海南省萬寧市豬流行性腹瀉血清學調查分析

黃 芳，張 艷，劉海隆

（1.海南省萬寧市動物疫病預防控制中心，海南 萬寧 571500；2.海南省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，海南 海口 571100）

豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起豬的一種高度接觸性腸道傳染病，其主要表現為食欲下降、水樣腹瀉和嘔吐，最終導致脫水和高死亡率，各種年齡階段的豬均易感染，尤其是哺乳仔豬、斷奶仔豬和肥育豬，感染發(fā)病率高達100%。在20世紀七八十年代，歐洲廣泛存在PEDV感染。我國于1980年首次分離到PEDV，之后多地均有PED發(fā)生的報道，該病自2010年發(fā)生較大變異，全國大部分地區(qū)的豬場開始大規(guī)模暴發(fā)PED，對我國養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經濟損失[1]。2022年1月，海南萬寧市某養(yǎng)豬場出現仔豬腹瀉、嘔吐、消瘦、脫水等疑似PED病例，患豬體溫正常，長時間使用抗生素治療無效，后期陸續(xù)出現死亡現象，肥育豬個別出現水樣腹瀉，抗生素拌料連續(xù)飼喂1周后病情逐漸緩和。筆者上門實地考察，剖檢病死豬，發(fā)現病理變化主要見于小腸，小腸內充滿黃色液體，腸壁變薄，腫脹，腸系膜充血，腸系膜淋巴結腫大。采集病死豬空腸至回腸腸道內容物，送至海南省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所進行RT-PCR病原檢測，最終確診PEDV感染。為弄清萬寧市周邊該病病原分布及流行情況，筆者對萬寧市中、小規(guī)模豬場及部分養(yǎng)殖戶進行了血清學調查分析，以揭示PEDV在該地區(qū)的流行狀況，有助于該市對PED的預防和控制做出正確決策。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣品來源 2022年1—3月，在萬寧市下轄13個鎮(zhèn)區(qū)及興隆華僑農場養(yǎng)殖戶及養(yǎng)殖場采取現場調查、填寫問卷的形式，分不同周齡、不同品種的豬采集血液樣本468份，逐一編號，室溫下自然凝固10～20 min，離心10 min左右（3 000 r/min）分離血清，每份血清不少于2 mL，置于-20 ℃冰箱備檢。

1.1.2 試劑 豬流行性腹瀉病毒檢測試劑盒，江蘇依萊薩生物技術有限公司生產。

1.2 試驗方法

按照試劑盒說明書，待檢樣品用樣品稀釋液做40倍稀釋，陰性對照、陽性對照不稀釋。濃縮洗滌液恢復室溫且完全溶解后用蒸餾水做20倍稀釋為工作洗滌液。試劑盒在使用前平衡30 min至室溫。取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔。空白對照孔加樣品稀釋液100 μL，陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照液100 μL，樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100 μL。混勻，蓋好蓋板膜，37 ℃水浴避光反應30 min。甩去孔內液體，每孔加350 μL工作洗滌液，靜置30 s后棄去，重復洗滌5次，最后一次拍干。每孔加酶標記物100 μL，空白孔除外。蓋好蓋板膜，置37 ℃水浴避光反應30 min。重復洗滌5次。每孔依次加底物液A、底物液B各50 μL，混勻，蓋好蓋板膜，37 ℃水浴避光反應10 min。每孔加終止液50 μL，于450 nm測定各孔吸光值。

測定結果判定，陽性對照孔平均OD值≥0.6；陰性對照孔平均OD值必須≤0.3；閾值（SP）計算：SP值=（樣品孔OD值-陰性對照孔OD值）/（陽性對照孔OD值-陰性對照孔OD值），SP值≥0.2，結果判定為陽性；SP值＜0.2，結果判定為陰性。

2 結果

在參與調查的26個養(yǎng)豬場，未接種過豬流行性腹瀉相關疫苗及生物制品，4個豬場在樣品收集期間仔豬出現持續(xù)腹瀉的情況；其他22個養(yǎng)豬場在采集血樣期間均未出現腹瀉癥狀。

由表1可見，從萬寧各鄉(xiāng)鎮(zhèn)采集的樣品PEDV抗體總陽性率為39.10%，場陽性率為50%。北部鄉(xiāng)鎮(zhèn)（包括三更羅鎮(zhèn)、北大鎮(zhèn)、龍滾鎮(zhèn)、山根鎮(zhèn)、和樂鎮(zhèn)、后安鎮(zhèn)、大茂鎮(zhèn)）陽性率為41.48%，南部鄉(xiāng)鎮(zhèn)及農場（包括禮紀鎮(zhèn)、長豐鎮(zhèn)、萬城鎮(zhèn)、南橋鎮(zhèn)、東澳鎮(zhèn)、興隆華僑農場）陽性率為35.86%，北部地區(qū)稍高于南部地區(qū)。收集的血清樣品分為3個日齡組：5周齡、10周齡和15周齡左右，PEDV抗體血清陽性率分別為46.15% 、44.23%、26.92%。外來豬種與地方豬種PEDV抗體血清陽性率分別為36.27%和44.44% ，場陽性率分別為41.18%和66.66%。

表1 PEDV抗體檢測結果

3 分析與討論

海南萬寧市共有13個鎮(zhèn)（區(qū)），每個鎮(zhèn)（區(qū)）均有傳統的分散飼養(yǎng)、戶營為主的養(yǎng)殖模式養(yǎng)豬，散養(yǎng)戶主要以陸川豬、定安黑豬、屯昌黑豬為主，規(guī)模場以大白、長白豬為主。本次對未接種PEDV疫苗的養(yǎng)豬場進行了PEDV感染的血清學調查，樣品總體陽性率為39.10%，50%養(yǎng)殖場的PEDV抗體血清陽性屬于自然感染。5周齡、10周齡和15周齡左右的豬血清陽性率依次遞減，北部地區(qū)高于南部地區(qū)，地方豬明顯高于外來豬種，這可能與當地天氣、豬場飼養(yǎng)管理水平差異有關。本次調查還發(fā)現并不是所有的陽性感染豬場出現臨床癥狀，說明存在極大的持續(xù)隱性感染風險。本次采用ELISA（酶聯免疫吸附試驗）檢測PEDV抗體，具有成本效益高、簡單、快速、準確的特點，還可以同時對已經接種商業(yè)PEDV疫苗的豬場做出免疫效果評價。

通過免疫接種PEDV、TGEV（傳染性胃腸炎病毒）和PRoV（輪狀病毒）二聯疫苗或三聯疫苗來預防豬病毒性腹瀉疾病，可以取得一定的效果[2]。本次調查發(fā)現常規(guī)接種上述疫苗的養(yǎng)殖場并不多，已經接種PED疫苗的養(yǎng)殖場反映仍有仔豬腹瀉情況的發(fā)生，可能與PED流行毒株不同有關，提醒當地獸醫(yī)主管部門及養(yǎng)殖場要制定合理的疾病監(jiān)測方案和防控策略。