老年帕金森病患者血清EGF、CysC、Aβ1～42表達變化及其與疾病分期、認知障礙的相關性

王小玲 張霞 程秋鳳 王磊

(1聊城市人民醫院腦科醫院神經內科，山東 聊城 250000；2聊城市第三人民醫院神經內科)

帕金森病在老年群體中具有較高發病率，且部分患者存在一定程度認知損害，若患者未及時得到有效干預，則隨病情進展，多數患者可進展為帕金森病癡呆〔1～3〕。隨臨床研究深入發現，表皮生長因子(EGF)可促進細胞有絲分裂，并參與神經細胞等諸多細胞生長與增殖、分化，且對神經干細胞發育及增殖等具有調控作用，還可促使受損神經功能恢復〔4,5〕。β淀粉樣蛋白(Aβ)1～42近些年已成為神經系統退變性疾病生物學標志物研究熱點，其自身可造成多巴胺(DA)神經元進行性變性，改變DA能神經元形態，沉積于腦部皮層引發氧化應激反應、炎性級聯反應，參與帕金森病發病及進展〔6～8〕。而胱抑素(Cys)C為反映腎功能的重要指標，新近研究發現其和諸多神經系統病變具有關聯性，能調節半胱氨酸蛋白酶活性，參與炎性反應，而神經免疫炎癥為帕金森病重要發病機制，故認為其與帕金森病也具有一定關聯性〔9～11〕。本研究探討老年帕金森病患者血清EGF、CysC、Aβ1～42表達變化及其與疾病分期、認知障礙的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 2017年2月至2019年12月聊城市人民醫院腦科醫院帕金森病患者116例設為研究組，另選取同期健康體檢者116例設為對照組。研究組男67例，女49例；年齡60～78歲，平均(69.03±4.30)歲；疾病分期：早期54例〔Hoehn-Yahr(H-Y)分級<3級〕，中晚期62例(H-Y分級≥3級)；認知狀況：伴認知障礙73例〔蒙特利爾認知評估(MoCA)量表評分<26分〕，無認知障礙43例(MoCA評分≥26分)；受教育程度：小學及以下26例，中學56例，大專及以上34例。對照組男63例，女53例；年齡61～80歲，平均(70.39±4.61)歲；受教育程度：小學及以下23例，中學57例，大專及以上36例。兩組一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，本研究經醫院倫理委員會審批通過。納入標準：(1)研究組符合《中國帕金森病治療指南(第三版)》〔12〕中帕金森病診療標準；(2)對照組MoCA評分≥26分；(3)知曉本研究，簽署同意書；(4)研究組既往未采取帕金森病相關治療藥物。排除標準：(1)合并其他神經系統病變；(2)合并全身性感染性病變；(3)存在進行性核上性麻痹、皮質基底節變性等帕金森病疊加綜合征；(4)DA受體阻滯劑所致帕金森病綜合征及血管性帕金森病綜合征；(5)其他可造成認知障礙的疾病，包括頭部外傷、藥物不良反應、嚴重抑郁等。

1.2方法 入院后抽取所有受檢者外周靜脈血4 ml，離心取上清液(3 000 r/min，10 min)，離心半徑為4.5 cm，置于-20℃環境中儲存待檢，以美國Bio-RAD公司Bio-RAD550型酶標儀經酶聯免疫吸附法測定EGF、CysC、Aβ1～42水平；試劑盒購于武漢博士德生物工程有限公司。

1.3觀察指標 (1)統計研究組與對照組血清EGF、CysC、Aβ1～42水平。(2)統計分析血清EGF、CysC、Aβ1～42水平與帕金森病間關聯性。(3)統計分析研究組不同疾病分期患者血清EGF、CysC、Aβ1～42水平。(4)統計分析研究組不同認知障礙程度患者血清EGF、CysC、Aβ1～42水平。(5)統計分析血清EGF、CysC、Aβ1～42水平與疾病分期、認知障礙間關聯性。(6)統計分析血清EGF、CysC、Aβ1～42水平對帕金森病單獨及聯合診斷效能。

1.4統計學方法 采用SPSS22.0軟件進行t檢驗、χ2檢驗、Spearman相關分析，受試者工作特征(ROC)曲線探討血清各指標單一與聯合檢測對帕金森病診斷效能。

2 結 果

2.1兩組血清指標水平 研究組血清Aβ1～42、EGF水平明顯低于對照組，CysC水平明顯高于對照組(均P<0.001)。見表1。

表1 兩組血清指標水平比較

2.2血清指標與帕金森病關聯性 以帕金森病作為因變量，將Aβ1～42、EGF、CysC作為自變量，納入Logistic回歸分析模型，結果顯示，Aβ1～42、EGF、CysC與帕金森病具有顯著關聯性(P<0.001)。見表2。

表2 帕金森病影響因素的Logistic回歸分析

2.3不同疾病分期患者血清指標水平比較 中晚期患者血清Aβ1～42、EGF水平明顯低于早期患者，CysC水平明顯高于早期患者(P<0.01，P<0.001)。見表3。

表3 不同疾病分期患者血清指標水平比較

2.4不同認知障礙程度患者血清指標水平 伴認知障礙患者血清Aβ1～42、EGF水平明顯低于無認知障礙患者，CysC水平明顯高于無認知障礙患者(均P<0.001)。見表4。

表4 不同認知障礙程度患者血清指標水平比較

2.5血清指標與疾病分期、認知障礙間關聯性 血清Aβ1～42、EGF水平與疾病分期、認知障礙呈負相關，CysC水平與疾病分期、認知障礙呈正相關(均P<0.001)。見表5。

表5 血清指標與疾病分期、認知障礙間關聯性分析

2.6血清指標單獨及聯合診斷效能 各指標聯合診斷AUC為0.892，95%CI為0.845～0.929，當Aβ1～42截斷值≤1.01 ng/ml、EGF≤886.17 ng/L、CysC>0.98 mg/L，其聯合診斷敏感度為86.21%、特異度為81.90%，見表6、圖1。

表6 血清指標單獨及聯合診斷帕金森病效能

圖1 單獨及聯合診斷帕金森病ROC曲線

3 討 論

帕金森病具有較高發病率，其致病因素復雜，與遺傳、環境及年齡等均具有密切關聯性，且細胞凋亡、鈣離子超載、興奮性氨基酸毒性、免疫異常、炎癥反應、氧化應激、線粒體功能異常等均參與了疾病發生及進展〔13～15〕。同時，帕金森病患者隨病程延長及臨床分期增高，通常會發生不同程度認知障礙，對其日常生活構成影響。

帕金森病患者DA神經元變性丟失，額葉和基底核間皮質-皮質下DA環路顯著受損，紋狀體DA耗竭，可能為帕金森病患者發生認知功能障礙的重要病理基礎〔16,17〕。正常生理狀態下，腦內Aβ生成、降解維持動態平衡狀態，血腦屏障中Aβ可利用外向轉運及內向轉運維持外周血、腦部Aβ含量平衡〔18〕。相關研究指出，若編碼APP基因發生突變及其他因素造成β-分泌酶活性顯著增高，則APP易被γ-分泌酶及β-分泌酶一同切割形成Aβ，主要包括Aβ1～42與Aβ1～40兩種形式〔19,20〕。Aβ1～42亞型含量雖少于Aβ1～40，但聚集性和神經毒性均更強，其神經毒性作用主要參與細胞凋亡、細胞中鈣穩態失衡、氧自由基代謝等。α-突觸核蛋白(Syn)和帕金森病間關聯性研究較早，其病理性聚集、錯誤折疊可形成路易小體，最終造成細胞凋亡。而Cheng等〔21〕研究表明，α-Syn異常聚集可造成突觸損傷與功能異常，而可溶性Aβ較纖維狀Aβ引發上述病理變化的風險更大，且Aβ1～42和α-Syn聚集、α-Syn過磷酸化關系密切。Clinton等〔22〕協同作用加劇突觸損傷，致使疾病進展性加劇。另有研究證實，Aβ1～42和α-Syn能協同作用于神經元，致使細胞突觸數目與功能降低，且相較于單純阿爾茨海默病患者，同時具備Aβ1～42和α-Syn病理改變的患者，認知功能異常進展更快〔23,24〕。本研究結果可能是因Aβ1～42造成血腦屏障滲透性提升，緊密連接蛋白受損，上調高級糖基化終產物受體作用，使腦屏障中Aβ1～42內向轉運顯著多于外向轉運，腦中Aβ1～42水平明顯增高，發生聚集沉積，故外周血內Aβ1～42水平減少。

CysC屬半胱氨酸蛋白酶抑制劑，以恒定速度在所有有核細胞中表達，其和諸多神經系統病變均具有關聯性，其能通過影響半胱氨酸蛋白酶活性，參與細胞外基質生成及降解，參與炎性反應，誘導神經細胞再生，且其還可上調α-Syn表達，最終造成神經細胞凋亡〔25,26〕。本研究結果產生的原因可能在于：腦組織受損傷時，對應組織蛋白酶水平增高，CysC活化，表達增加，保護機體細胞。同時，CysC對認知功能具備一定保護作用，其可結合于Aβ1～42及Aβ1～40，對淀粉樣斑塊沉積予以抑制，減少蛋白組酶，阻止Aβ生成和聚集〔27,28〕。EGF不僅具備強力細胞有絲分裂原，還可促進神經系統生長發育，并能于神經元氧化損傷中，對中腦DA神經元產生營養及保護作用。Chen-Plotkin等〔29〕研究證實，血清EGF含量降低和帕金森病患者發生認知功能障礙具有密切關聯性，其在預測帕金森病患者認知功能轉化中具有潛在優勢。本研究結果提示EGF表達情況也與帕金森病發病及病情程度等具有相關性。此外，本研究還顯示聯合診斷效能更高，故推測臨床實際可聯合上述指標對帕金森病予以綜合診斷，確保實現早發現、早治療。但本研究存在樣本選取量少等弊端，故其具體效力仍需進一步探究證實。