EB病毒感染患兒T淋巴細胞亞群水平變化及臨床意義分析

趙侗玲

遼寧省鞍山市婦兒醫(yī)院檢驗科,遼寧鞍山 114000

EB病毒是一種常見的DNA病毒，屬于皰疹病毒家族成員之一，較易感染兒童，尤其是男童，可引發(fā)發(fā)熱、皮疹、淋巴結(jié)腫大等癥狀或體征[1]。EB病毒感染主要與患兒免疫力下降有關(guān)，因此臨床可通過深入分析與EB病毒感染患兒病理變化相關(guān)的生物學指標，進而獲得早期明確的診斷結(jié)果，以利于EB病毒感染疾病的防治。在臨床中，可敏感反映機體細胞免疫功能狀態(tài)的常見指標有外周血T淋巴細胞亞群水平、白細胞計數(shù)(WBC)、單核細胞等。其中T淋巴細胞亞群主要包括CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞等，其具有高度異質(zhì)性的特點，臨床常用于判斷自身免疫性疾病、免疫缺陷癥等[2]；白細胞具有防護作用，臨床常用于判斷機體的炎癥狀態(tài)[3]；單核細胞是機體血液中體積較大的血細胞，也是組成機體防御系統(tǒng)的重要部分，臨床常用于判斷機體的免疫功能[4]。本研究旨在探討EB病毒感染患兒T淋巴細胞亞群的水平變化及臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇500例2019年10-12月本院收治的EB病毒感染患兒作為觀察組，并選取同期體檢健康兒童500例作為對照組，整理并分析其臨床資料。對照組研究對象年齡1～10歲，平均(6.31±1.23)歲；男340例，女160例。觀察組患兒年齡1～11歲，平均(6.32±1.17)歲；男345例，女155例；EB病毒載量：DNA≥1×105copy/mL 250例，DNA<1×105copy/mL 250例。兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。觀察組納入標準：患兒符合《EB病毒感染實驗室診斷及臨床應(yīng)用專家共識》[5]中的診斷標準，且經(jīng)過實驗室檢查確診；臨床資料齊全；伴有急性發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大等癥狀或體征；淋巴細胞、異形淋巴細胞比例增加。觀察組排除標準：合并有其他惡性腫瘤者；有血液系統(tǒng)疾病者；伴免疫功能障礙者；嚴重肝、腎功能異常者；有其他感染性疾病者等。本研究經(jīng)醫(yī)學倫理委員會審核批準，所有研究對象家屬均知情同意。

1.2方法 于觀察組患兒入院當天進行EB病毒DNA獲取：將50 μL強陽性、臨界陽性、陰性質(zhì)控品放置于離心管中，并加入DNA提取液(50 μL)，使其充分混勻，然后將其置于金屬浴恒溫(100 ℃)加熱(10 min)，并使用美國貝克曼庫爾特公司提供的超速離心機(離心半徑：10 cm；離心速度：12 000 r/min；離心時間：5 min)進行離心，作為樣品1備用。在含有淋巴細胞分離液(1 mL)的試管中加入全血(1 mL)，并使用超速離心機(離心半徑：10 cm；離心速度：2 000 r/min；離心時間：20 min)進行離心，取白細胞層(中間云霧狀細胞層)，再將其(1.5 mL)置于離心管中(離心半徑：10 cm；離心速度：12 000 r/min；離心時間：5 min)進行離心，取下沉淀，然后在其中加入制備好的DNA提取液(50 μL)，并充分混勻，恒溫(100 ℃)下處理(10 min)后，使用超速離心機(離心半徑：10 cm；離心速度：12 000 r/min；離心時間：20 min)進行離心，以備用。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)：在放入反應(yīng)液的PCR管中，依據(jù)病毒含量由無到有、由少至多的順序加入準備好的樣品1上清液(2 μL)，樣品有定量參考品、陰性質(zhì)控品、標本、臨界陽性質(zhì)控品、強陽性質(zhì)控品，然后將其放入PCR檢測儀器(中山大學達安基因股份有限公司，型號：ABI7000)的樣品孔內(nèi)，參數(shù)設(shè)置：2 min 93 ℃；45 s 93 ℃；60 s 55 ℃共循環(huán)10次。30 s 93 ℃；45 s 55 ℃共循環(huán)30次。最后檢測EB病毒水平。T淋巴細胞亞群水平檢測：制備混合制劑，取單克隆抗體(CD127-PE、CD4-PC5、CD4-FITC/CD8-FE/CD3-PC、CD4-PC5)及CD4-PC5 各5 μL，加入EDTA-K2抗凝外周血(100 μL)，進行溫育(室溫)避光(20 min)，加入溶血素(2 mL)，避光溫育(常溫)10 min，磷酸鹽緩沖液洗滌2次，并重懸細胞后，予以上機檢測。

1.3觀察指標 (1)觀察組患兒與對照組研究對象外周血細胞變化情況比較：淋巴細胞比例、WBC、單核細胞比例。(2)觀察組患兒與對照組研究對象T淋巴細胞亞群變化情況比較：CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞水平和CD4+/CD8+比值。(3)不同病毒載量患兒T淋巴細胞亞群變化情況比較。

2 結(jié) 果

2.1觀察組與對照組外周血細胞變化情況比較 觀察組患兒外周血淋巴細胞比例、WBC高于對照組(P<0.05)，兩組外周血單核細胞比例比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 觀察組與對照組外周血細胞變化情況比較

2.2觀察組與對照組T淋巴細胞亞群變化情況比較 觀察組患兒外周血CD4+T淋巴細胞水平和CD4+/CD8+比值低于對照組，而外周血CD8+T淋巴細胞水平高于對照組(P<0.05)；觀察組患兒外周血CD3+T淋巴細胞水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 觀察組與對照組T淋巴細胞亞群變化情況比較

2.3不同病毒載量患兒T淋巴細胞亞群變化情況比較 與EB病毒DNA≥1×105copy/mL的患兒相比，EB病毒DNA<1×105copy/mL患兒的外周血CD4+T淋巴細胞水平和CD4+/CD8+比值較高，外周血CD8+、CD3+T淋巴細胞水平較低(P<0.05)，見表3。

表3 不同病毒載量患兒T淋巴細胞亞群變化情況比較

3 討 論

EB病毒是一種可引起人類呼吸道感染、腫瘤的皰疹病毒，若未對患兒實施及時有效的治療，病情將進一步發(fā)展，導(dǎo)致全身多個系統(tǒng)損傷，嚴重影響患兒身心健康。相關(guān)研究表明，EB病毒感染可造成患兒機體細胞免疫功能降低，進而出現(xiàn)傳染性單核細胞增多癥(IM)，同時其還可導(dǎo)致B淋巴細胞、T淋巴細胞等發(fā)生增殖和轉(zhuǎn)化，為惡性疾病發(fā)生打下基礎(chǔ)，且與多種惡性腫瘤的發(fā)生有密切關(guān)系[6]。近幾年，EB病毒感染患兒的發(fā)病率呈逐年升高趨勢，且男性患兒比例高于女性[7]。

淋巴細胞可發(fā)揮產(chǎn)生、運載抗體，防御病毒感染等作用，但當患兒發(fā)生病毒感染性疾病時，其在外周血中的比例會升高[8]；白細胞具有防御作用，可參與機體的防御反應(yīng)，當病菌入侵機體時，其可包圍﹑吞噬病菌，故在一些病毒感染性疾病中，其水平也可升高[9]；單核細胞可吞噬、清除受傷、衰老的細胞及其碎片，還可參與免疫反應(yīng)，促進淋巴細胞發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，故其比例升高可輔助診斷機體已遭受病毒感染[10]。CD4+T淋巴細胞作為反映人體細胞免疫功能的主要指標，其主要負責對抗入侵的病菌，控制多種感染，故CD4+T淋巴細胞水平降低可提示患兒免疫功能降低，從而使發(fā)生病毒感染性疾病的風險增大，且易加重病情；CD8+T淋巴細胞主要源于白細胞分化，其可輔助T淋巴細胞受體識別抗原、特異性地殺傷靶細胞等，故患兒發(fā)生病毒感染疾病時，其水平較高[11]；CD3+T淋巴細胞主要通過與T淋巴細胞抗原受體結(jié)合，從而共同參與T淋巴細胞對抗原的識別、標記，當患兒發(fā)生病毒感染性疾病時，其水平偏高；CD4+/CD8+比值可作為反映細胞免疫反應(yīng)是否平衡的敏感指標，當患兒發(fā)生病毒感染性疾病時，其比值降低，表示免疫功能受到抑制，機體防御能力降低[12]。

本研究結(jié)果顯示，觀察組患兒外周血淋巴細胞比例、WBC高于對照組(P<0.05)，外周血單核細胞比例與對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，外周血CD4+T淋巴細胞水平和CD4+/CD8+比值低于對照組(P<0.05)，外周血CD8+T淋巴細胞水平高于對照組(P<0.05)，外周血CD3+T淋巴細胞水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。這表明當患兒發(fā)生EB病毒感染疾病時，其機體外周血T淋巴細胞亞群、WBC、淋巴細胞水平會發(fā)生變化，誘導(dǎo)一系列的免疫應(yīng)答反應(yīng)，進而對抗病毒感染，減輕機體損傷，與雷勛明等[13]研究結(jié)果基本一致。在EB病毒感染患兒中，其不同的病毒載量可反映機體感染的嚴重程度，病毒載量越高表明患兒的病情越重。本研究結(jié)果顯示，與EB病毒DNA≥1×105copy/mL的患兒相比，EB病毒DNA<1×105copy/mL患兒的外周血CD4+T淋巴細胞水平和CD4+/CD8+比值較高，外周血CD8+、CD3+T淋巴細胞水平較低，表明當患兒發(fā)生EB病毒感染疾病時，其病情嚴重程度可隨病毒載量的增加而加重，且機體免疫功能下降，與榮婷婷等[14]的研究結(jié)果基本一致。

綜上所述，EB病毒感染患兒外周血T淋巴細胞亞群、WBC、淋巴細胞水平異常，誘發(fā)免疫應(yīng)答反應(yīng)，同時其病情嚴重程度可隨病毒載量的增加而加重。因此，臨床可通過外周血T淋巴細胞亞群、WBC、淋巴細胞檢測，以評估EB病毒感染患兒的實際病情及預(yù)后情況。