胰腺導(dǎo)管腺癌中PTK7、CSPG4表達(dá)及其臨床意義

李軍彥 陳文超 李中輝 王騰飛 盧少峰 丁東哲 趙守魁

臨床上患有胰腺導(dǎo)管腺癌的患者病死率及致殘率逐年上升[1]。在部分地區(qū)報道的研究中，可以發(fā)現(xiàn)胰腺導(dǎo)管腺癌的整體發(fā)病呈現(xiàn)出了明顯的年輕化趨勢[2,3]。在對胰腺導(dǎo)管腺癌的發(fā)生過程中，細(xì)胞因子和腫瘤蛋白的變化發(fā)揮了重要調(diào)控作用。癌細(xì)胞調(diào)控蛋白，能夠在癌細(xì)胞的增殖轉(zhuǎn)錄調(diào)控、癌基因的激活、癌細(xì)胞內(nèi)信號通路的調(diào)控等方面發(fā)揮作用。其中酪氨酸蛋白激酶7(PTK7)能夠通過激活癌細(xì)胞膜上的絡(luò)氨酸激酶受體，使得癌細(xì)胞內(nèi)腫瘤效應(yīng)因子上調(diào)，癌細(xì)胞發(fā)生異常轉(zhuǎn)錄和增殖[4]；硫酸軟骨素蛋白多糖4(CSPG4)是細(xì)胞間質(zhì)成分，使癌細(xì)胞間粘附能力和浸潤能力增強(qiáng)，最終促進(jìn)胰腺導(dǎo)管腺癌的發(fā)生[5]。本研究為了揭示PTK7、CSPG4的表達(dá)與胰腺導(dǎo)管腺癌的關(guān)系，以期更好的為胰腺導(dǎo)管腺癌的臨床診斷和治療提供參考，探討了PTK7、CSPG4的表達(dá)情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2019年1月至2021年3月保存的胰腺導(dǎo)管腺癌標(biāo)本92例，其中男性67例，女性25例；年齡32～71歲，中位年齡50.50歲。同時選取相應(yīng)癌旁組織(距瘤邊緣>2 cm)作為對照，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理學(xué)檢查確診；②資料完整；③患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前接受過放化療等抗腫瘤治療；②合并有其他惡性腫瘤者。

1.2 方法

石蠟切片脫蠟，與5%過氧化氫在室溫下反應(yīng)10 min，磷酸鹽緩沖液孵育5 min，洗滌3次，每次5 min，用5%山羊血清抗體封閉10 min，無需清洗，4℃下孵育一抗過夜(abcam公司批號：20119304，1∶500稀釋)，用蒸餾水洗滌3次，每次5 min，室溫下孵育生物素標(biāo)記的二抗(購自北京康泰生物公司，批號：20104856，1∶1000稀釋)30 min，蒸餾水洗滌3次，每次5 min，滴加第二代辣根酶標(biāo)記的工作液，在37℃下孵育10 min，蒸餾水洗滌3次，每次5 min，常規(guī)脫水，中性樹膠封片。

1.3 結(jié)果判斷

在高倍鏡下，每張切片隨機(jī)選取10個視野，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，對染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例進(jìn)行評價，染色強(qiáng)度：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細(xì)胞比例：無細(xì)胞著色為0分，≤10%為1分，11%～25%為2分，26%～50%為3分，>50%為4分。染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例得分之和≥3為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 19.0軟件，組間比較使用χ2檢驗，PTK7與CSPG4相關(guān)性采用Sparman秩相關(guān)分析。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 胰腺導(dǎo)管腺癌與癌旁組織中PTK7、CSPG4表達(dá)比較

胰腺導(dǎo)管腺癌中PTK7蛋白和CSPG4蛋白陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織(P<0.05)，見表1。

表1 胰腺導(dǎo)管腺癌與癌旁組織中PTK7、CSPG4表達(dá)比較(例，%)

2.2 PTK7、CSPG4表達(dá)與胰腺導(dǎo)管腺癌臨床病理特征的關(guān)系

PTK7蛋白陽性表達(dá)與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)； CSPG4蛋白陽性表達(dá)與TNM分期、血管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，見表2。

表2 PTK7、CSPG4表達(dá)與胰腺導(dǎo)管腺癌臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

2.3 PTK7表達(dá)與CSPG4表達(dá)的相關(guān)性

胰腺導(dǎo)管腺癌組織中PTK7表達(dá)與CSPG4蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(γs=0.305，P<0.05)，見表3。

表3 PTK7表達(dá)與CSPG4表達(dá)的相關(guān)性/例

3 討論

長期高鹽、高蛋白飲食等誘導(dǎo)的胰腺分泌功能的紊亂，或者基礎(chǔ)性膽道系統(tǒng)的合并癥，能夠提高胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞的損傷程度，導(dǎo)管上皮細(xì)胞異常分裂導(dǎo)致胰腺導(dǎo)管腺癌的發(fā)生[6]。流行病學(xué)顯示胰腺導(dǎo)管腺癌患者早期診斷較為困難，并且短期內(nèi)病情進(jìn)展快，遠(yuǎn)期臨床總體生存時間或者無瘤生存時間較短[7,8]。不同的病理性因素，均能夠促進(jìn)胰腺導(dǎo)管腺癌患者臨床病理特征的進(jìn)展。除了腫瘤細(xì)胞分化來源、病程的長短、既往治療病史外，胰腺導(dǎo)管腺癌患者體內(nèi)的腫瘤調(diào)控蛋白具有核心調(diào)控作用。雖然現(xiàn)階段臨床上多數(shù)研究者探討了CEA或者CA199等指標(biāo)在胰腺導(dǎo)管腺癌發(fā)生過程中的作用，認(rèn)為CA199等指標(biāo)的表達(dá)與胰腺癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)[9,10]，但缺乏對于PTK7與CSPG4的分析。本次研究能夠在揭露PTK7與CSPG4蛋白表達(dá)水平的同時，進(jìn)一步分析了PTK7與CSPG4的內(nèi)在關(guān)系。

PTK7是絡(luò)氨酸激酶調(diào)控因子，其可以調(diào)控癌細(xì)胞內(nèi)絡(luò)氨酸依賴性蛋白激酶水平，激活腫瘤細(xì)胞內(nèi)不同信號通路。PTK7對于癌基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白的絡(luò)氨酸修飾作用，能夠影響到癌基因的轉(zhuǎn)錄活性，提高癌細(xì)胞核DNA的異常分裂風(fēng)險；CSPG4是軟骨蛋白族相關(guān)因子，其主要表達(dá)于細(xì)胞間質(zhì)成分中，在癌細(xì)胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的過程中，CSPG4發(fā)揮了重要的介導(dǎo)作用。CSPG4能夠通過影響癌細(xì)胞偽足的形成速度，促進(jìn)癌細(xì)胞的浸潤和突破基底膜組織，導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生。有研究人員試圖探索PTK在胰腺癌患者中的表達(dá)，并認(rèn)為PTK7蛋白的表達(dá)水平可以在胰腺癌患者中顯著增加[11,12]，但對于CSPG4與胰腺導(dǎo)管腺癌的病情分析較少。

本研究采用免疫組化的方式探討了PTK7與CSPG4蛋白在胰腺導(dǎo)管腺癌患者中的表達(dá)情況，病灶中PTK7與CSPG4蛋白的表達(dá)陽性率水平明顯高于癌旁組織，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，PTK7與CSPG4蛋白在病例組患者病灶組織中的高表達(dá)，提示其在胰腺導(dǎo)管腺癌的病情進(jìn)展過程中發(fā)揮了重要的影響。PTK7對于胰腺癌發(fā)生的影響，主要在于其能夠影響到癌基因的絡(luò)氨酸酶修飾水平，促進(jìn)了腫瘤蛋白的絡(luò)氨酸化，最終影響到了癌細(xì)胞的生物學(xué)特征；CSPG4能夠影響導(dǎo)管上皮細(xì)胞間質(zhì)成分中細(xì)胞骨架成分的水平，導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)移和浸潤風(fēng)險增加。有其他研究者也認(rèn)為，在胰腺癌患者病灶組織中，PTK蛋白的表達(dá)與胰腺癌患者的整體性病情密切相關(guān)，在發(fā)生明顯腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移的患者中，PTK蛋白的表達(dá)能夠顯著影響到胰腺癌患者的短期病情進(jìn)展速度[13]。結(jié)果來看PTK7與CSPG4蛋白主在胰腺癌細(xì)胞膜周邊及細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，組織異型性明顯的區(qū)域染色較深。在胰腺癌臨床分期較晚或者發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，PTK7蛋白的表達(dá)水平較高，表明PTK7能夠影響到胰腺癌的臨床病理特征。PTK7對于導(dǎo)管上皮細(xì)胞跳躍式傳遞的影響，能夠增加其對于淋巴結(jié)內(nèi)皮組織的粘附能力，最終增加了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險[14-16]；TNM分期Ⅲ期、有血管侵犯、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者CSPG4蛋白陽性表達(dá)率明顯上升，提示CSPG4也能夠顯著影響到胰腺癌的臨床病情的進(jìn)展。臨床上可以通過檢測PTK7與CSPG4水平，從而評估胰腺癌臨床病理特征進(jìn)展情況。相關(guān)關(guān)系分析也可見，胰腺導(dǎo)管腺癌組織PTK7與CSPG4蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，PTK7與CSPG4可能在癌細(xì)胞生物學(xué)特征的調(diào)控方面具有一定的聯(lián)系。

胰腺導(dǎo)管腺癌組織PTK7、CSPG4蛋白表達(dá)上調(diào)，與臨床病理特征有一定關(guān)系，PTK7與CSPG4表達(dá)呈正相關(guān)。希望本次研究能夠為臨床上后續(xù)胰腺導(dǎo)管腺癌的早期診斷及臨床預(yù)后隨訪提供參考。