Clinimix E（克靈麥）中色氨酸雜質M的測定

吳會斌，姜凌娟

Clinimix E（克靈麥）中色氨酸雜質M的測定

吳會斌1，姜凌娟2

（1. 遼寧海思科制藥有限公司，遼寧 興城 125100； 2. 遼寧海思科制藥有限公司沈陽分公司，遼寧 沈陽 110179）

目的：建立Clinimix E（克靈麥）中氨基酸注射液色氨酸雜質M的測定方法。方法：采用HPLC法測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸二氫鈉緩沖液（取磷酸二氫鈉約3.9 g，加水溶解至1 000 mL，加2.9 g·L-1磷酸溶液1 000 mL，以磷酸調節pH值至2.3）-乙腈=88.5∶11.5為流動相A，以磷酸二氫鈉緩沖液（pH2.3）-乙腈=65∶35為流動相B，采用梯度洗脫，流速為每分鐘0.7 mL；檢測波長為220 nm；柱溫為40 ℃。結果：在0.202 8～4.056 0μg·mL-1范圍內，色氨酸雜質M的濃度與峰面積之間線性關系良好；該方法的重復性和準確度的 RSD 值分別為0%、0.2%。結論：該方法專屬性、重現性、準確度良好，可用于Clinimix E（克靈麥）中氨基酸腔袋色氨酸雜質M的測定。

色氨酸雜質M；HPLC法；氨基酸注射液

腸外營養（parenteral nutrition，PN）是從靜脈內供給營養作為手術前后及危重患者的營養支持，包括熱量（碳水化合物、脂肪乳劑）、必需和非必需氨基酸、維生素、電解質及微量元素。腸外營養目的是使病人在無法正常進食的狀況下仍可以維持營養狀況、體重增加和創傷愈合，幼兒可以繼續生長、發育[1-6]。

Clinimix E（克靈麥）是專為腸外營養設計的即用型雙室袋產品，含5.5%氨基酸、10%的葡萄糖以及各種可溶性電解質，為機體提供蛋白質原料、碳水化合物熱卡及電解質。Clinimix E（克靈麥）含15種左旋氨基酸，其中8種系人體必需氨基酸，氨基酸是構成蛋白質的基本單位，用于合成蛋白質和其他生物分子，或者氧化為尿素和二氧化碳提供能量。其中的色氨酸為不穩定氨基酸，在高溫、氧化條件下易降解出多種雜質，如犬尿氨酸、吲哚-3-甲醛、色氨酸雜質B、D、M等[7-12]，通過對比美國藥典、歐洲藥典、英國藥典及相關文獻[11-16]，本研究建立了一種高效液相色譜法檢測制劑中色氨酸雜質M，為完善質量控制提供依據。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（Agilent）、PB-10 pH計（Sartorius）、SQP電子天平（Sartorius）、色氨酸雜質M對照品（Sigma，批號：MKBK4239V）、磷酸二氫鈉、乙腈。

1.2 供試品

Clinimix E（克靈麥）氨基酸腔袋藥液（Baxter Healthcare Corporation，批號：P377481）。

1.3 實驗方法

1.3.1 操作步驟

精密量取本品5 mL，置10 mL量瓶中，以10%乙腈稀釋至刻度，作為供試品溶液；取雜質M對照品適量，精密稱定，以10%乙腈溶解并稀釋制成每1 mL中約含10 μg的溶液，作為雜質M對照品貯備液；精密量取對照品貯備液2 mL，置同一10 mL量瓶中，以10%乙腈稀釋至刻度，作為對照品溶液。照高效液相色譜法（中國藥典2015年版四部通則0512）測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Inertsil ODS-3 4.6 mm×250 mm，5 μm）；以磷酸二氫鈉緩沖液（取磷酸二氫鈉約3.9 g，加水溶解至1 000 mL，加2.9 g·L-1磷酸溶液1 000 mL，以磷酸調節pH值至2.3）-乙腈=88.5∶11.5為流動相A，以磷酸二氫鈉緩沖液（pH2.3）-乙腈=65∶35為流動相B，進行梯度洗脫。流速為每分鐘0.7 mL；檢測波長為220 nm，柱溫40 ℃。梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.3.2 方法學考察

1.3.2.1 專屬性

采用酸、堿、氧化、高溫、光照等強烈破壞條件對供試品及陰性樣品進行破壞，考察新增雜質是否干擾雜質M的檢測，同時取空白溶劑進行對比考察。

1.3.2.2 線性

精密稱取雜質M對照品適量，用10%乙腈溶解并稀釋制成不同濃度的對照品溶液，進樣考察。

1.3.2.3 重復性

按照1.3.1中操作步驟，制備對照品溶液和供試品溶液。精密量取對照品溶液和供試品溶液各注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算6份供試品溶液中色氨酸雜質M含量的相對標準偏差（RSD%）。

1.3.2.4 溶液穩定性

將雜質M對照品溶液及供試品溶液置室溫條件下進行放置，分別于不同的時間點進樣，考察樣品溶液及對照品溶液的穩定性。

1.3.2.5 準確度

取雜質M對照品適量，精密稱定，以10%乙腈溶解并稀釋制成每1 mL中約含5 μg 的對照品溶液。取本品5 mL，9份，分別置10 mL量瓶中，分別加入對照品溶液1 mL、2 mL、3 mL，制備3個濃度的樣品，每個濃度平行制備3份樣品。精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算回收率和其相對標準偏差（RSD）。

2 結果與分析

2.1 專屬性

采用酸、堿、氧化、高溫、光照等強烈破壞條件對供試品及陰性樣品進行破壞，產生的降解雜質與雜質M分離度良好，不干擾雜質M的測定；空白溶劑及陰性樣品均不干擾測定，表明該色譜條件專屬性良好。

2.2 線性

精密稱取雜質M對照品適量，用10% 乙腈溶解并稀釋制成不同濃度的對照品溶液，進樣考察。記錄色譜圖，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，計算標準曲線方程。結果表明，色氨酸雜質M濃度在0.202 8～4.056 0 μg·mL-1范圍內與峰面積呈良好的線性關系，其線性方程為=261.33-3.65，=0.999。色氨酸雜質M線性標準曲線見圖1。

圖1 色氨酸雜質M標準曲線

2.3 重復性

按照1.3.1中操作步驟，制備對照品溶液和供試品溶液。精密量取對照品溶液和供試品溶液各注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算6份供試品溶液中色氨酸雜質M含量的相對標準偏差（RSD%）為0，表明該方法重復性良好。重復性試驗結果見表2。

表2 重復性試驗結果

2.4 溶液穩定性

取對照品溶液分別于0、4、8、12、27 h取樣檢測；取供試品溶液分別于0、4、8、16、24 h取樣檢測，記錄色譜圖，計算峰面積RSD，對照品溶液峰面積RSD為0.7%，供試品溶液峰面積RSD為2.0%。表明對照品溶液在27 h內、供試品溶液在24 h內穩定。溶液穩定性試驗結果見表3。

表3 溶液穩定性試驗結果

2.5 準確度

取雜質M對照品適量，精密稱定，以10%乙腈溶解并稀釋制成每1 mL中約含5 μg 的對照品溶液。取本品5 mL，9份，分別置10 mL量瓶中，分別加入對照品溶液1 mL、2 mL、3 mL，制備3個濃度的樣品，每個濃度平行制備3份樣品。精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算回收率平均值為99.1%，RSD為0.2%。表明該方法回收率高，滿足分析測定的要求。回收率試驗結果見表4。

表4 回收率試驗結果

3 結 論

本試驗建立了腸外營養制劑Clinimix E（克靈麥）中氨基酸注射液色氨酸雜質M的測定方法。采用HPLC法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，磷酸鹽-乙腈緩沖系統為流動相進行梯度洗脫。

試驗結果表明，在酸、堿、氧化、高溫及光照條件下破壞后產生的降解產物對色氨酸雜質M的測定均無干擾，方法專屬性好、線性范圍廣且重現性好，為Clinimix E（克靈麥）及同類復方氨基酸注射液中色氨酸雜質M測定提供參考。

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Determination of Tryptophan Impurity M Content in Clinimix E

1,2

（1. Liaoning Haisco Pharmaceutical Co., Ltd., Xingcheng Liaoning 125100, China;2. Liaoning Haisco Pharmaceutical Co., Ltd. Shenyang Branch, Shenyang Liaoning 110179, China）

A method for determination of tryptophan impurity M in amino acid injectionof Clinimix E. was established. HPLC was used to determine, octadecylsilane silica gel was used as filler, sodium dihydrogen phosphate buffer (pH=2.3)-acetonitrile(volume ratio 88.5∶11.5) was used as mobile phase A, sodium dihydrogen phosphate buffer (pH=2.3)-acetonitrile(volume ratio 65∶35) was used as mobile phase B, gradient elution was adopted, the flow rate was 0.7mL·min-1,the detection wavelength was 220 nm,the column temperature was 40 ℃. The results showed that, there was good linear relationship between the mass concentration of tryptophan impurity M and the peak area method at the range of 0.202 8～4.056 0 μg·mL-1.The RSD values for the repeatability and accuracy of the method were 0 and 0.2%, respectively. The method has good specificity, reproducibility and accuracy, and can be used for the determination of tryptophan impurity M content in Clinimix E.

Tryptophan impurity M; HPLC; Aminic acid injection

2021-12-31

吳會斌（1973-），男，遼寧省葫蘆島市人，工程師，1997年畢業于沈陽藥科大學藥物制劑專業，研究方向：藥品生產、質量、研發。

TQ46

A

1004-0935（2022）06-0878-03