著增長(zhǎng)，游動(dòng)總距離明顯增加，游動(dòng)速度明顯變快。研究結(jié)果表明，杜仲可以緩解多巴胺神經(jīng)元損傷，改善斑馬魚(yú)PD樣行為。斑馬魚(yú)多巴胺神經(jīng)元分布在中腦中縫核、室旁器官神經(jīng)叢、前直腸神經(jīng)叢、下丘腦中間神經(jīng)叢等[13]，本研究以中縫核區(qū)多巴胺神經(jīng)元的長(zhǎng)度作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)該多巴胺神經(jīng)元區(qū)域長(zhǎng)度進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，但未開(kāi)展神經(jīng)元數(shù)量、突觸密度、樹(shù)突和軸突等指標(biāo)的檢測(cè)，今后我們將進(jìn)一步完善這方面的不足。

PPI結(jié)果提示，杜仲抗PD作用是通過(guò)多靶點(diǎn)、多通路實(shí)現(xiàn)的，且各靶點(diǎn)之間存在密切的聯(lián)系。例如，腫瘤壞死因子(TNF)和白細(xì)胞介素-1(IL-1B)之間存在相互作用。有研究顯示[14]，炎性因子IL-1B可以刺激TNF產(chǎn)生，使炎性反應(yīng)加重。此外TNF-α還可誘導(dǎo)IL-1、IL-6等炎性因子激活。B淋巴細(xì)胞瘤-2(Bcl-2)和半胱氨酸蛋白酶(CASPASE-3)之間具有相互作用關(guān)系[15]，Bax/Bcl-2的表達(dá)比率決定著細(xì)胞凋亡的進(jìn)程，其比值增加會(huì)將細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因子caspase-3激活。另有研究顯示[16]，蛋白激酶B(AKT)和糖原合成酶-3(GSK-3β)之間相互作用，AKT的激活可以促進(jìn)GSK-3β的表達(dá)。

杜仲抗PD的GO富集分析結(jié)果顯示，杜仲具有調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)水平、多巴胺神經(jīng)遞質(zhì)受體活性等作用。KEGG通路富集分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，杜仲抗PD與多巴胺能突觸這一通路有關(guān)。通過(guò)上述結(jié)果推測(cè)，多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)與杜仲改善PD癥狀緊密相關(guān)。PPI顯示，各靶點(diǎn)之間存在著緊密相關(guān)的聯(lián)系，其中，DRD1、DRD2和DRD3是與多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)密切相關(guān)的調(diào)節(jié)因子。DR主要與DA結(jié)合，激活DR能夠調(diào)節(jié)軸突結(jié)構(gòu)，保持大腦正常功能。DR廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)等眾多多巴胺神經(jīng)通路中，通過(guò)影響神經(jīng)遞質(zhì)的釋放以及釋放頻率等來(lái)調(diào)節(jié)神經(jīng)元的興奮性[17]，與PD緊密相關(guān)。以往研究發(fā)現(xiàn)，DRD1和DRD2介導(dǎo)的多巴胺能信號(hào)對(duì)認(rèn)知、運(yùn)動(dòng)和神經(jīng)內(nèi)分泌功能等具有重要影響，DRD3與思維、認(rèn)知等功能相關(guān)[18]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)qRT-PCR對(duì)杜仲抗PD機(jī)制進(jìn)一步檢驗(yàn)，與造模組相比，杜仲處理組斑馬魚(yú)drd1和drd2水平明顯上調(diào)，而drd3雖有上調(diào)趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示杜仲改善PD癥狀可能主要通過(guò)調(diào)節(jié)drd1和drd2發(fā)揮作用。

綜上所述，本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，分析了杜仲有效成分，預(yù)測(cè)了杜仲抗PD的作用靶點(diǎn)，繪制了杜仲抗PD靶點(diǎn)的生物過(guò)程富集分析，通過(guò)斑馬魚(yú)行為學(xué)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，揭示杜仲可以緩解斑馬魚(yú)PD樣癥狀，并且與多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)密切相關(guān)。這一發(fā)現(xiàn)為后續(xù)杜仲有效成分改善PD癥狀研究提供了新方向新思想。