畬藥銅絲藤根化學成分的分離鑒定

張曉芹 袁宙新 倪京麗 王娜妮

1.浙江省麗水市中醫院藥劑科，浙江麗水 323000；2.浙江省中醫藥研究院，浙江杭州 310007

銅絲藤根，是畬族習用藥材，系海金沙科植物海金沙[Lygodium japonicum（Thunb.）Sw.]的干燥根及根莖[1]，具有清熱解毒、利濕消腫之功效，主治水濕腫滿、風濕痹痛[2-3]，是畬族民間治療骨關節炎的常用藥物[2-3]。銅絲藤根孢子的乙醇提取物可通過抑制核因子κB通路發揮抗炎作用[4-5]，水煎液對痛風性關節炎具有治療作用[6]。銅絲藤根中已報道化合物主要為黃酮類、甾體類、酚酸類、脂肪酸類及揮發類成分[7-8]，但化合物種類僅有20 余種，尚需要進一步探索。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Agilent 1100，美國安捷倫科技有限公司）；制備液相色譜儀（ZR，江蘇智潤科技有限公司）；核磁共振波譜儀（AVANCE-Ⅲ，德國Bruker 公司）；紅外光譜儀（FTIR-650，天津港東科技有限公司）。

1.2 試藥

甲醇、乙腈（色譜級和制備級，上海星可高純試劑有限公司）。銅絲藤根樣品采自浙江省麗水市，由浙江省麗水市中醫院林娜主任中藥師鑒定為海金沙科植物海金沙[Lygodium japonicum（Thunb.）Sw.]的地下根及根莖。

2 方法與結果

2.1 提取分離

10 kg 銅絲藤根藥材，80%乙醇回流提取3 次，每次2 h，浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，濃縮，得石油醚部位（51.17 g）、乙酸乙酯部位（237.75 g）、正丁醇部位（199.12 g）。乙酸乙酯部位經硅膠柱色譜Sephadex LH-20 層析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，薄層檢測，合并濃縮后得到的Fr.1～11 分別經制備型高效液相色譜、硅膠柱層析等方法純化得到化合物1～13，見圖1。

圖1 提取分離流程圖

2.2 結構鑒定

化合物1：黃色粉末。紅外吸收光譜法（infrared absorption spectrum，IR）（KBr，cm-1）：3369、2964、1660、1649、1577、1336、1266、1034、885、727。紫外可見光譜法（ultraviolet-visible spectrometr，UV）：204.2、266.7、346.6 nm。氫-1 核磁共振波譜法（1H nuclear magnetic resonance spectroscopy，1H-NMR）（400 MHz，DMSOd6）δ∶7.77（1H，s）、7.30（1H，s）、6.68（1H，s）；1.12（6H，d，J=6.8 Hz）、3.10（1H，m）、2.24（3H，s）。核磁共振碳譜（13C Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy，13C-NMR）（100 MHz，DMSO-d6）：低場區共有10 個C 信號，含2 個羰基信號185.1 和183.4。高場區有3 個C 信號。與文獻[9]比較，確定為6-羥基-2-異丙基-7-甲基-1，4-萘醌。

化合物2：白色粉末。IR（KBr，cm-1）：3329、3228、1645、1597、1533、1441、1296、1164、876、812、754、631。UV：205.3（max）、230.1、278.6、311.9 nm。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ∶7.33（1H，dd，J=7.6，2.0 Hz）、7.32（1H，s）、6.92（1H，d，J=7.6 Hz）、9.71（1H，s）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）顯示7 個C 信號，與文獻[10]比較，確定為原兒茶醛。

化合物3：無色油狀物。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ∶1.03（3H，s，H-12）、1.06（3H，s，H-11）、1.26（3H，d，J=6.4 Hz，H-10）、1.93（3H，s，H-13）、2.17（1H，d，J=16.8 Hz，H-2b）、2.49（1H，d，J=16.8 Hz，H-2a）、4.33（1H，m，H-9）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ∶42.4（s，C-1）、50.7（t，C-2）、201.2（s，C-3）、127.1（d，C-4）、136.9（d，C-7）、130.0（d，C-8）、68.6（d，C-9）、23.5（q，C-10）、23.8（q，C-11）、24.5（q，C-12）、19.6（q，C-13）。與文獻[11]比較，確定為吐葉醇。

化合物4：黃色粉末。IR（KBr，cm-1）：3464、1619、1601、1445、1281、1189、1155、1111、1012、966、804、565。UV：221.8、249.0、338.2（max）nm。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ∶2.36（3H，s，4-H）、6.57（1H，d，J=16.0 Hz，1-H）、7.54（1H，d，J=16.0 Hz，2-H）、7.10（1H，d，J=2.0 Hz，2’-H）、6.81（1H，d，J=8.4，2.1 Hz，5’-H）、7.01（1H，dd，J=8.4，2.1 Hz，6’-H）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ∶27.0（C-4）、115.3（C-2’）、116.6（C-5’）、123.5（C-2）、124.7（C-6’）、127.8（C-1’）、6.8（C-1）、146.9（C-3’）、150.0（C-4’）、201.5（C-3）。與文獻[12]比較，確定為（E）-3，4-二羥基苯亞甲基丙酮。

化合物5：白色粉末。IR（KBr，cm-1）：3386、1672、1602、1450、1312、1245、1215、1173、1012、978、831、557、515。UV：204.2、266.7 nm。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ∶7.46（2H，d，J=8.6 Hz）、6.82（2H，d，J=8.6 Hz）、7.61（1H，d，J=16.0 Hz）、6.30（2H，d，J=16.0 Hz）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ∶146.6（C-1）、115.7（C-2）、171.0（C-3）、127.3（C-1’）、116.8（C-2’，6’）、131.1（C-3’，5’）、161.2（C-4’）。與文獻[13]比較，確定為對羥基肉桂酸。

化合物6：白色粉末。IR（KBr，cm-1）：3367、1684、1589、1381、1302、1248、1207、769、694。UV：212.4、252.5 nm。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ∶：7.96（1H，d，J=2.0 Hz）、7.81（1H，dd，J=8.4，1.6 Hz）、6.96（1H，d，J=8.4 Hz）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ∶1 個羧基C 信號168.8；1 個苯環連氧（羥基）的C 信號158.8；3 個CH，分別為132.9、131.0 和117.1；2 個季碳信號為124.0 和121.7。與文獻[14]比較，確定為3-氯-4-羥基-苯甲酸。

化合物7：黃色粉末。IR（KBr，cm-1）：3421、1658、1604、1508、1450、1362、1207、1061、1012、970、833。UV：212.4、252.5 nm。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ∶8.09（2H，d，J=8.8 Hz）、6.91（2H，dd，J=8.8 Hz）；6.43（1H，d，J=2.0 Hz）、6.23（1H，d，J=2.0 Hz）；5.15（1H，d，J=7.2 Hz）、4.59（1H，brs）；1.14（3H，d，J=6.0 Hz）。13CNMR（100 MHz，CD3OD）δ∶179.4（C-4），166.1（C-7），163.0（C-5），161.5（C-4’），159.4（C-2），158.6（C-9），135.5（C-3），132.4（C-2’，6’），122.8（C-1’），116.2（C-3’，5’），105.7（C-10），100.0（C-6），94.9（C-8），glc（C-1～C-6）為104.6、75.8、78.2、72.3、77.2，68.6.rha（C-1～C-6）為102.4、71.5、72.1、73.9、69.7、17.9。與文獻[15]比較，確定為山柰酚-3-O-蕓香糖苷。

化合物8：白色粉末。IR（KBr，cm-1）：3211、1660、1591、1452、1284、1219、1163、839、820、696、602、505。UV：220.6、262.0 nm。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）：7.79（2H，d，J=8.6 Hz）、6.93（2H，d，J=8.6 Hz）、9.78（1H，s）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）共有5 個C 信號，與文獻[16]比較，確定為對羥基苯甲醛。

化合物9：白色粉末。1H-NMR（400 MHz，Pyr-d5）顯示三萜皂苷的特征信號。13C-NMR（100 MHz，Pyrd5）顯示共有1 組雙鍵C 信號140.7 ppm 和121.7 ppm；1 個糖上端基C 信號102.4 ppm，與78.4、78.3、77.9、75.1、62.4 ppm，共同構成葡萄糖的骨架C 信號。與文獻[17]比較，確定為胡蘿卜苷。

化合物10：黃色粉末。UV 譜顯示：232.4、207.2 nm。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）顯 示：7.51（2H，d，J=7.2 Hz）、6.83（2H，d，J=7.2 Hz）；7.60（1H，d，J=16.0 Hz）、6.63（1H，d，J=16.0 Hz）；2.36（3H，s）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）顯示有1 個羰基信號201.5 ppm，1 個甲基信號27.1 ppm，苯環季碳信號161.6 ppm，一組對取代苯環的CH 質子信號131.6 ppm 和116.9 ppm。與化合物4 的核磁圖譜比較，確定為對羥基亞芐基丙酮。

化合物11：白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ ∶6.81（1H，d，J=7.4 Hz）、7.44（1H，s）、7.43（1H，d，J=7.4 Hz）、3.84（3H，s）。3C-NMR（100 MHz，CD3OD）低場區顯示共有7 個C 信號，含有酯羰基C 信號、苯環信號、季碳信號。與文獻[18]比較，確定為3，4-二羥基苯甲酸甲酯。

化合物12：白色粉末。IR（KBr，cm-1）：3462、3343、1696、1619、1535、1437、1372、1260、1198、1051、1001、768。UV：214.7、272.7 nm。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）：7.06（2H，s）、3.83（3H，s）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）低場區顯示有5 個C 信號，高場區1 個甲氧基C 信號52.3 ppm。確定為沒食子酸甲酯。

化合物13：黃色粉末。IR（KBr，cm-1）：3284、1667、1608、1550、1454、1412、1350、1251、1147、962、812。UV：219.5、249.0、369.1 nm。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ∶7.29（1H，d，J=16.0 Hz）和6.58（1H，d，J=16.0 Hz）；6.77（1H，d，J=8.0 Hz）、6.94（1H，dd，J=8.0，1.6 Hz）和7.02（1H，d，J=1.6 Hz）；5.56（1H，d，J=1.6 Hz）和6.14（1H，d，J=1.6 Hz）；3.87（3H，s）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）結合DEPT 顯示：該化合物含有14 個C 信號，其中7 個CH（137.0、121.7、116.4、116.3、114.6、101.1、88.3），1 個OCH3（56.6）。與文獻[19]比較，確定為4-甲氧基-6-（3’，4’-二羥基苯乙烯基）-2-吡喃。

13 種化合物的化學結構式見圖2。

圖2 銅絲藤根化學成分圖

3 討論

本研究從銅絲藤根中分離得到13 個化合物，其中酚類9 種、醌類2 種、黃酮類1 種、甾醇類1 種。化合物2～8、10～13 為首次從該植物中分離得到，也是首次從海金沙屬中分離得到。

3-氯-4-羥基-苯甲酸（6）是一個較為少見的鹵素取代化合物[20-21]，其生理活性鮮見報道。4-甲氧基-6-（3’，4’-二羥基苯乙烯基）-2-吡喃（13）與抗癌活性顯著的hispidin 化合物具有高度的結構相似性[22-25]。原兒茶醛能通過抑制絲裂原活化蛋白激酶信號通路降低腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-6、白細胞介素-1β 等炎癥因子的水平，發揮抗骨關節作用。（E）-3，4-二羥基苯亞甲基丙酮（4）、對羥基亞芐基丙酮（10）作為苯亞甲基丙酮類化合物可以作為潛在的抗骨質疏松類藥物。本文建立了銅絲藤根成分的分離工藝，可為以上化合物的后續研究提供借鑒。