血清lncRNA SNHG5與老年結直腸癌患者臨床病理的關系及其診斷價值

于永洋 張福星 劉昭暉 黃耘 王思力

(廈門大學附屬第一醫院 1普外科，福建 廈門 361000；2血液科)

結直腸癌是消化系統常見的惡性腫瘤，多發于中老年人，我國結直腸癌的發病率和病死率在所有惡性腫瘤中均位于第5位，且還在呈上升的趨勢〔1〕。由于早期結直腸癌可無明顯癥狀，待病情發展至一定階段時才會出現排便習慣改變、血便、腹痛等缺乏特異性的癥狀，因此大部分患者都是在中晚期才確診，錯過了最佳治療的時機〔2〕。據統計在疾病早期結直腸癌的5年生存率為95%，而晚期則下降到35%〔3〕，由此可見盡早診斷對改善患者的預后具有重要的意義。長鏈非編碼RNA(lncRNA)可參與調控DNA甲基化、基因組印記、組蛋白修飾、轉錄激活、轉錄干擾等，目前已有研究證實〔4，5〕，lncRNA在多種惡性腫瘤中均存在表達失調，并對疾病的發生、發展起到重要的作用。lncRNA小核仁RNA宿主基因(SNHG)5是與多種惡性腫瘤密切相關的lncRNA，相關研究顯示〔6〕，外周血中lncRNA SNHG5對非小細胞肺癌有較高的診斷價值，細胞實驗證實〔7〕，lncRNA SNHG5可促進結直腸癌細胞的增殖、轉移和遷徙。然而目前尚不清楚血清lncRNA SNHG5對結直腸癌是否有輔助診斷價值，本研究旨在分析血清lncRNA SNHG5與老年結直腸癌患者臨床病理的關系，并分析其與腫瘤標志物對結直腸癌的診斷價值。

1 資料與方法

1.1研究對象 選取2018年1月至2020年4月在廈門大學附屬第一醫院接受治療的結直腸癌患者74例作為結直腸癌組，另選取30例同時期在廈門大學附屬第一醫院接受治療的結直腸息肉患者作為息肉對照組，30例同時期在廈門大學附屬第一醫院體檢的健康志愿者作為健康對照組。3組一般資料均無統計學差異(P>0.05)，見表1。納入標準：①所有患者經病理確診；②入組前未接受放化療等任何形式的治療；③均為首次發??；④均為年齡>60歲的老年患者；⑤對本次研究內容知情同意。排除標準：①合并有血液系統疾病、免疫功能障礙者；②合并有除結直腸癌之外的惡性腫瘤；③合并肝腎等重要臟器功能不全者；④合并全身感染性疾病者。

表1 3組一般資料比較

1.2方法 抽取3組空腹狀態下的靜脈血5 ml，離心10 min(3 000 r/min)后提取血清，置于-70℃的冰箱中保存待測。采用Trizol試劑(Invitrogen公司)提取血清中的總RNA，在分光光度計(Thermofisher公司，ND1000)確定RNA純度和濃度，結果滿意后進行逆轉錄反應，采用逆轉錄試劑盒(PrimeScriptTM RT Master Mix)對總RNA進行反轉錄反應得到cDNA，采用實時熒光定量PCR法檢測血清lncRNA SNHG5的相對表達量。lncRNA SNHG5的引物如下，正向：5′-TACTGGCTGCGCACTTCG-3′，反向：5′-CAGTAAAAGGGGAACACCA-3′；內參基因 GAPDH的引物如下，正向：5′-CTCTTCCAGCCTTCCTTCCT-3′，反 向 ：5′-AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3′。反應條件：95℃ 5 min；95℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s，35個循環。采用2-ΔΔCt計算lncRNA SNHG5相對表達量。 采用全自動電化學發光免疫分析儀(Roche，E170)檢測血清癌胚抗原(CEA)及糖類抗原(CA)199的水平。

1.3統計學方法 采用SPSS23.0軟件進行t檢驗、方差分析、LSD-t檢驗、Pearson相關分析。 受試者工作特征(ROC)曲線分析預測診斷評估價值。

2 結 果

2.1血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199比較 3組血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199整體比較差異均有統計學意義(均P<0.001)，結直腸癌組血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199水平明顯高于息肉對照組和健康對照組(P<0.05)，息肉對照組和健康對照組的血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199水平比較差異無統計學意義(P>0.05，P<0.001)，見表2。

表2 3組血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199比較

2.2結直腸癌患者血清lncRNA SNHG5與臨床病理特征的關系 結直腸癌患者血清lncRNA SNHG5與性別、年齡均不相關(P>0.05)，與腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結轉移及分化程度有關(P<0.05)，見表3。

表3 結直腸癌患者血清lncRNA SNHG5與臨床病理特征的關系

2.3結直腸癌患者血清lncRNA SNHG5與CEA、CA199的相關性分析 結直腸癌患者血清lncRNA SNHG5與CEA、CA199均呈正相關(r=0.478、0.362，P=0.000、0.002)。

2.4血清lncRNA SNHG5與CEA、CA199對結直腸癌患者的診斷價值分析 進一步探討血清lncRNA SNHG5與CEA、CA199對結直腸癌患者的診斷價值，以結直腸癌組為陽性樣本，以健康對照組、息肉對照組為陰性樣本，建立ROC診斷分析模型。三指標均參考臨床實踐劃分成8～12個組段。經ROC曲線分析知：各指標均具有較高的診斷價值，LncRNA ROC曲線下面積(AUC)分別為0.784、0.763、0.746。聯合應用對結直腸癌患者的預測/診斷價值：AUC為0.876。顯然其診斷效能比單一指標均有明顯提高。見表4和圖1。

表4 血清lncRNA SNHG5與CEA、CA199對結直腸癌患者的診斷價值分析

圖1 血清lncRNA SNHG5與CEA、CA199診斷結直腸癌的ROC曲線

3 討 論

2018年結直腸癌新發病例約128萬，死亡病例約88萬，我國是結直腸癌高發的國家，發病率和死亡例數均位居全球第一〔8，9〕。血清腫瘤標志物檢測是臨床診斷惡性腫瘤的重要手段，《中國結直腸癌診療規范(2017年版)》中明確指出結直腸癌患者在診斷、治療前、評價療效和隨訪時必須檢測相關腫瘤標志物：CEA及CA199〔10〕，但采用CEA、CA199診斷依然存在一定的誤診和漏診的情況，其診斷價值有待進一步提高。隨著分子生物學技術的發展，lncRNA逐漸成為惡性腫瘤領域研究的熱點，部分lncRNA與腫瘤的惡性增殖、侵襲浸潤等多種生物學活動密切相關，結腸癌相關轉錄因子1、肺癌轉移相關轉錄本1等lncRNA已被證實具有早期輔助診斷結直腸癌的潛力〔11，12〕。由于lncRNA可在血液樣本中穩定表達，具有臨床取樣方便、重復性好等特點，且部分lncRNA可在腫瘤早期即異常表達，因此lncRNA有望成為結直腸癌診斷、治療和預后評估的新型分子標志物，具有較為廣闊的研究和應用前景。

lncRNA SNHG5位于染色體6q14.3上，長度為524 bp，含有6個外顯子，具有完整剪接U50宿主基因的能力〔13〕。lncRNA SNHG5是一種與惡性腫瘤密切相關的lncRNA，但其在不同惡性腫瘤中發揮的作用有所差異〔14〕。Chi等〔15〕發現，lncRNA SNHG5在乳腺癌中表達上調，且可通過調控增殖細胞核抗原的表達促進乳腺癌細胞增殖。細胞實驗發現〔16〕，抑制黑素瘤細胞系中lncRNA SNHG5的表達可促進細胞凋亡，并能抑制細胞的增殖和侵襲能力。然而在胃癌組織中lncRNA SNHG5表達下調，且其具有抑制胃癌細胞增殖和轉移的能力〔17〕。在肺腺癌中增加lncRNA SNHG5的表達則可增加癌細胞對吉非替尼的敏感性〔18〕。本研究結果顯示，血清lncRNA SNHG5水平表達越高預示著更大的腫瘤直徑、更高的分期、更低的分化程度及有淋巴結轉移，這均提示lncRNA SNHG5在結直腸癌中是一種促癌因子。Zhang等〔7〕研究顯示，lncRNA SNHG5可通過調控微小RNA-132-3p影響CAMP反應元件結合蛋白5的表達，進而促進結直腸癌的惡性進展。而Damas等〔19〕研究顯示，lncRNA SNHG5的缺失可導致結直腸癌細胞周期阻滯，抑制腫瘤的生長，且過表達lncRNA SNHG5可增加癌細胞對奧沙利鉑的耐藥性。由此可見，lncRNA SNHG5是一種與結直腸癌密切相關的lncRNA，可促進疾病的惡性進展，有作為診斷結直腸癌生物標志物的潛力。本研究通過ROC分析發現，血清lncRNA SNHG5診斷結直腸癌的價值較高，曲線下面積為0.784，但其敏感度還有待進一步提升。由于單一生物標志診斷具有一定的局限性，目前多項生物標志物聯合診斷已成為趨勢所在〔20〕，本研究進一步發現，lncRNA SNHG5、CEA、CA199三指標聯合可有效提升對結直腸癌的診斷價值，提示三指標聯合檢測對結直腸癌有較高的輔助診斷價值，具有一定的臨床應用前景。