長鏈非編碼RNAFOXP 4-AS 1表達(dá)與腫瘤患者預(yù)后關(guān)系的Meta分析△

高晶晶，方雪，張晨陽，于志豪，李梟晗，韓松，張瑩

沈陽醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院流行病學(xué)教研室，沈陽 110034

近年來腫瘤的發(fā)病率和病死率均逐年上升，已成為世界范圍內(nèi)的主要公共衛(wèi)生問題，同樣也成為中國人死亡的主要原因[1]。雖然近年來腫瘤的診斷和治療取得了很大的進(jìn)展，但腫瘤患者的預(yù)后仍然很差，即使是相同部位、相同病理類型的腫瘤患者，其預(yù)后仍有較大差異。因此，探索腫瘤特異性生物標(biāo)志物用于腫瘤預(yù)后判斷顯得尤為重要。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一類長度超過200個(gè)核苷酸的轉(zhuǎn)錄RNA分子，不具有編碼蛋白質(zhì)的能力[2]。越來越多的證據(jù)表明，lncRNA表達(dá)失調(diào)與惡性腫瘤的病理特征、預(yù)后及各種生物學(xué)過程有關(guān)[3-5]，并且預(yù)示著lncRNA可能是腫瘤特異性的預(yù)后生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)[6]。lncRNA FOXP4-AS1位于染色體6p21.1，編碼588 bp的轉(zhuǎn)錄本[7]。以往的研究表明，lncRNA FOXP4-AS1與各種腫瘤的預(yù)后具有相關(guān)性，但由于研究方案及樣本量的限制，lncRNA FOXP4-AS1對(duì)腫瘤預(yù)后的預(yù)測價(jià)值尚未確定。本研究對(duì)12項(xiàng)包含1506例腫瘤患者的研究進(jìn)行Meta分析，旨在探討lncRNA FOXP4-AS1表達(dá)與腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 檢索策略

通過 PubMed、Embase、Cochrane Library、Web of Science、CNKI、萬方數(shù)據(jù)庫、維普數(shù)據(jù)庫、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫檢索符合條件的出版文獻(xiàn)，檢索時(shí)間為建庫至2022年1月20日。英文文獻(xiàn)檢索詞為“Neoplasm”“Tumor”“Neoplasia”“Cancer”“FOXP4 antisense RNA 1”“l(fā)ong non-coding RNA FOXP4-AS1”“l(fā)ncRNA FOXP4-AS1”“FOXP4-AS1 lncRNA”“prognosis”“prognostic”“outcome”“survival”“recurrence”。中文文獻(xiàn)檢索詞為“腫瘤”“癌癥”“長鏈非編碼RNA FOXP4-AS1”“l(fā)ncRNA FOXP4-AS1”“預(yù)后”“生存”。

1.2 文獻(xiàn)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①觀察性研究；②有關(guān)lncRNA FOXP4-AS1在惡性腫瘤中預(yù)后的關(guān)系；③報(bào)告總生存期（overall survival，OS）、無病生存期（diseasefree survival，DFS）或無復(fù)發(fā)生存期（relapse-free survival，RFS）。排除標(biāo)準(zhǔn)：①綜述；②會(huì)議摘要；③重復(fù)出版物；④細(xì)胞實(shí)驗(yàn)；⑤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；⑥數(shù)據(jù)不足的文獻(xiàn)。

1.3 數(shù)據(jù)提取

數(shù)據(jù)提取由兩名研究者獨(dú)立完成，并根據(jù)預(yù)先設(shè)計(jì)的數(shù)據(jù)提取準(zhǔn)則提取相關(guān)數(shù)據(jù)。如果出現(xiàn)分歧則與第3個(gè)研究者進(jìn)行討論或協(xié)商。研究資料包括第一作者姓名、發(fā)表年份、地理區(qū)域、樣本量、腫瘤類型、RNA檢測方法、生存分析類型、結(jié)局指標(biāo)、風(fēng)險(xiǎn)比（hazard ratio，HR）及其95%置信區(qū)間（confidence interval，CI）。當(dāng)所包含的文獻(xiàn)只有生存曲線時(shí)，使用Engauge Digitizer軟件及Tierney等[8]描述的方法提取生存信息。

1.4 文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)估

采用Newcastle-Ottawa量表（Newcastle-Ottawa scale，NOS）評(píng)價(jià)納入文獻(xiàn)的質(zhì)量，包括研究人群選擇、組間可比性和結(jié)果測量3個(gè)類別的8個(gè)條目。質(zhì)量評(píng)估得分為0～9分，6分及以上表明文獻(xiàn)質(zhì)量較好。質(zhì)量評(píng)估同樣由兩名研究者獨(dú)立完成，通過討論解決分歧。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用Review Manager 5.3軟件和Stata SE 12.0（Stata，College Station，TX）軟件進(jìn)行Meta分析，應(yīng)用HR及相應(yīng)的95%CI評(píng)估lncRNA FOXP4-AS1與各種腫瘤預(yù)后的關(guān)系。采用χ2值和I2值評(píng)價(jià)各研究之間的異質(zhì)性，當(dāng)I2≤50%或P﹥0.05時(shí)，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行分析；當(dāng)I2﹥50%或P≤0.05時(shí)，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析；采用漏斗圖以及Egger檢驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)表偏倚，P﹤0.05時(shí)表明具有較明顯的發(fā)表偏倚；采用敏感性分析評(píng)估檢驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)健性；此外，對(duì)OS進(jìn)行亞組分析，以P﹤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢索結(jié)果

本研究初步檢索文獻(xiàn)66篇（中文文獻(xiàn)12篇，英文文獻(xiàn)54篇），經(jīng)過剔重、閱讀摘要、全文復(fù)篩等最終納入文獻(xiàn)12篇，共1506例腫瘤患者。（圖1）

圖1 文獻(xiàn)檢索及篩選流程圖

2.2 納入文獻(xiàn)的基本情況及質(zhì)量評(píng)價(jià)

納入的12篇文獻(xiàn)[9-20]均為英文文獻(xiàn)，9項(xiàng)研究[10-12,15-20]的研究對(duì)象來自中國，2項(xiàng)研究[13-14]的研究對(duì)象來自美國，其余1項(xiàng)研究[9]未交代研究對(duì)象來源；這些研究的樣本量最少為24例，最多為384例；9項(xiàng)研究[10-12,15-20]采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測RNA表達(dá)情況，其余3項(xiàng)研究[9,13-14]未交代檢測方法；10項(xiàng)研究[9-11,13-14,16-20]采用了中位數(shù)作為截?cái)嘀担溆?項(xiàng)研究[12,15]沒有詳細(xì)介紹截?cái)嘀担黄渲衛(wèi)ncRNA FOXP4-AS1高表達(dá)患者736例，lncRNA FOXP4-AS1低表達(dá)患者770例；12項(xiàng)研究均采用了OS作為評(píng)估患者預(yù)后的指標(biāo)，6項(xiàng)研究[9,11-13,16,18]采用了DFS作為評(píng)估患者預(yù)后的指標(biāo)，1項(xiàng)研究[15]采用了RFS作為評(píng)估患者預(yù)后的指標(biāo)；納入的12篇文獻(xiàn)NOS評(píng)分均≥6分，文獻(xiàn)質(zhì)量較好。（表1）

表1 納入12篇文獻(xiàn)的基本情況及質(zhì)量評(píng)價(jià)

2.3 lncRNA FOXP 4-AS 1與腫瘤患者OS關(guān)系的Meta分析結(jié)果

12項(xiàng)研究報(bào)告了OS，因此均納入分析。異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，I2=87%，存在異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)模型，結(jié)果顯示，lncRNA FOXP4-AS1高表達(dá)患者的OS明顯短于lncRNA FOXP4-AS1低表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（HR=1.65，95%CI：1.26～2.16，P﹤0.01）（圖2）；敏感性分析結(jié)果顯示，逐個(gè)排除各項(xiàng)研究后結(jié)論未發(fā)生改變，說明Meta分析的結(jié)果是穩(wěn)健的（圖3）；應(yīng)用Egger檢驗(yàn)進(jìn)行發(fā)表偏倚檢測，結(jié)果顯示P=0.0051，漏斗圖的分布也顯示了不對(duì)稱性（圖4），提示存在一定的發(fā)表偏倚。

圖2 lncRNAFOXP 4-AS 1與腫瘤患者OS關(guān)系的森林圖

圖3 OS研究的敏感性分析

圖4 OS研究的漏斗圖

2.4 lncRNA FOXP 4-AS 1表達(dá)與腫瘤患者OS關(guān)系的亞組分析結(jié)果

為探索異質(zhì)性來源，根據(jù)上述研究的樣本量、腫瘤類型和分析類型對(duì)OS進(jìn)行亞組分析。結(jié)果顯示，不同樣本量亞組中，樣本量﹤100亞組（HR=1.78，95%CI：1.21～2.62，I2=89%）和樣本量﹥100亞組（HR=1.49，95%CI：1.00～2.22，I2=85%）中l(wèi)ncRNA FOXP4-AS1表達(dá)均與OS有關(guān)（P﹤0.05）；不同腫瘤類型亞組中，消化系統(tǒng)腫瘤（HR=1.63，95%CI：1.06～2.51，I2=82%）和其他類型腫瘤（HR=1.68，95%CI：1.17～2.42，I2=91%）中l(wèi)ncRNA FOXP4-AS1表達(dá)均與OS有關(guān)（P﹤0.05）；不同分析類型的亞組中，多變量分析（HR=1.75，95%CI：1.35～2.26，I2=80%）和單變量分析（HR=1.65，95%CI：1.12～2.42，I2=86%）中l(wèi)ncRNA FOXP4-AS1表達(dá)均與OS有關(guān)（P﹤0.05）。（表2）

表2 腫瘤患者OS的亞組分析結(jié)果

2.5 lncRNA FOXP 4-AS 1與腫瘤患者DFS和RFS關(guān)系的Meta分析

6項(xiàng)研究[9,11-13,16,18]被納入DFS的Meta分析中，結(jié)果顯示，lncRNA FOXP4-AS1表達(dá)與DFS無關(guān)（HR=1.27，95%CI：0.83～1.94，P=0.27，I2=86%）；1項(xiàng)研究[15]被納入RFS的Meta分析中，結(jié)果顯示，lncRNA FOXP4-AS1高表達(dá)與較短的RFS有關(guān)（HR=2.67，95%CI：1.45～4.91，P﹤0.01）（圖 5）。漏斗圖的分布顯示一定的不對(duì)稱性（圖6），說明本研究納入的文獻(xiàn)存在一定的發(fā)表偏倚，DFS研究的Egger檢驗(yàn)結(jié)果也驗(yàn)證了這一結(jié)果（P=0.0379）。

圖5 lncRNAFOXP 4-AS 1與腫瘤患者DFS和RFS關(guān)系的森林圖

圖6 DFS和RFS研究的漏斗圖

3 討論

通過閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，lncRNA在各種腫瘤中發(fā)揮促癌基因或抑癌基因的作用[21-23]。lncRNA通過與DNA、RNA或蛋白質(zhì)相互作用發(fā)揮分子支架、海綿或輔助活化劑的功能。許多l(xiāng)ncRNA在腫瘤的發(fā)展過程中具有至關(guān)重要的作用，它們參與了腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移過程[24]。因此，鑒定腫瘤相關(guān)lncRNA對(duì)于了解其在腫瘤發(fā)生中的作用以及為腫瘤患者提供有希望的治療靶點(diǎn)具有重要意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，與lncRNA FOXP4-AS1低表達(dá)患者相比，lncRNA FOXP4-AS1高表達(dá)腫瘤患者的OS和RFS更短。lncRNA FOXP4-AS1表達(dá)與腫瘤患者的DFS無關(guān)（P﹥0.05），這可能是由于納入研究數(shù)較少且納入研究的結(jié)論不一致。本研究結(jié)果提示，lncRNA FOXP4-AS1高表達(dá)可能是影響腫瘤患者預(yù)后的不利因素，說明lncRNA FOXP4-AS1高表達(dá)可用于預(yù)測各種類型腫瘤的不良預(yù)后。OS的亞組分析也能夠驗(yàn)證以上結(jié)論，根據(jù)分析類型進(jìn)行亞組分析時(shí)，各亞組合并的I2均小于總體合并時(shí)的I2，提示納入研究的不同分析類型可能是異質(zhì)性較高的原因。其次，納入的12項(xiàng)研究定義lncRNA FOXP4-AS1表達(dá)高低的標(biāo)準(zhǔn)不同，其中還有2項(xiàng)研究未對(duì)定義標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行交代，這也有可能是造成本研究異質(zhì)性較高的原因。此外，納入研究的結(jié)論不一致、不同類型腫瘤預(yù)后有一定差異也可能是本研究異質(zhì)性較高的原因。OS及DFS研究的漏斗圖和Egger檢驗(yàn)均提示存在一定的發(fā)表偏倚，這可能是由于納入的陰性結(jié)果（lncRNA FOXP4-AS1的表達(dá)是腫瘤的保護(hù)因素）文獻(xiàn)數(shù)較少或者是缺少相關(guān)中文文獻(xiàn)。

雖然許多研究已經(jīng)探索了lncRNA FOXP4-AS1的表達(dá)與人類腫瘤預(yù)后的關(guān)系，但lncRNA FOXP4-AS1的作用機(jī)制仍然不清楚。國內(nèi)的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA FOXP4-AS1可以通過競爭性結(jié)合微小RNA（microRNA，miRNA）-298上調(diào)TMPO基因表達(dá)，從而促進(jìn)尤文肉瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲過程[25]。國外的一項(xiàng)研究結(jié)果顯示，lncRNA FOXP4-AS1可通過抑制miRNA-423-5p的表達(dá)，上調(diào)NACC1基因的表達(dá)，從而促進(jìn)被套區(qū)細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲過程[16]。到目前為止，只有少數(shù)研究探索了lncRNA FOXP4-AS1在腫瘤中的作用機(jī)制。此外，很少進(jìn)行活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。因此，還需要進(jìn)行更多的基礎(chǔ)研究來闡明lncRNA FOXP4-AS1在腫瘤中的預(yù)后價(jià)值。

此外，本研究存在一定的局限性。首先，lncRNA FOXP4-AS1表達(dá)沒有公認(rèn)的臨界值，這可能會(huì)影響研究結(jié)論在臨床上的應(yīng)用，本研究只是初步研究，lncRNA FOXP4-AS1在腫瘤中的確切作用仍有待隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)的進(jìn)一步證實(shí)。其次，部分文獻(xiàn)沒有直接提供HR值，本研究根據(jù)Tierney等[8]描述的生存曲線提取方法間接獲得了幾篇文章中OS的HR和相應(yīng)的95%CI，結(jié)果可能受到一定的影響。

綜上所述，lncRNA FOXP4-AS1高表達(dá)與腫瘤患者較短的OS和RFS有關(guān)，其可能成為腫瘤患者的預(yù)后標(biāo)志物和潛在的治療靶點(diǎn)。