2018—2020年新疆地區(qū)保育豬主要病毒性傳染病的抗體檢測(cè)與分析

常軍帥，謝鈁得，謝 靜，屈勇剛，梁 晏，李 娜，黨瑞瑩，孫瓊飛，邱國(guó)斌

（1.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆 石河子 832003；2.動(dòng)物疾病防控兵團(tuán)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 石河子 832003；3.第四師畜牧獸醫(yī)站，新疆 可克達(dá)拉 831304）

保育豬又稱斷奶仔豬，是指從仔豬斷奶開(kāi)始算起，到70日齡左右的豬群[1]。保育豬是成為后備豬、肥育豬等豬群的必經(jīng)階段，該階段豬群的生長(zhǎng)速度、健康狀況及存活率直接影響著養(yǎng)殖帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)效益。但由于仔豬斷奶后發(fā)育未完善，在各種應(yīng)激（斷奶應(yīng)激、換料應(yīng)激、合群應(yīng)激、疫苗應(yīng)激等）下極易出現(xiàn)腹瀉、皮毛粗亂、采食量下降，同時(shí)母源抗體也在衰減，保育豬缺乏對(duì)各種疾病抵抗力[2]。病毒性傳染病，對(duì)保育豬健康存在巨大威脅：豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒（PCV）引起的一種免疫抑制性疾病，其中2型（PCV2）危害最為嚴(yán)重，保育豬患病后，在斷奶1周左右可出現(xiàn)斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS），主要表現(xiàn)為精神沉郁、皮毛粗亂、消瘦，剖檢可見(jiàn)多器官衰竭、腹股溝淋巴結(jié)腫大，耐過(guò)豬則變?yōu)榻┴i[3]；豬偽狂犬病（PR）是由偽狂犬病病毒（PRV）引起的，患病后保育豬出現(xiàn)體溫升高、奇癢、腹瀉、四肢劃水等神經(jīng)癥狀，日齡越小死亡率越高[4]；豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）屬于動(dòng)脈炎病毒科、動(dòng)脈炎病毒屬的單股正鏈RNA病毒，保育豬患病后呼吸困難、皮膚發(fā)紺、發(fā)燒、嗜睡，保育豬感染后比16～24周齡的成年豬患病毒血癥的持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)[5-6]；豬瘟（CSF）在我國(guó)被列為一類動(dòng)物疫病，隨著疫苗普及，該病已轉(zhuǎn)為溫和型癥狀和病理變化，主要表現(xiàn)為在耳尖、蹄趾末端、尾尖有壞死病變，病豬逐漸衰竭而亡，死亡率可達(dá)30%[7]。

疫苗免疫是預(yù)防上述病毒性傳染病最有效的方法之一，注射疫苗后，動(dòng)物會(huì)在一段時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生穩(wěn)定的抗體水平，可有效抵御病毒入侵。對(duì)于免疫效果需及時(shí)評(píng)價(jià)，根據(jù)評(píng)價(jià)結(jié)果，調(diào)整免疫程序，才能更有利于豬群的健康。本試驗(yàn)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），對(duì)2018—2020年在新疆地區(qū)采集的304份保育豬血清進(jìn)行抗體檢測(cè)，以期為該地區(qū)的免疫工作提供幫助。

1 材料

1.1 樣品

2018年1月至2020年12月期間從新疆石河子市、巴音郭楞蒙古自治州、伊犁、塔城地區(qū)、奎屯市、阿克蘇市，隨機(jī)采集304份血清樣品，送至石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院傳染病實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。

1.2 材料和儀器

豬瘟病毒（CSFV）ELISA抗體檢測(cè)試劑盒、豬偽狂犬病病毒gB（PRV-gB）ELISA抗體檢測(cè)試劑盒、藍(lán)耳病病毒（PRRSV）ELISA抗體檢測(cè)試劑盒、豬偽狂犬病病毒gE（PRV-gE）ELISA檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司；豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司；獸用一次性采血器5 mL為美康實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品；自動(dòng)酶標(biāo)儀、微量移液器購(gòu)自賽默飛世爾科技公司。

2 方法

2.1 樣品處理

將保育豬固定好后，在前腔靜脈窩45°進(jìn)針，采集6 mL血液，室溫下靜置40 min，將血清收集后，放于4 ℃保存（8 d以內(nèi)使用）。

2.2 ELISA檢測(cè)方法

根據(jù)不同檢測(cè)項(xiàng)目的說(shuō)明書，進(jìn)行PCV2、PRV-gB、PRV-gE、PRRSV、CSFV的抗體檢測(cè)。注意各個(gè)檢測(cè)過(guò)程中的溫度及避光要求。

2.3 結(jié)果判定

PCV2：在酶標(biāo)儀內(nèi)使用OD450進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)成立的條件是陰性對(duì)照均值≤0.15，陽(yáng)性對(duì)照均值≥0.60。臨界值=陽(yáng)性對(duì)照OD450均值×1/4。被檢樣品值＜臨界值，判定為陰性；被檢樣品值≥臨界值，則判定為陽(yáng)性。

PRV-gB、PRV-gE：在酶標(biāo)儀內(nèi)使用OD650進(jìn)行測(cè)定。當(dāng)陰性均值-陽(yáng)性均值≥0.3時(shí)，試驗(yàn)成立。通過(guò)計(jì)算S/N=樣品值/陰性值，進(jìn)行結(jié)果判定。當(dāng)S/N＞0.70時(shí)，為陰性；當(dāng)0.60＜S/N≤0.70時(shí)，為可疑；當(dāng)S/N≤0.60時(shí)，為陽(yáng)性。

PRRSV：在酶標(biāo)儀內(nèi)使用OD650進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)成立后，計(jì)算S/P值。其中S=樣品值-陰性對(duì)照均值，P=陽(yáng)性對(duì)照均值-陰性對(duì)照均值。S/P≥0.40為陽(yáng)性，S/P＜0.40判為陰性。

CSFV：在酶標(biāo)儀內(nèi)使用OD450進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)判定成立后，計(jì)算阻斷率。阻斷率（%）=（陰性對(duì)照均值-樣品均值）/陰性對(duì)照均值。當(dāng)阻斷率≤30%時(shí)，為陰性；當(dāng)30%＜阻斷率＜40%時(shí)，為可疑；當(dāng)阻斷率≥40%時(shí)，為陽(yáng)性。

當(dāng)出現(xiàn)可疑時(shí)，需再次進(jìn)行檢測(cè)。再次檢測(cè)時(shí)不符合陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)一安排陰性處理（PRV-gE相反）。

2.4 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS 20.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算總體平均數(shù)。

3 結(jié)果

3.1 PCV2抗體檢測(cè)結(jié)果

由表1可知，在2018—2020年中，新疆地區(qū)保育豬整體PCV2抗體陽(yáng)性率為41.96%（60/143），其中2018年、2019年、2020年的PCV2抗體陽(yáng)性率分別是63.33%（19/30）、26.56%（17/64）、48.98%（24/49）。在平均OD450值中，2019年的最低，為0.62；2018年最高，為0.73。

表1 不同年份的保育豬PCV2抗體檢測(cè)結(jié)果

3.2 PRV-gB抗體檢測(cè)結(jié)果

在2018—2020年中，新疆地區(qū)保育豬整體PRV-gB抗體陽(yáng)性率為84.03%（100/119），其中2018年、2019年、2020年的PRV-gB抗體陽(yáng)性率分別是92.00%（46/50）、75.00%（33/44）、84.00%（21/25）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同年份的保育豬PRV-gB抗體檢測(cè)結(jié)果

3.3 PRV-gE抗體檢測(cè)結(jié)果

在2018—2020年中，新疆地區(qū)保育豬整體PRV-gE抗體陽(yáng)性率為28.21%（44/156），其中2018年、2019年、2020年的PRV-gE抗體陽(yáng)性率分別是12.00%（6/50）、20.45%（9/44）、46.77%（29/62）。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同年份的保育豬PRV-gE抗體檢測(cè)結(jié)果

3.4 PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果

由表4可知，在2018—2020年中，新疆地區(qū)保育豬整體PRRSV抗體陽(yáng)性率為85.20%（259/304），其中2018年、2019年、2020年的PRRSV抗體陽(yáng)性率分別是72.50%（29/40）、86.40%（108/125）、87.77%（122/139）。在平均S/P值中，2018年的最低，為1.17；2019年最高，為1.91。

表4 不同年份的保育豬PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果

3.5 CSFV抗體檢測(cè)結(jié)果

在2018—2020年中，新疆地區(qū)保育豬整體CSFV抗體陽(yáng)性率為65.22%（135/207），其中2018年、2019年、2020年的CSFV抗體陽(yáng)性率分別是60.00%（45/75）、65.31%（32/49）、69.88%（58/83）。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 不同年份的保育豬CSFV抗體檢測(cè)結(jié)果

4 討論與分析

疫苗免疫是生產(chǎn)中預(yù)防病毒性傳染病必不可少的環(huán)節(jié)，注射疫苗可有效減少保育豬的死亡率和患病率，有效保證了養(yǎng)豬健康生產(chǎn)。但由于疫苗質(zhì)量不合格、免疫途徑不對(duì)、劑量太少、免疫程序不合理、技術(shù)人員操作不規(guī)范、免疫抑制性疾病的存在等因素，導(dǎo)致豬群免疫失敗，耗時(shí)耗力，浪費(fèi)錢財(cái)。在對(duì)2018—2020年新疆地區(qū)的保育豬進(jìn)行PCV2、PRV-gB、PRV-gE、PRRSV、CSFV的抗體檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，PCV2（41.96%）、CSFV（65.22%）的抗體陽(yáng)性率均低于國(guó)家規(guī)定的70%[8]。當(dāng)豬場(chǎng)存在PCV2后，豬易發(fā)流行性腹瀉、細(xì)小病毒病、PRRS[9]。楊滲等[10]檢測(cè)得出江蘇省淮安市的保育豬PCV2抗體陽(yáng)性率為46.32%（44/95）；程淑琴等[11]檢測(cè)得出河北省部分地區(qū)的保育豬PCV2抗體陽(yáng)性率為93.94%（62/66），均高于本次檢測(cè)結(jié)果，造成這種結(jié)果的原因可能是各地免疫程序及飼養(yǎng)管理技術(shù)不同等。可通過(guò)檢測(cè)哺乳仔豬的母源抗體水平，選擇合適時(shí)間免疫PCV2疫苗，不給病毒可乘之機(jī)。

為防止哺乳階段免疫次數(shù)過(guò)多，出現(xiàn)相互干擾情況，針對(duì)CSFV抗體陽(yáng)性率低的情況，可在母豬產(chǎn)前加強(qiáng)免疫一次豬瘟疫苗，通過(guò)提高母源抗體的水平來(lái)保護(hù)保育豬免受CSFV感染，也可在轉(zhuǎn)群應(yīng)激過(guò)后及時(shí)進(jìn)行疫苗免疫。PRV-gE抗體出現(xiàn)陽(yáng)性率則提示保育豬群存在偽狂犬病陽(yáng)性病例，由于PRV可垂直傳播，建議對(duì)種豬群進(jìn)行PRV-gE抗體檢測(cè)，對(duì)抗體陽(yáng)性豬只，再次進(jìn)行PCR抗原檢測(cè)，及時(shí)淘汰陽(yáng)性豬才能保證豬場(chǎng)的健康生產(chǎn)[12]。PRRSV的抗體陽(yáng)性率為85.20%（259/304），是本次檢測(cè)中最高值，且高于國(guó)家規(guī)定的70%，繼續(xù)保持即可。

除疫苗免疫外，保育豬的健康也離不開(kāi)好的飼養(yǎng)環(huán)境、優(yōu)質(zhì)的飲水和飼料。在轉(zhuǎn)入保育圈舍前，需對(duì)保育舍進(jìn)行全面徹底消毒，保育床最好離地50 cm，方便糞便尿液漏下，減少有毒有害氣體對(duì)仔豬呼吸系統(tǒng)的危害。根據(jù)斷奶仔豬的體重、健康程度分圈舍，減少爭(zhēng)斗。除供給高營(yíng)養(yǎng)飼料外，還可在飼糧中添加中草藥及益生菌，來(lái)提高斷奶仔豬的抵抗力。只有全方位管理到位，才能保證保育豬達(dá)到最佳生長(zhǎng)性能。