腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者組織中微管相關(guān)蛋白輕鏈3-Ⅱ表達(dá)水平與其臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系

王偉一 李 娟 李自強(qiáng)

結(jié)直腸癌(colorectal cancer，CRC)是目前世界上常見的惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的10%～15%，每年約導(dǎo)致60萬(wàn)例人死亡，發(fā)病率和死亡率均高，且呈上升趨勢(shì)[1-2]。隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和膳食結(jié)構(gòu)的變化，其發(fā)病率也在逐年增加[3]。腹腔鏡借助探頭在直視下操作，具有創(chuàng)傷小以及術(shù)后恢復(fù)快的特點(diǎn)[4]。自噬相關(guān)基因微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3)是參與自噬活性調(diào)控的重要基因[5]。LC3作為自噬體的重要組成部分，它包括 LC3A、LC3B、LC3C 的3種同工型，其中 LC3B 與自噬水平相關(guān)[6-7]。有研究報(bào)道稱LC3 在包括卵巢癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、乳腺癌等多種腫瘤中異常表達(dá)[8-9]。因此本研究探討了腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者組織中微管相關(guān)蛋白輕鏈3-Ⅱ表達(dá)水平與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2018年1月至2019年1月本院收治結(jié)直腸癌患者60例，年齡54～71歲，平均(59.32 ±7.43)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國(guó)結(jié)直腸癌診療規(guī)范》標(biāo)準(zhǔn)[10]，經(jīng)病理或細(xì)胞學(xué)診斷為結(jié)直腸癌患者；② 患者行腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并腸道炎性疾病、腸梗阻、腸功能紊亂等并發(fā)癥；②合并其他惡性腫瘤患者；③合并其他器官嚴(yán)重性病變患者。

1.2 免疫組化分析LC3水平

采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)LC3表達(dá)，以鼠抗人LC3單克隆抗體為一抗，用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，參考文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)判斷，LC3陽(yáng)性產(chǎn)物均位于細(xì)胞核，視野中出現(xiàn)粗細(xì)一致的棕黃色為陽(yáng)性染色，無(wú)棕色反應(yīng)為陰性染色。在陽(yáng)性顆粒密集部位隨機(jī)選取10個(gè)200倍視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野中細(xì)胞的染色情況，取平均值。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占全部細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)對(duì)其進(jìn)行分級(jí)，陰性為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%；陽(yáng)性為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>10%。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)將患者分為L(zhǎng)C3陽(yáng)性組(n=39)和LC3陰性組(n=21)。

1.3 收集臨床資料及隨訪資料

采用電話及門診或住院復(fù)查等方式進(jìn)行隨訪，收集患者年齡、性別、腫瘤分化程度、腫瘤最大徑等臨床資料。隨訪時(shí)間截止2021年5月。根據(jù)隨訪結(jié)果將患者分為死亡組(n=25)和生存組(n=35)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 組織LC3表達(dá)與腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者臨床病理特征的關(guān)系

組織LC3表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤分化程度等臨床病理特征均無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，與腫瘤分期、淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，見表1。

表1 組織LC3表達(dá)與腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者臨床病理特征的關(guān)系/例

2.2 影響腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者預(yù)后的單因素分析

單因素分析發(fā)現(xiàn)：腫瘤分化程度、腫瘤分期、淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、LC3表達(dá)是影響腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者預(yù)后的因素(P<0.05)，見表 2。

表2 影響腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者預(yù)后的單因素分析/例

2.3 影響腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者預(yù)后的多因素分析

多因素分析顯示：腫瘤分化程度、淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤分期和LC3表達(dá)情況表達(dá)是影響腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表3。

表3 影響腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者預(yù)后的多因素分析

3 討論

結(jié)直腸癌屬于胃腸道惡性腫瘤，主要由結(jié)腸細(xì)胞或直腸細(xì)胞發(fā)生惡性病變而來[11]。早期無(wú)特異性癥狀，隨著腫塊增大會(huì)出現(xiàn)便血、腹瀉、局部腹痛等癥狀，晚期結(jié)直腸可出現(xiàn)貧血、體重減輕等癥狀[12-13]。該病的發(fā)病率、病死率較高，全球每年新發(fā)結(jié)直腸癌者高達(dá)93萬(wàn)人，在我國(guó)每年新發(fā)病例高達(dá)130000～160000例，嚴(yán)重威脅人類健康[14-15]。手術(shù)切除可以有效減輕患者痛苦，提高生存質(zhì)量。與傳統(tǒng)開腹手術(shù)相比，腹腔鏡結(jié)直腸癌手術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：①術(shù)后疼痛輕；②傷口愈合時(shí)間縮短，腹部切口相對(duì)較小美觀；③胃腸功能恢復(fù)更快；④正常活動(dòng)恢復(fù)快，住院時(shí)間短；⑤減少腸梗阻、切口感染等并發(fā)癥；⑥提高患者術(shù)中及術(shù)后免疫力；⑦在盆底等狹窄空間內(nèi)有更好的手術(shù)視野[16-17]。結(jié)直腸癌作為一個(gè)重大的負(fù)生活事件，不可避免地會(huì)對(duì)患者造成強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng)，根治手術(shù)更會(huì)加劇這種應(yīng)激反應(yīng)的程度。因此針對(duì)腹腔鏡結(jié)直腸癌手術(shù)后患者尋找預(yù)后指標(biāo)是目前臨床研究的亟待解決的問題。

LC3 是酵母 Atg8p 的哺乳動(dòng)物同源物，被認(rèn)為是自噬體的重要組成部分[18]。它包括 LC3A、LC3B、LC3C 的3種同工型，其中 LC3B 與自噬水平相關(guān)[19]。LC3 已在多種腫瘤包括卵巢癌、腦癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、乳腺癌、黑色素瘤中異常表達(dá)[20-21]。LC3 表達(dá)與FIGO 分期相關(guān)[22]。LC3 表達(dá)與血管浸潤(rùn)顯著相關(guān)；高 LC3 表達(dá)表明總體生存率(OS) 較差[23]。本研究中組織LC3表達(dá)與腫瘤分期、淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況等有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。單因素分析發(fā)現(xiàn)腫瘤分化程度、腫瘤分期、淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、LC3表達(dá)是影響腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者預(yù)后的因素。多因素分析顯示腫瘤分化程度、淋巴結(jié)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤分期和LC3表達(dá)情況表達(dá)是影響腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。提示LC3有潛力成為預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌患者預(yù)后的生物標(biāo)志物，但其中具體作用機(jī)制尚不明確，潛在的原因還需進(jìn)一步試驗(yàn)數(shù)據(jù)來驗(yàn)證。

綜上所述，腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者組織中微管相關(guān)蛋白輕鏈3-Ⅱ表達(dá)水平與臨床病理特征有關(guān)，微管相關(guān)蛋白輕鏈3-Ⅱ表達(dá)可作為預(yù)測(cè) 腹腔鏡結(jié)直腸癌根治術(shù)后患者預(yù)后的生物標(biāo)志物，具有重要的臨床意義。但本研究中的研究對(duì)象規(guī)模較小，未進(jìn)行深入研究，是否能成為結(jié)直腸癌預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物，還需要在今后的研究中擴(kuò)大樣本量以及研究范圍，以此完善實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確保其準(zhǔn)確性，為新的腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用于臨床提供參考依據(jù)。