環狀RNA TADA2A在胃癌組織中的表達及臨床意義

余智濤 張 磊 溫建燔

環狀RNA為非編碼RNA家族成員，其廣泛存在于人體組織中，其表達具有組織特異性，是非編碼RNA 領域的研究熱點[1]。既往研究顯示，環狀RNA具有多種生物學功能，其可通過mRNA海綿作用，提升靶基因的表達[2]。本課題組前期應用芯片技術篩選發現，胃癌組織中環狀RNA TADA2A呈低表達。因此，為進一步探討環狀RNA TADA2A與胃癌的關系，本研究對92例胃癌患者進行研究，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

選取2020年1月至2021年1月于我院接受手術治療的胃癌患者92例納入研究，入組患者均經病理證實為原發性胃癌且術前均未行放化療。收集術后胃癌組織及癌旁組織(經病理證實為正常胃組織)作為樣本，將新鮮組織樣本經冷凍處理后置于-80℃冰箱待檢。環狀RNA TADA2A引物及內參GAPDH委托上海生工生物工程公司合成。

1.2 方法

1.2.1 RNA提取 根據Trizol試劑盒(生產廠家：大連寶生物工程公司)說明書操作，取樣本組織80 mg，超聲勻漿后，經1‰DEPC水溶解后，提取樣本中RNA的濃度、純度，另取1 μl RNA檢測RNA完整性。

1.2.2 逆轉錄反應 根據逆轉錄試劑盒(生產廠家：大連寶生物工程公司)說明書操作，反應體系(20 μl)：2 μl RNA樣品、1 μl引物、1 μl逆轉錄酶、1 μl GAPDH反向引物、1 μl dNTP混合物(10 mM)、0.5 μl RNase抑制劑 、4 μl 5×RT 緩沖液、9.5 μl不含RNase的H2O。反應條件：42℃ 30 s，56℃ 15 min，85℃ 1 min，4℃ 5 min，產物置于-20℃保存。

1.2.3 PCR擴增 采用實時熒光定量PCR儀(生產廠家：西安天隆科技公司)，按照PCR試劑盒(生產廠家：廣州銳博生物科技公司)說明書操作，反應體系(25 μl)：2 μl稀釋的cDNA、12.5 μl SYBP Premix EX TaqTMⅡ、2 μl引物，加ddH2O水補至25 μl。反應條件：95℃ 1 min，95℃ 30 s，60℃ 1 min，42℃ 30 s，40個循環。

1.2.4 結果計算 采用2-△△CT方法計算，GAPDH為內參，取三個復孔均值，以 2-△△CT表示目的基因表達，環狀RNA TADA2A的相對表達量=2-△△CT值(環狀RNA TADA2A)-2-△△CT值(GAPDH)。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 組織中環狀RNA TADA2A的相對表達量比較

環狀RNA TADA2A在胃癌組織中相對表達量為(0.83±0.14)，明顯低于癌旁組織(2.29±0.87)，兩組比較差異顯著(t=15.892，P<0.001)，見圖1。

圖1 組織中環狀RNA TADA2A的相對表達量比較

2.2 環狀RNA TADA2A的相對表達量與胃癌臨床特征的關系

臨床分期高、深層浸潤、發生淋巴結轉移、有脈管癌栓的胃癌組織中環狀RNA TADA2A的相對表達量顯著下降(P<0.05)，見表1。

表1 環狀RNA TADA2A的相對表達量與胃癌臨床特征的關系

2.3 環狀RNA TADA2A診斷胃癌的ROC曲線分析

由ROC曲線可知，環狀RNA TADA2A診斷胃癌的AUC為0.796(95%CI：0.683-0.925，P<0.05)，診斷特異度為80.21%，敏感度為88.43%，見圖2。

圖2 環狀RNA TADA2A診斷胃癌的ROC曲線

3 討論

臨床研究顯示，環狀RNA的分子結構為封閉環狀，它是特殊的內源性非編碼RNA，存在于人體細胞中且具有多種生物學功能[3]。近年來，環狀RNA與腫瘤的關系已成為臨床研究的熱點問題。陳炳合等[4]研究報道，胃癌組織中環狀RNA cRAPGEF5表達下調，其可能參與胃癌的侵襲、增殖、轉移。羅再等[5]研究發現，胃癌組織中環狀RNA RUNX1呈高表達，且其表達與胃癌病理特征、患者預后有關。朱秋霞等[6]研究發現，肺腺癌組織中環狀RNA TADA2A呈高表達，下調表達水平可抑制腫瘤細胞的侵襲、遷移。另有學者研究報道，FAM107A在胃癌等多種癌癥中呈低表達，TADA2A可能與FAM107A相互作用，共同參與細胞過程，發揮抑癌作用[7]。

本研究發現，與癌旁組織比較，胃癌組織中環狀RNA TADA2A的相對表達量明顯降低。結果提示，胃癌組織中環狀RNA TADA2A呈低表達。既往研究顯示，環狀RNA TADA2A位于人17號染色體，其在大腸癌組織中表達下調，其可通過miR-374a-3p/KLF14軸抑制大腸癌的進展[8]。另有研究報道，乳腺癌組織中環狀RNA TADA2A呈低表達，其可通過靶向miR-203a-3p/SOCS3軸抑制乳腺癌的進展和轉移[9]。由以上研究可知，環狀RNA TADA2A在腫瘤組織中呈異常表達，其與惡性腫瘤的的發生有關。

本研究表明，臨床分期高、深層浸潤、發生淋巴結轉移、有脈管癌栓的胃癌組織中環狀RNA TADA2A的相對表達量顯著下降。通過ROC曲線分析，環狀RNA TADA2A診斷胃癌的特異度、敏感度較高，結果提示，環狀RNA TADA2A可能參與胃癌的發生進展過程，其可能成為胃癌臨床診斷標記物。有研究顯示，環狀RNA TADA2A可通過調節CREB3表達、海綿化miR-203a-3p，進而促進骨肉瘤進展[10]。另有研究報道，環狀RNA TADA2A可通過抑制成纖維細胞的增殖和活化來緩解特發性肺纖維化[11]。有學者發現，新型環狀RNA TADA2A可通過海綿化miR-203促進卵巢癌的增殖和轉移。李震等[12]研究發現，環狀RNA TADA2A可通過促進結直腸癌細胞的凋亡，而抑制癌細胞增殖，其在結直腸癌中發揮抑癌作用。因此，我們推測環狀RNA TADA2A在腫瘤組織發揮抑癌作用。

綜上所述，環狀RNA TADA2A在胃癌組織中呈低表達，其可能與胃癌的發生進展有關，但臨床尚需進一步探討其作用機制。