超高效液相色譜-串聯質譜法測定叔胺類藥品中硫酸二甲酯基因毒性雜質

胡?！●T笑

摘要：碘海醇（Iohexol）和碘帕醇（Iopamidol）屬于第二代碘造影劑，是目前最為暢銷的造影劑，通常在進行CT造影診斷前注入靜脈，用于血管、泌尿系統、脊髓及股關節、淋巴系統造影，具有造影密度低，毒性低，耐受性好等優點，在發達國家已全面取代了離子型造影劑。根據Newport數據，2018年全球碘海醇制劑規模超過12億美元。中國醫藥工業信息中心數據顯示，2019年國內X射線造影劑市場規模約為139.45億元，其中碘帕醇的市場規模約為15.13億元。本文對超高效液相色譜-串聯質譜法測定叔胺類藥品中硫酸二甲酯基因毒性雜質進行分析，以供參考。

關鍵詞：超高效液相色譜?串聯質譜;衍生;硫酸二甲酯

引言

超高效液相色譜-串行光譜（UPLC-MS/MS/MS）檢測分析技術具有高效分離度和超高靈敏度的優點，大大提高了數據分析和測試的可靠性和耐久性，提高了目標化合物的分析效率和準確性，是分析測試領域的綜合分析手段。近年來，UPLC-MS/MS分析技術廣泛應用于醫藥、化學工程、生物工程、保健食品、特殊材料等多個領域，特別是化學和醫藥產品的檢測和殘留分析，以UPLC-MS/MS得到了極大的提高和改進。

1概述

磺胺類抗生素是一類具有對位氨基苯磺酰胺結構的抗生素總稱，是一類用于預防和治療細菌感染性疾病的化學治療藥物。磺胺藥是現代醫學中常用的一類抗菌藥物，具有抗菌譜廣、可以口服、吸收較迅速、較為穩定、不易變質等優點，被廣泛應用于預防和控制水產養殖過程中的各種動物疾病，除此之外，還被認為是一種飼料添加劑以促進水產養殖動物生長。其作用原理是通過競爭性阻抑葉酸循環過程中的對氨基苯甲酸來達到減少和殺滅細菌核蛋白的目的。此類人工合成的抗生素具有價格低、抗菌范圍廣、高效、不易分解等特點，但其在動物體內具有作用時間較長、較慢代謝速率等問題，一部分會在動物體內殘留，另一部分會隨排泄物以原型或代謝物的形式排出體外。過量使用磺胺類抗生素會對環境造成一定程度的污染，進而通過食物鏈在人體內蓄積從而對人體健康造成潛在威脅?；前奉惪股亻L期存在于人類體內會引起急性或慢性中毒，還會影響機體的泌尿、免疫系統，破壞人體的造血系統或產生耐藥性等。針對動物組織及牛奶中的磺胺類抗生素，歐盟規定其最大殘留量為100μg/kg。我國國家標準GB31650-2019制訂了在動物性食品中磺胺二甲嘧啶的限量為25～100μg/kg，其他磺胺類抗生素殘留總和為100μg/kg。目前，對魚肉中磺胺類抗生素的檢測多為其中一種或幾種，同時對20種以上磺胺類抗生素的檢測報道較少。而且與文獻報道的檢測魚肉中磺胺類抗生素的液液萃取法、加速溶劑萃取法、固相萃取法等前處理技術相比，QuEChERS法具有操作簡便、無需昂貴的儀器、試驗成本低、應用范圍廣等優點。近年來，磺胺類抗生素的檢測方法主要有高效液相色譜法（HPLC）、液相色譜-串聯質譜法（LCMS/MS）、毛細管電泳法等。其中，液相色譜-串聯質譜法具有靈敏度高、準確度好、能同時分析多種痕量物質等優點，適用于多種磺胺類抗生素的檢測。如：HOFF等基于液相色譜-串聯質譜技術發展了一種測定牛肝中6種磺胺類抗生素的新方法;建立了超高效液相色譜-串聯質譜法分析了畜禽糞便中17種磺胺類抗生素;發展了液相色譜串聯質譜法測定牛奶中11種磺胺類抗生素的檢測新方法。

2 UPLC-MS/MS應用于人體化學藥品的檢測

2.1 UPLC-MS/MS檢測抗菌藥物

寶佳康蒂唑是一種三唑醇廣譜抗真菌藥物，具有功效、廣譜和低毒性等特點。檢測人體血漿中的藥物濃度對于監測藥物吸收情況和指導臨床藥物的安全性特別重要。采用高度特異性和敏感性的UPLC-MS/MS法研制了測定血漿中普拉沙唑濃度的方法。該方法為監測praxanax的藥物濃度提供了參考值。諾氟沙星是一種非常有效的第三代抗菌藥物，對細菌具有顯著的抑制作用，是腸道痢疾等疾病的常規治療方法。但是，其副作用是顯而易見的，特別是需要推遲未成年人的骨骼形成并影響身體的正常發育，因此未成年人不得服用這種藥物。測量人類血漿中的諾氟沙星濃度很重要。使用UPLC-MS/MS測定了人體血漿中的諾氟沙星濃度。使用甲醇作為沉淀劑來預處理血漿樣本，結果表明諾氟沙星與峰面積比值呈現良好的線性關系。批中的精密度RSD小于或等于3.35%，批間的精密度RSD小于或等于5.12%。測試方法簡單方便。

2.2 UPLC-MS/MS用于檢測艾滋病毒感染

艾滋病是當今威脅全球健康的主要疾病之一，是由艾滋病病毒感染造成的，它攻擊人類免疫系統中的臨界CD4T淋巴細胞。研究表明，人發中的藥物水平與抗逆轉錄病毒治療的有效性呈正相關。一種高效檢測頭發中四種抗艾滋病毒藥物含量的方法，采用UPLC-MS/MS法，如lopinavir、ritonavir、zidovudine和weilun法。

3實驗部分

ABSCIEXTripleQuad6500+超高效液相色譜?三重四極桿質譜聯用儀（AB公司;美國）;XSE205電子天平（MettlerToledo公司，瑞士）;KQ?300GDV型恒溫數控超聲器（昆山市超聲儀器有限公司）;Vor?tex?6渦旋振蕩器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）。甲醇、丙酮（色譜純，美國賽默飛公司），甲酸（色譜純，美國ACS公司），乙酸銨（色譜純，國藥集團化學試劑有限公司）。

4討論

4.1氨基比林衍生劑的選擇

吡啶是硫酸二甲酯發生甲基化反應的常用底物，是一個含有氮雜原子的六元雜環化合物，具有芳香性，而本研究發現的氨基比林為含有α，β不飽和酮結構的脂肪胺，吡啶環上的N原子相比氨基比林上的N原子因電子云軌道雜化、空間位置不同而活性較低，且硫酸二甲酯與胺的反應屬于雙分子親核取代（SN2）反應，在SN2反應中，氨基比林表現出更強的親核性，反應能夠快速進行。與吡啶相比，氨基比林與硫酸二甲酯反應不需要高溫，較低溫度有利于硫酸二甲酯的穩定。吡啶與硫酸二甲酯反應后產物具有季銨鹽的特性，但生成的季銨鹽不利于其芳香性的保持，不夠穩定，但是氨基比林生成的脂肪胺季銨鹽穩定性好，因此本研究選取的氨基比林更適合作為甲基化試劑用于硫酸二甲酯的檢測。

4.2檢出限和定量限

基于空白溶液中存在本底峰，檢出限和定量限采用《中國藥典》2020年版四部通則9101中“基于響應值標準偏差和標準曲線斜率法”測定。取空白溶液連續進樣7次。

結束語

本文建立了超高效液相色譜?串聯質譜測定氨基比林等叔胺類藥品中硫酸二甲酯基因毒雜質含量的檢測方法，該方法將氨基比林作為衍生劑，與藥品中殘留的硫酸二甲酯發生反應生成甲基化氨基比林，通過檢測甲基化氨基比林間接測得藥品中硫酸二甲酯的含量，進行了方法學驗證，并將方法用于實際樣品的測定。與現有技術相比，該方法離子峰峰形好，無其他碎片雜峰干擾，方法靈敏度高、精密度和重復性好，結果可靠，可用于氨基比林等藥品中硫酸二甲酯基因毒雜質的測定。本研究有助于藥品生產企業對生產工藝中基因毒雜質的控制，同時為藥品監管提供技術支撐。

參考文獻

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