趨化因子CXCL11 及其受體CXCR7與系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)相關(guān)性研究

祖蓓蓓 陳艷紅 饒?jiān)伱?李美榮 劉 琳 馬倩倩▲

1.江蘇省徐州市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所，江蘇徐州 221009；2.江蘇省徐州市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇徐州 221009；3.江蘇省徐州市中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，江蘇徐州 221009

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種慢性多系統(tǒng)受累的自身免疫病，臨床表現(xiàn)具有高度異質(zhì)性、復(fù)雜性。其發(fā)病機(jī)制主要為免疫功能異常[1-2]。其中趨化因子通過(guò)對(duì)免疫細(xì)胞調(diào)控，參與自身免疫病的發(fā)病過(guò)程[2-3]。趨化因子CXCL11 是γ 干擾素誘導(dǎo)的趨化因子，其主要功能與CXCR3、CXCR7 受體相結(jié)合，通過(guò)β-arrestin 途徑調(diào)理趨化因子受體內(nèi)吞、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，影響免疫細(xì)胞遷移、促進(jìn)炎癥、增強(qiáng)血管生成和白細(xì)胞外滲等免疫效應(yīng)[4-5]。近年來(lái)研究報(bào)道，CXCL11、CXCR7 在骨關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、皮肌炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征、系統(tǒng)性硬皮病等免疫相關(guān)疾病中高表達(dá)[6-12]，其在SLE 表達(dá)情況和臨床意義，目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)統(tǒng)一的研究結(jié)論。本研究擬通過(guò)檢測(cè)SLE 患者及健康者外周血中CXCL11、CXCR7 表達(dá)水平，探討CXCL11、CXCR7 在SLE 疾病活動(dòng)、病情進(jìn)展中的作用及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇40 例SLE 患者為江蘇省徐州市中心醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）風(fēng)濕免疫科2018 年10 月至2020 年10 月初次發(fā)病患者作為SLE 組，SLE 診斷符合美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)修訂的SLE 分類標(biāo)準(zhǔn)[13]。其中男4 例，女36 例；年齡16～60 歲，平均（37.1±12.1）歲。根據(jù)SLE 疾病活動(dòng)性指數(shù)（systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI）進(jìn)行SLE 疾病活動(dòng)度分組[14]：SLEDAI評(píng)分≥10 分為中重度活動(dòng)組，5～9 分為輕度活動(dòng)組，0～4 分為無(wú)活動(dòng)組。收集SLE 患者詳細(xì)的臨床資料，根據(jù)SLEDAI 評(píng)分將SLE 患者分為中重度疾病活動(dòng)組20 例，男2 例，女18 例；年齡（37.2±12.3）歲。輕度疾病活動(dòng)組10 例，男1 例，女9 例；年齡（37.1±12.2）歲。非活動(dòng)組10 例，男1 例，女9 例；年齡（36.8±11.4）歲。另選擇我院體檢中心健康體檢者20 名作為健康對(duì)照組，男2 名，女18 名；年 齡16～62 歲，平 均（37.2±11.8）歲。健康對(duì)照組和SLE 各組性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。本研究已獲得我院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，所有患者均已簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采集SLE 患者空腹外周靜脈血共8 ml，分2 管（4 ml/管）。其中一管（肝素抗凝管）4 ml 血標(biāo)本行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，另一管（分離膠促凝管）4 ml 血標(biāo)本離心，離心半徑10 cm，3000 r/min 離心10 min，收集血清，-80℃凍存，用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)。

1.2.2 ELISA 檢測(cè) 嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)操作，將待測(cè)樣本、標(biāo)本品儲(chǔ)存液稀釋備用，分別加入檢測(cè)孔、孵育、洗滌、吸干、加入樣本結(jié)合物，再次孵育、洗滌、吸干、加底物溶液、反應(yīng)、加入反應(yīng)終止液、靜置30 min 后測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測(cè)樣本中CXCL11 的濃度（美國(guó)R&D System 公司,貨號(hào)：DCX110/891030）。

1.2.3 流式細(xì)胞術(shù) 依次取熒光抗體CD3FITC 10 μl+CD19PE 10 μl+IgG2αAPC 10 μl+抗凝全血50 μl 加入1 支流式管中，取熒光抗體CD3FITC 10 μl+CD19PE 10 μl+CXCR7APC 10 μl+抗凝全血50 μl 熒光抗體加入第2 支流式管中（美國(guó)BD 公司，批號(hào)：9151960、7299982、8339984、9229185），混勻、室溫避光孵育、溶血、孵育10 min、離心半徑10 cm，1000 r/min 離心5 min，離心去上清液、1 ml PBS 離心洗滌2 次，去上清液，500 μl PBS 混勻、3 h 內(nèi)上機(jī)檢測(cè)軟件獲取數(shù)據(jù)及分析（FACS Calibur 流式細(xì)胞儀）。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

各組患者外周血中CXCL11（pg/ml）、CD3+CXCR7+T淋巴細(xì)胞（%）、CD19+CXCR7+B 淋巴細(xì)胞（%）表達(dá)及SLE 患者的C 反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）、紅細(xì)胞沉降率、dsDNA、C3、C4、24 h 尿蛋白定量、抗核抗體、抗核抗體譜、免疫球蛋白、血常規(guī)、肝腎功能等臨床指標(biāo)檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0 軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布或?qū)?shù)轉(zhuǎn)換后符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t 檢驗(yàn)或方差分析。不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)和四分位數(shù)[M（P25，P75）]表示，采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)或Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)。采用Spearman 進(jìn)行相關(guān)性分析。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組CXCL11、CXCR7 表達(dá)比較

SLE 組外周血中CD3+CXCR7+T 細(xì)胞、CD19+CXCR7+B 細(xì)胞及CXCL11 表達(dá)水平高于健康對(duì)照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1 兩組CXCL11、CXCR7 表達(dá)比較[M（P25，P75）]

2.2 不同疾病活動(dòng)組SLE 患者外周血中CXCL11、CXCR7 表達(dá)比較

不同疾病活動(dòng)組SLE 患者CD19+CXCR7+、CD3+CXCR7+、CXCL11 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。其中，疾病無(wú)活動(dòng)組、輕度活動(dòng)組、中重度活動(dòng)組各指標(biāo)高于健康對(duì)照組，輕度活動(dòng)組、中重度活動(dòng)組各指標(biāo)高于疾病無(wú)活動(dòng)組，中重度活動(dòng)組各指標(biāo)高于輕度活動(dòng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同疾病活動(dòng)組SLE 患者外周血中CXCR7、CXCL11 表達(dá)比較

2.3 SLE 患者外周血中CXCL11、CXCR7 表達(dá)水平與疾病活動(dòng)指標(biāo)相關(guān)性分析

SLE 患者CD3+CXCR7+T 細(xì)胞、CD19+CXCR7+B 細(xì)胞、CXCL11 表達(dá)與SLEDAI 評(píng)分、dsDNA、紅細(xì)胞沉降率、CRP 呈正相關(guān)（r ＞0，P ＜0.05）；與補(bǔ)體C3 呈負(fù)相關(guān)（r ＜0，P ＜0.05）；與血白細(xì)胞、血小板、血紅蛋白、抗核抗體、抗Sm 抗體、免疫球蛋白無(wú)相關(guān)性（P ＞0.05）。見(jiàn)表3。

表3 SLE 患者外周血中CXCR7、CXCL11 表達(dá)水平與疾病活動(dòng)指標(biāo)相關(guān)性分析

3 討論

SLE 是一種多器官表現(xiàn)的全身性自身免疫性疾病，其病因尚不明確，目前認(rèn)為免疫功能異常參與SLE的病理過(guò)程，如在異常表達(dá)的趨化因子作用下，T、B細(xì)胞異常活化和功能異常，可產(chǎn)生大量不同類型的自身抗體、致炎因子、趨化因子等，造成SLE 各組織器官的損傷[1-2]。

趨化因子是一組小分子量（7～12 kD）蛋白家族，包括經(jīng)典4 個(gè)亞家族（XC、CC、CXC 和CX3C）和4種非典型趨化因子受體（atypical chemokine receptor，ACKR），即ACKR1、ACKR2、ACKR3、ACKR4[15-17]。其中趨化因子受體ACKR3 又稱為CXCR7，與CXCL11和CXCL12 雙配體結(jié)合[18-20]，通過(guò)非G 蛋白依賴性信號(hào)的β-arrestin 通路途徑，不具有經(jīng)典的趨化性，但能調(diào)節(jié)趨化因子的趨化性、可用性和效應(yīng)性，故又稱為清道夫受體或誘騙受體[20-21]。趨化因子CXCL11 為γ干擾素誘導(dǎo)白細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞系產(chǎn)生[22]，CXCL11 與CXCR7N 端和一些細(xì)胞外環(huán)位置進(jìn)行初級(jí)結(jié)合，細(xì)胞外環(huán)殘基介導(dǎo)次級(jí)結(jié)合和β-arrestin 招募，通過(guò)β-arrestin 通路途徑，發(fā)揮調(diào)節(jié)趨化因子的趨化性、可用性和效應(yīng)性[23]。

有文獻(xiàn)報(bào)道，趨化因子CXCL11 在皮肌炎患者肌肉中的表達(dá)增加[6,24]。趨化因子CXCL11 在正常的唾液腺中幾乎不存在，在干燥綜合征的唾液腺病變中高表達(dá)，提示CXCL11 參與干燥綜合征的唾液腺免疫損傷病理過(guò)程[11,25]。另外有文獻(xiàn)報(bào)道，CXCL11 參與系統(tǒng)性硬化癥毛細(xì)血管病變，并與系統(tǒng)性硬化癥的嚴(yán)重程度正相關(guān)[9]。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中，CXCR7 在滑膜內(nèi)皮細(xì)胞和未受刺激的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)，參與血管生成，和促炎作用增強(qiáng)[10]。CXCL11 在骨關(guān)節(jié)炎滑膜中也表達(dá)上調(diào)，通過(guò)激活破骨細(xì)胞與脾細(xì)胞的分化，在骨關(guān)節(jié)炎中具有促炎作用[12]。

本研究結(jié)果顯示：SLE 各組患者外周血中CD3+CXCR7+T 細(xì)胞、CD19+CXCR7+B 細(xì)胞及CXCL11 表達(dá)高于健康對(duì)照組（P ＜0.01），提示CXCR7、CXCL11 在SLE 患者體內(nèi)高表達(dá)。中重度疾病活動(dòng)組三個(gè)指標(biāo)表達(dá)高于輕度活動(dòng)組和疾病無(wú)活動(dòng)組（P ＜0.05），且輕度活動(dòng)組高于疾病無(wú)活動(dòng)組（P ＜0.05）。另外，CD3+CXCR7+T 細(xì)胞、CD19+CXCR7+B 細(xì)胞、CXCL11 表達(dá)與SLEDAI 評(píng)分、dsDNA、紅細(xì)胞沉降率、CRP 呈正相關(guān)，與補(bǔ)體C3 呈負(fù)相關(guān)（P ＜0.01）。提示CXCR7、CXCL11參與疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程和病情活動(dòng)。本研究推測(cè)SLE患者體內(nèi)高表達(dá)的CXCL11 與CXCR7 結(jié)合，通過(guò)β-arrestin 途徑，發(fā)揮上述趨化因子清除、內(nèi)化、降解和胞吞作用，以及維持機(jī)體免疫自穩(wěn)作用[21-23]。

本研究初步了解趨化因子CXCL11 及其受體CXCR7 與SLE 發(fā)病、疾病活動(dòng)有關(guān)聯(lián)，CXCL11、CXCR7可能是SLE 發(fā)病過(guò)程中一種重要的免疫介質(zhì)，可作為判斷SLE 病情活動(dòng)檢測(cè)指標(biāo)，也可成為SLE 治療的新靶點(diǎn)或有針對(duì)性地進(jìn)行藥物干預(yù)的關(guān)鍵因子。另外CXCL11 與CXCR7 參與SLE 發(fā)病、疾病活動(dòng)過(guò)程的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，本課題組將進(jìn)一步探討和研究。