甘肅省天視縣岔口驛馬產區馬梨形蟲病流行病學調查

王福財 ， 王淑芳 ， 白天俊

(天祝縣動物疫病預防控制中心 ， 甘肅 天祝 733299)

岔口驛馬是我國擅走“胎里帶”對側步的優良地方走馬品種[1]，產于甘肅省武威市天祝藏族自治縣。該地區是甘肅省九大牧區之一，轄區內岔口驛馬和牛羊在同一草原混合放牧現象較為普遍。天祝縣動物疫病預防控制中心實施“天祝白牦牛疫病綜合防控技術研究推廣項目”時,對天祝白牦牛血液原蟲病傳播媒介進行了調查，經中國農業科學院蘭州獸醫研究所鑒定，天祝縣轄區內有青海血蜱和銀盾革蜱2種蜱類生存繁殖，牛羊血液原蟲病在天祝縣各鄉鎮均有不同程度感染。馬梨形蟲病(Equine piroplasmosis，EP，又稱馬巴貝斯蟲病、馬焦蟲病)主要是由駑巴貝斯蟲(Babesiacaballi,B.caballi)和馬泰勒蟲(Theileriaequi,T.equi,又稱馬巴貝斯蟲Babesiaequi,B.equi)寄生于馬紅細胞而引起的一種經媒介蜱傳播的馬屬動物血液原蟲病[2-4]，通常表現為發熱、黃疸、貧血以及呼吸困難等癥狀[4-5],患馬瘦弱，影響生產性能，急性病例可引起持續的長期感染[6],嚴重的可導致死亡[7]。該病廣泛分布于世界各地[5]，但尚未見岔口驛馬產區內EP流行病學調查相關文獻報道。為掌握岔口驛馬產區內EP感染情況，制定科學防控措施，本課題組對華藏寺鎮等16個鄉鎮養殖的岔口驛馬按照占養殖量約10%的比例，隨機采集馬血清510份，用ELISA方法進行B.equi和B.caballi的抗體檢測，并對抗體陽性率高的鄉鎮和養殖量最大的打柴溝鎮的馬匹進行血液蟲體檢查。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 馬巴貝斯蟲抗體檢測試劑盒(批號：EQB.e-1005)和馬駑巴比斯蟲抗體檢測試劑盒(批號：EQB.c-1005)，均購自Kernel.Inc公司，于2～8 ℃存儲備用。

1.2 主要儀器 酶標儀、精密移液器、量筒量杯。

1.3 主要方法

1.3.1 樣品準備 獸醫專業技術人員對16個鄉鎮共510匹馬空腹頸靜脈進行無菌采血，完成采血后統一置于獸醫實驗室室溫下自然析出血清，收集血清，-20 ℃冷凍保存待檢。待檢血清務必保證清亮,避免使用溶血以及被污染樣品。

1.3.2 試驗準備 在使用前所有試劑需恢復到室溫20～25 ℃，提前預熱恒溫孵育設備；用19體積的蒸餾水稀釋1體積的20×洗板液，得到1×洗板液；在血清稀釋板上使用樣品稀釋液將樣品血清稀釋40倍，備用；1份原液與24份酶標稀釋液混合，得到酶標工作液，使用前根據實際用量現用現配。

1.3.3 試驗操作 試驗前1 h將試劑盒從冷凍冰箱中取出回復室溫。采用馬巴貝斯蟲抗體檢測試劑盒和馬駑巴貝斯蟲抗體檢測試劑盒進行檢測，按照試劑盒說明書步驟操作。

1.3.4 馬血液涂片鏡檢 天祝縣每年的3～4月份、8～9月份是蜱蟲爬上宿主體的季節。2021年3月份底，在全縣蜱蟲較多且抗體檢測陽性率最高的天堂、賽什斯2個鎮和岔口驛馬養殖規模最大的打柴溝鎮采集馬耳尖血推片120份，甲醇固定，染色鏡檢，同時統計感染率。血推片采樣以馬匹身上有蜱蟲為主。

1.4 抗體檢測結果判斷標準 樣品S/P值=(樣品OD值÷陽性對照OD值)×100%。有效性：陰性對照的S/P值必須<30%,陽性對照的平均OD值必須≥0.4。陰性：樣品的S/P值<65%，樣品血清中抗體陰性。陽性：樣品的S/P值>65%，樣品血清中抗體陽性。

2 結果

2.1 抗體檢測 各鄉鎮的抗體檢測結果見表1。結果顯示，510份馬血清中檢測出B.equi抗體陽性數為34份，陽性率為6.67%；B.caballi抗體陽性數為38份，陽性率為7.45%。

表1 抗體檢測結果

2.2 血推片蟲體鏡檢 蟲體檢出情況見表2。120份血推片樣本中，B.equi蟲體檢出樣品數為5份，蟲體檢出率為4.17%，視野中蟲體長度小于紅細胞半徑，這是與其他血液原蟲蟲體區分的特征之一。80%蟲體呈圓點狀，個別似橢圓狀，紅細胞里有1個或2個蟲體。有蟲體感染的血推片中，紅細胞染蟲率約為35%左右。B.caballi蟲體檢出樣品數為4份，蟲體檢出率為3.33%，蟲體長度大于紅細胞半徑，多數呈梨形，多呈2個存在，多數平行排列。有蟲體感染的血推片中，紅細胞染蟲率達到20%左右。在天堂鎮的1份血液樣品中同時發現B.equi和B.caballi蟲體。

表2 蟲體檢出情況統計表

3 討論

3.1 據文獻報道，EP廣泛分布于世界各地[5]，在甘肅省隴東南地區該病呈局域性流行[8]。新疆西部、吉林省東部等地抽樣檢測的抗體陽性率(感染率)分別達到40%[9]、34%[10]。馬利青研究[11]發現，青海省海西地區EP廣泛傳播，抗體陽性率為30.65%。本調查檢測結果顯示，岔口驛馬產區B.equi抗體陽性率為6.67%，B.caballi抗體陽性率為7.45%；血推片蟲體檢查結果顯示，3個鄉鎮B.equi和B.caballi總檢出率分別為4.17%和3.33%。綜上所述，岔口驛馬產區內馬群EP抗體陽性率低于上述地區，16個鄉鎮中除毛藏鄉、炭山嶺鎮、石門鎮、祁連鎮、大紅溝鄉外，其他鄉鎮均有B.equi或B.caballi感染史或馬群中存在感染現象，但本次調查樣本數量有限，覆蓋面不夠，并不能完全代表本地區EP感染程度和流行情況，只表明該地區有EP感染現象，因此，針對不同季節、年齡、性別、畜別等感染規律和流行病學特點進行調查研究十分必要，如全面掌握EP在岔口驛馬產區的感染和流行情況，還需要做進一步深入研究。

3.2 岔口驛馬產區馬群有EP感染史或正在受EP感染，這與轄區內革蜱活躍，岔口驛馬完全暴露在該病威脅的環境中等情形相吻合。近幾年，隨著馬產業和賽馬等傳統馬文化的發展，馬匹流動頻繁，跨區域調運、交易呈現頻發勢頭，跨區域參加各地藏區傳統賽馬會現象多見，也為該病的發生和傳播提供了可能。另外，有文獻報道稱EP也可經胎盤感染，引起流產或胎兒感染[12]。

3.3 天祝縣位于青藏、內蒙、黃土三大高原交匯地帶，境內海拔處于2 040～4 874 m，年降水量為260～630 mm，年平均氣溫為-1～1.3 ℃，無絕對無霜期，東西跨度大，南北狹長，各鄉鎮氣候差異大，賽什斯、天堂等莫科片區鄉鎮氣候較溫暖濕潤，尤其是天堂鎮，俗稱天祝縣的“小江南”，適宜蜱蟲生存繁殖，其傳播的牛羊血液原蟲病較為嚴重，天祝牧區各種牲畜存在混牧現象，長期以來因馬屬動物疫病發生率低，廣大養殖戶馬匹預防性驅蟲等防疫意識淡薄，致使馬群中受各種寄生蟲侵襲，馬匹抵抗力下降，加上該病具有帶蟲免疫現象[13]，有一定的隱蔽性，畜主很容易造成麻痹大意，為EP在該地區的傳播提供了便利條件。EP的地理分布與蜱的區系分布有關，蜱蟲作為傳播媒介,在該病的流行中有著十分重要的作用。蜱蟲種類眾多并且分布范圍較廣，有研究表明，有4個品種可在發病高峰期傳播，9個品種可在排卵時期傳播B.caballi[14]，EP的傳播流行取決于蜱的傳播能力，有文獻報道，隨著蜱蟲活動能力的下降,EP的流行也漸漸停止[15]。天祝縣屬高寒牧區，每年3～4月份、8～9月份是蜱蟲活躍期，充分了解蜱蟲的生長繁殖、感染規律、生長分布規律等情況，對全面掌握EP感染和科學防控等有著非常重要的意義。在岔口驛馬EP綜合防控中分片區制定防控措施意義重大，可有效控制該病在岔口驛馬產區的傳播流行，減少養殖損失。不同片區有計劃地實行劃區輪牧、不同畜種間輪牧和計劃性休牧制度，可起到保護草場和減少感染的作用。如何采取控蜱、檢疫、預防性驅蟲等綜合防控措施還需進一步研究并試驗推廣。