鼻咽癌患者血清長鏈非編碼RNA SNHG3表達水平及其臨床意義

劉金蓮,馬水群,曾麗梅,鄭雪慧,邵金揚,張 玲 (.廣寧縣中醫院,廣東 廣寧 56300；.廣州金域醫學檢驗中心有限公司,廣東 廣州 50000)

鼻咽癌作為常見的頭頸部惡性腫瘤，其發生率占頭頸部惡性腫瘤的首位，對患者生存質量及生命健康威脅較大[1]。鼻咽癌發病部位隱蔽、位置較深，尤其是病灶位于鼻咽頂壁、咽隱窩處患者，早期無典型臨床癥狀表現，早期診斷難度較大，多數患者確診已處于晚期。血清腫瘤標志物已在鼻咽癌診療中不斷應用，具有無創、簡便及便于連續監測等優點。血清長鏈非編碼RNA(lncRNA)SNHG3屬于SNHGs家族成員，與多種癌癥發生具有密切聯系，但目前關于lncRNA SNHG3在鼻咽癌中的臨床意義尚未明確[2-3]。本研究探討鼻咽癌患者血清lncRNA SNHG3表達水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料：選擇2019年3月～2021年3月于廣寧縣中醫院治療的200例鼻咽癌患者作為鼻咽癌組，同時選取同期于本院體檢健康者200例作為對照組，本研究獲本院醫學倫理委員會批準。鼻咽癌組男128例，女72例；年齡28～74歲，平均年齡(48.91±5.68)歲；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期86例，Ⅲ～Ⅳ期114例。對照組男124例，女76例；年齡25～76歲，平均年齡(48.85±5.71)歲。兩組性別、年齡相比差異無統計學意義(P>0.05)，有可比性。

1.2入選及排除標準：納入標準： ①患者簽署知情同意書；②年齡≥18歲；③鼻咽癌均經病理穿刺檢查確診；④精神狀態良好。排除標準： ①鼻咽癌組接受過放、化療或手術治療；②合并其他惡性腫瘤；③嚴重肝、腎功能損傷；④鼻咽癌組患者近1個月內有藥物服用史，對照組近3個月內有藥物服用史。

1.3方法

1.3.1樣本采集：采集兩組空腹靜脈血3 ml，3 000 r/min離心10 min分離血清，并置于-80℃保存備用。

1.3.2血清LncRNA SNHG3檢測：①總RNA提?。嚎俁NA采用TRIzol法提取，用紫外分光光度計檢測A260和A280，計算兩者比值，當A260/A280為1.8～2.0時表明RNA質量較好。②逆轉錄合成：逆轉錄合成cDNA采用二步法，冰上解凍模板RNA，反應體系：RNA模板2 μl，dNTP 1 μl，Oligo 1 μl，RNase-free ddH2O 14 μl，混勻后放入金屬浴中65℃預熱5 min，冰上冷卻加入：5×PrimeScirpt緩沖液4 μl，反轉錄酶1 μl，RNase抑制劑0.5 μl，RNase-free ddH2O 0.5 μl；PCR反應條件：30℃ 10 min，42℃ 60 min，85℃ 5 min；將RNA逆轉成cDNA。③實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測：GAPDH為內參基因，以逆轉錄合成cDNA為模板，反應體系：cDNA 2 μl，2×SYBR Green qPCR Mix 10 μl；正向引物1 μl，反向引物1 μl，DEPC水6 μl，反應總體積20 μl，每個目的基因做3個重復；反應條件：95℃ 10 min，95℃ 15 min，60℃ 1 min 40個循環；72℃ 30 s，啟動qRT PCR儀進行PCR擴增，計算lncRNA SNHG3相對定量；以U6為內參。

1.4評價指標：①比較兩組血清lncRNA SNHG3表達水平。②血清lncRNA SNHG3表達水平與鼻咽癌患者臨床病理特征關系。③治療后隨訪2年，依據患者是否復發分為復發組、未復發組，比較兩組血清lncRNA SNHG3表達水平。

1.5統計學方法：采用SPSS22.0軟件進行χ2及t檢驗。

2 結果

2.1鼻咽癌組與對照組血清lncRNA SNHG3表達水平對比：鼻咽癌組血清lncRNA SNHG3表達水平(126.58±30.16)高于對照組(19.85±5.34)，差異有統計學意義(t=49.280,P=0.000)。

2.2血清lncRNA SNHG3表達水平與鼻咽癌患者臨床病理特征關系：TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移、侵犯頸動脈鞘、侵犯顱底患者的lncRNA SNHG3表達水平高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、無侵犯頸動脈鞘、無侵犯顱底患者，差異有統計學意義(P<0.05)；不同性別及年齡患者lncRNA SNHG3表達水平對比差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 血清lncRNA SNHG3表達水平與鼻咽癌患者臨床病理特征關系

2.3復發組與未復發組lncRNA SNHG3表達水平比較：治療后隨訪2年，200例鼻咽癌患者中復發32例，復發率為16.00%(32/200)；復發組lncRNA SNHG3表達水平(137.25±26.92)高于未復發組(74.91±13.68)，差異有統計學意義(t=19.623，P=0.000)。

3 討論

鼻咽癌是我國常見惡性腫瘤，其發生與環境、病毒及遺傳等因素有關。多數鼻咽癌患者在確診時已處于晚期且預后較差，采用已知的EBERs、p16、SPLUNC1等標志物診斷效能較低，故尋求一種準確的分子標志物對鼻咽癌進行早期診斷、病情評估、指導治療尤為重要[4]。依據lncRNA從基因組中被轉錄位置的不同，可將其分為5大類，lncRNA能夠于多個層面上調控表觀遺傳、轉錄及基因表達，在腫瘤發生過程中發揮重要作用[5]。SNHG3為新發現的一類lncRNA，位于人1號染色體短臂3區6號帶，包含snoRNA-U17a、U17b兩個內含子[6]。

羅濤等[7]研究中觀察lncRNA SNHG3在神經膠質瘤中的表達及臨床意義，研究結果顯示，在神經膠質瘤組織中lncRNA SNHG3表達水平明顯上調，且lncRNA SNHG3表達水平與患者不良臨床預后具有密切聯系。谷建斌等[8]研究中指出，胃癌組織中lncRNA SNHG3表達顯著增高，且lncRNA SNHG3表達水平與腫瘤TNM分期、浸潤深度及淋巴結轉移等有關，故可見lncRNA SNHG3參與多種惡性腫瘤的發生發展，且可對腫瘤侵襲及轉移進行評估。本研究中研究鼻咽癌患者血清lncRNA SNHG3表達水平及其臨床意義，研究結果顯示，鼻咽癌組患者血清lncRNA SNHG3表達水平高于對照組；TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移、侵犯頸動脈鞘、侵犯顱底患者的lncRNA SNHG3表達水平高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、無侵犯頸動脈鞘、無侵犯顱底患者；復發組lncRNA SNHG3表達水平高于未復發組。提示出lncRNA SNHG3能夠促進鼻咽癌發生及侵襲、轉移，鼻咽癌患者血清lncRNA SNHG3呈高表達，且與患者臨床分期、是否存在淋巴結轉移等有關，且可對患者預后進行判斷。

綜上所述，鼻咽癌患者血清lncRNA SNHG3表達水平較高，且與TNM分級及淋巴結轉移等病理特征有關，能夠對鼻咽癌的診斷及治療、預后判斷提供依據。