恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料對(duì)小鼠睡眠的改善作用

馮旭，何穎，陳松，陳大貴，彭偉彪，王婷，張建

隨著經(jīng)濟(jì)的迅猛發(fā)展，人們的工作以及生活節(jié)奏加快， 越來(lái)越多的人出現(xiàn)了失眠的癥狀，關(guān)于失眠的流行病學(xué)調(diào)查顯示，有15%～35% 的成年人存在入睡困難、睡眠時(shí)長(zhǎng)短等問(wèn)題［1］。海軍官兵的睡眠問(wèn)題更為嚴(yán)重，調(diào)查表明，艦艇航行1 個(gè)月后，潛艇官兵的匹茲堡睡眠質(zhì)量指數(shù)總分（Pittsburgh sleep quality index，PSQI）、睡眠效率、睡眠質(zhì)量和入睡時(shí)間分值均顯著升高［2］。長(zhǎng)期的睡眠障礙，可以引起一系列機(jī)體功能的損害，導(dǎo)致作業(yè)功效下降。所以開(kāi)發(fā)改善睡眠的藥物或功能食品，對(duì)提升潛艇官兵作業(yè)功效具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ICR（institute of cancer research）小鼠180 只（雄性，4～6 周，卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司），體重范圍：17～21 g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：scxk（蘇）2016?0010。

1.1.2 藥品與試劑 恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料（5 g/袋，主要成分為酸棗仁粉、蘆筍粉、γ-氨基丁酸、茶葉茶氨酸、紅棗粉、低聚異麥芽糖等）、棗仁安神膠囊（貴州同濟(jì)堂制藥有限公司，0.45 g×20 粒）、戊巴比妥鈉和巴比妥鈉。戊巴比妥鈉和巴比妥鈉均為分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組 動(dòng)物適應(yīng)飼養(yǎng)7 d，稱重，將180 只小鼠隨機(jī)分為3 個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組60 只分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)1.2.4、1.2.5、1.2.6。以成人每日劑量5 g 恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料折合成動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的中劑量組，分別將每個(gè)實(shí)驗(yàn)組中的小鼠隨機(jī)分為低、中、高劑量組（0.5、1.0、2.0 g/kg，0.2 ml/10 g 體積的恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料灌胃）、陽(yáng)性藥組（0.45 g/kg，棗仁安神膠囊配制成2.25 g/100 ml 的混懸液，0.2 ml/10 g 體積灌胃）和空白對(duì)照組（相同體積蒸餾水灌胃），每組12 只，所有小鼠每天灌胃1 次，共30 d。各組小鼠體重、周齡等經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。參照《保健食品檢驗(yàn)和評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)》進(jìn)行改善睡眠功效評(píng)價(jià)［3］。

1.2.2 藥物對(duì)小鼠體重的影響 選擇一個(gè)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物60 只，給藥前及給藥后每10 d 稱量各小鼠體重，觀察實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠體重的影響。

1.2.3 藥物對(duì)小鼠直接催眠作用 計(jì)算小鼠灌胃后30 min內(nèi)，出現(xiàn)睡眠的小鼠數(shù)量。觀察各實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠有無(wú)直接催眠的作用（直接催眠判定標(biāo)準(zhǔn)：小鼠處于背臥位時(shí)，在60 s內(nèi)未翻正）［3］。

1.2.4 延長(zhǎng)小鼠因戊巴比妥鈉作用睡眠時(shí)長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)［3］使用合適劑量戊巴比妥鈉催眠后，給予預(yù)定劑量的實(shí)驗(yàn)藥物，觀察其是否具有延長(zhǎng)睡眠時(shí)長(zhǎng)的效果。睡眠時(shí)長(zhǎng)增加，則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)戊巴比妥鈉引發(fā)的睡眠具有協(xié)同作用。預(yù)實(shí)驗(yàn)確定40 mg/kg 的戊巴比妥鈉能使動(dòng)物全部入睡，且睡眠時(shí)間≤60 min。連續(xù)灌胃30 d，在最后一次給藥30 min 后，各組小鼠通過(guò)腹腔注射給予預(yù)定劑量戊巴比妥鈉（40 mg/kg，0.2 ml/10 g），翻正反射消失且維持60 s 以上作為小鼠入睡標(biāo)準(zhǔn)，觀察各實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)戊巴比妥鈉引起的睡眠時(shí)長(zhǎng)影響。

1.2.5 小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)［3］觀察實(shí)驗(yàn)藥物是否與戊巴比妥鈉具有協(xié)同作用。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定能使80%～90%小鼠不入睡的戊巴比妥鈉閾下劑量為25 mg/kg。連續(xù)灌胃30 d，最后一次給藥30 min 后，各組小鼠通過(guò)腹腔注射給予預(yù)定劑量戊巴比妥鈉（25 g/kg，0.2 ml/10 g）［3］，翻正反射消失作為小鼠入睡指標(biāo)，觀察各實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量引起的小鼠睡眠時(shí)長(zhǎng)影響。

1.2.6 小鼠巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)［3］使用合適劑量的巴比妥鈉催眠小鼠，觀察實(shí)驗(yàn)藥物是否能夠縮短小鼠的入睡潛伏期（自給藥至翻正反射消失）。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定280 mg/kg的巴比妥鈉能使動(dòng)物全部入睡，而睡眠時(shí)間≤60 min。連續(xù)灌胃30 d，在最后一次給藥30 min 后，各組小鼠通過(guò)腹腔注射給予預(yù)定劑量巴比妥鈉（280 g/kg，0.2 ml/10 g），翻正反射消失作為小鼠入睡指標(biāo)，觀察實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 24.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和多重比較，計(jì)量資料采用±s表示。計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠體重的影響

各實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠體重?zé)o明顯影響（P＞0.05），且各組動(dòng)物狀態(tài)良好。見(jiàn)表1。

表1 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠體重的影響（g，± s，每組n=12）

表1 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠體重的影響（g，± s，每組n=12）

注：與空白對(duì)照組比較P 均＞0.05

組別低劑量組中劑量組高劑量組陽(yáng)性藥組空白對(duì)照組給藥30 d 36.3±1.0 36.0±1.5 35.2±1.6 36.6±1.1 36.3±1.3給藥前19.2±1.2 19.2±0.8 19.7±1.5 19.8±0.9 19.6±0.9給藥10 d 31.2±1.7 30.9±1.5 30.7±1.9 31.8±1.3 30.1±1.6給藥20 d 34.1±1.7 33.5±1.7 34.0±1.5 33.7±1.1 33.1±1.3

2.2 直接睡眠作用

各組動(dòng)物灌胃給藥30 min 后，所有小鼠均未入睡，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠并無(wú)直接催眠作用，符合《保健食品檢驗(yàn)和評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)》中改善睡眠保健食品的要求，可進(jìn)行后面3 項(xiàng)實(shí)驗(yàn)［3］。

2.3 延長(zhǎng)小鼠因戊巴比妥鈉作用睡眠時(shí)長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)

不間斷給藥30 d 后，中劑量（1 g/kg）、高劑量（2 g/kg）組和陽(yáng)性藥物組的動(dòng)物睡眠時(shí)長(zhǎng)比空白對(duì)照組顯著增加（P＜0.05），表明足量的實(shí)驗(yàn)藥物能夠延長(zhǎng)因戊巴比妥鈉引起的小鼠睡眠時(shí)長(zhǎng)。見(jiàn)表2。

表2 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)長(zhǎng)的影響（s，± s）

表2 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)長(zhǎng)的影響（s，± s）

注：與空白對(duì)照組比較aP＜0.05，bP＜0.01

組別低劑量組中劑量組高劑量組陽(yáng)性藥組空白對(duì)照組睡眠時(shí)間1 815.2±291.0 2 249.8±352.3b 2 049.5±105.2a 2 270.4±484.6b 1 522.1±637.7小鼠數(shù)12 12 12 12 12戊巴比妥鈉（mg/kg）40 40 40 40 40

2.4 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)藥物各劑量對(duì)小鼠入睡率的影響比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表3。

表3 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠的影響［只（%）］

2.5 巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)

中劑量（1 g/kg）和高劑量（2 g/kg）的實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠睡眠潛伏期有明顯縮短作用（P＜0.05），陽(yáng)性藥物組對(duì)小鼠睡眠潛伏期也有著相同的效果（P＜0.01），結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)藥物能夠縮短巴比妥鈉催眠下的小鼠睡眠潛伏期。見(jiàn)表4。

表4 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響（s，± s）

表4 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響（s，± s）

注：與空白對(duì)照組比較aP＜0.05,bP＜0.01

組別低劑量組中劑量組高劑量組陽(yáng)性藥組空白對(duì)照組睡眠時(shí)間748.5±253.2 696.7±216.1a 739.8±130.5a 645.9±220.3b 873.6±167.6小鼠數(shù)12 12 12 12 12巴比妥鈉（g/kg）280 280 280 280 280

4 討論

恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料含有酸棗仁粉、蘆筍粉、γ-氨基丁酸和茶葉茶氨酸等成分，酸棗仁是我國(guó)傳統(tǒng)中藥，是具有明顯改善睡眠作用的藥食兩用藥物，酸棗仁中的黃酮類中成分對(duì)小鼠具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用，多糖成分則明顯降低了小鼠的自主活動(dòng)性［4?5］。蘆筍粉對(duì)存在睡眠障礙的人群有良好的改善作用，不僅增加有效睡眠時(shí)長(zhǎng)，還可以縮短驚醒后的再入睡時(shí)長(zhǎng)，其可能的機(jī)制是調(diào)節(jié)HPA 軸或5-羥色胺分泌相關(guān)［6?7］。γ-氨基丁酸和茶氨酸為新資源食品，γ-氨基丁酸是一種存在于人體和自然界的非蛋白質(zhì)氨基酸，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中有著抑制性神經(jīng)遞質(zhì)的作用，在睡眠覺(jué)醒中也起著重要作用［8］。焦躁、不安、疲勞、憂郁、失眠等不適癥狀會(huì)伴隨著γ-氨基丁酸的缺失出現(xiàn)于人體［9?10］，研究表明，γ-氨基丁酸可以延長(zhǎng)睡眠時(shí)間、增加閾下劑量入睡動(dòng)物數(shù)量［11］。茶氨酸是茶葉中的一種游離氨基酸，具有鎮(zhèn)靜安神、抗疲勞、提高記憶力等功效，也具有顯著改善睡眠的功效［12］。以上多種成分，改善睡眠的機(jī)制不盡相同，通過(guò)合理復(fù)配，可以更好地達(dá)到改善睡眠的功效。

研究表明恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料灌胃給予30 d，對(duì)小鼠體重?zé)o影響。恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料低、中、高劑量均無(wú)直接促進(jìn)小鼠睡眠的作用。在延長(zhǎng)因戊巴比妥鈉引起的睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)中，中劑量和高劑量組的實(shí)驗(yàn)藥物可以顯著增加小鼠的睡眠時(shí)長(zhǎng)，表明實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠具有協(xié)同作用。在巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)中，中劑量和高劑量的實(shí)驗(yàn)藥物顯著地縮短小鼠睡眠潛伏期。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》的要求［3］，上述3 項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)和巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，可判定恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料具有改善睡眠功能的作用。