miRNA-21水平變化在妊娠期糖尿病患者中的應用價值

左顯波

河南省南陽市第一人民醫院檢驗科,河南南陽 473000

妊娠期糖尿病是女性妊娠期常見的內科并發癥之一，不僅會引起妊娠高血壓、先兆子癇、胎膜早破等一系列疾病的發生，還會增加新生兒高膽紅素血癥、低鈣血癥的發病風險，對孕產婦、胎兒及新生兒造成不容忽視的健康風險[1]。相關資料顯示，妊娠期糖尿病是一種由飲食習慣、遺傳因素、生活環境等共同導致的多因素疾病，具體發病機制尚未明確[2]。微小核糖核酸(miRNA)是一種內源性的小分子RNA，通過與信使RNA(mRNA)結合、調節基因的轉錄來發揮作用。而且成熟的miRNA具有高度穩定性，不受時間、溫度等外在因素的影響而使檢查結果發生變化[3]。miRNA-21作為miRNA中第1個由RNA聚合酶Ⅱ轉錄的miRNA，目前已有很多學者證實了其在胃癌、肺癌、宮頸癌及心血管疾病發生中的作用，因其所在組織細胞的類型和特異性不同，發揮著不同的生物學作用[4-5]。也有研究表示，miRNA-21在糖尿病患者中呈異常高表達狀態[6]，但具體作用機制仍待進一步研究。基于此，本研究旨在探討miRNA-21在妊娠期糖尿病患者中的水平及與血糖指標的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年2月至2020年1月于本院接受治療的78例妊娠期糖尿病患者納入試驗組。將同期來本院產檢的年齡、孕周與試驗組相近的健康孕婦80例作為對照組。試驗組年齡21～39歲，平均(26.43±4.26)歲；孕周7.6～21.3周，平均(13.4±1.2)周；體質量指數(BMI)21.14～23.72 kg/m2，平均(22.48±0.65)kg/m2。對照組年齡23～37歲，平均(26.52±4.31)歲；孕周7.9～21.6周，平均(13.1±1.4)周；BMI 21.23～23.68 kg/m2，平均(22.54±0.62)kg/m2。兩組受試者一般資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經本院醫學倫理委員會審核批準，兩組受試者及家屬均已知曉且簽署知情同意書。

1.2納入與排除標準 納入標準：(1)所選受試者為單胎妊娠，試驗組患者均符合第13版《實用內科學》中有關妊娠期糖尿病的診斷標準[7]；(2)所選受試者均能遵循醫囑完成相關檢查或治療。排除標準：(1)妊娠前合并甲狀腺功能亢進等內分泌疾病者；(2)妊娠前合并冠心病、高血壓等疾病者；(3)有視聽障礙或意識障礙者；(4)近期服用降血壓、血糖的藥物或本次研究前已確診妊娠期糖尿病者；(5)合并心、肝、肺、腎等器官功能嚴重異常或凝血功能障礙者；(6)臨床資料不完整者或失訪者。

1.3方法 所選受試者均于入組后第1、3、5天清晨空腹抽取靜脈血3 mL，置于真空干燥管中，轉入EDTA采血管中，經離心處理后取上清液進行檢測。

1.3.1血糖指標檢測 采用免疫比濁法檢測受試者入組后第1、3、5天糖化血紅蛋白(HbA1c)水平，采用葡萄糖氧化酶法檢測空腹血糖(FBG)水平，檢測儀器為美國貝克曼庫爾特公司生產的AU5800全自動生化儀，試劑盒均由上海東仁化學有限公司提供。

1.3.2miRNA-21檢測 取受試者入組后第1、3、5天的血液標本，采用miRcute miRNA 提取分離試劑盒抽提和純化總RNA，總RNA分裝標記并置于-80 ℃環境下保存。以總RNA為模板，按照反轉錄試劑盒說明書進行反轉錄，miRNA反轉錄采用miRcute Plus miRNA First-Strand cDNA試劑盒，獲取cDNA。應用miRcute Plus miRNA qPCR 試劑盒進行熒光定量PCR擴增。miRNA-21引物序列以U6為內參基因對目標基因進行歸一化處理。正向引物序列為5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，反向引物序列為5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。反應參數設置：95 ℃預變性10 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火30 s，共40個循環。

2 結 果

2.1兩組受試者檢驗指標的比較 試驗組第1、3、5天的FBG、HbA1c及miRNA-21水平明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組受試者FBG、HbA1c及miRNA-21水平比較

2.2試驗組患者miRNA-21水平與血糖指標的相關性分析 試驗組患者的miRNA-21水平與FBG、HbA1c呈明顯正相關(r=0.782、0.618,P<0.05)。

3 討 論

妊娠期糖尿病指既往無糖尿病史，妊娠期間發生或首次被發現的糖尿病，是妊娠期最常見的并發癥之一[8]。目前全球范圍內妊娠期糖尿病的患病率為1%～20%，占糖尿病孕婦的80%～90%，并呈逐年上升趨勢，嚴重影響母嬰健康[9]。由于妊娠期多種激素的相互作用及代謝的改變，使孕產婦易于發生糖尿病[10]。大部分妊娠期糖尿病患者的臨床癥狀會在妊娠結束后消失，但其產后轉為2型糖尿病的概率是其他孕產婦的數倍，特別是高齡、肥胖的孕產婦，這也是導致妊娠期糖尿病不良妊娠結局的高危因素[11]。關于糖尿病的臨床診斷方法，目前主要通過檢測FBG、葡萄糖耐量試驗(OGTT)和HbA1c水平作為臨床診斷依據[12]。其中FBG是最常用的糖尿病篩查和診斷指標，從1997年作為共識一直沿用至今，但該指標只能反映患者檢測即刻的血糖狀態，靈敏度較低，具有一定局限性，易造成漏診[13]。OGTT是我國臨床用于研究糖代謝狀況和評價糖尿病患者胰島β細胞功能的常用檢測方法，有著靈敏度高、特異度高、干擾因素較少的優點，但該方法也存在著檢測手段復雜，檢測結果等待時間長等缺點，有少部分患者依從性差，并不利于臨床的廣泛開展[14]。HbA1c是血紅蛋白和血糖的最終結合物，因其結合反應不可逆，HbA1c水平可隨著血糖水平的升高而升高，也可隨著紅細胞的死亡而降低，可反映患者過去2～3個月的血糖變化情況，不易受進餐等因素的干擾，準確度較高。但HbA1c也有缺點，易受孕產婦中晚期血容量變化、血紅蛋白代謝速度及紅細胞壽命的影響，并不完全適用于高齡孕產婦作為糖尿病的診斷標準[15]。因此，尋求一種有效且安全的生物標志物來篩查和診斷妊娠期糖尿病，對改善妊娠期糖尿病患者的生活質量有重要價值。

妊娠期糖尿病是多因素、多機制共同作用的結果，多個具有重要功能基因的表達水平會影響該病的發生、發展，故妊娠期糖尿病的分子調控機制研究對該病的早期篩查及診斷有重要意義[16]。有學者指出，miRNA是基因表達的主要監管者和生物病理學的關鍵控制器，它的重要性已在癌癥、病毒性疾病、心血管疾病中被證實，而且其在胰島β細胞對胰島素的調節過程中也發揮著關鍵作用[17]。目前研究最多的miRNA包括miRNA-1、miRNA-21、miRNA-133、miRNA-181等，其中miRNA-21已被證實參與了脂肪細胞分化、糖酵解、胰島素分泌等生物學調控過程[18]。本研究結果顯示，妊娠期糖尿病患者miRNA-21、FBG和HbA1c水平明顯高于健康孕婦(P<0.05)，且經Spearman相關分析發現，miRNA-21水平與FBG、HbA1c呈正相關(P<0.05)，說明妊娠期糖尿病患者的miRNA-21呈高表達，其水平會隨著血糖水平的上升而升高。分析其中原因：miRNA-21作為人類基因組中最早發現和命名的miRNA，其可直接作用于多種靶基因，表達水平也受多種因子的調控，當其直接靶向作用于胰島素受體、胰島素受體底物等因子時，可下調AMPK基因表達進而參與調控胰島β細胞的生長、存活和有絲分裂，導致機體糖代謝異常，誘發妊娠期糖尿病。

綜上所述，妊娠期糖尿病患者的miRNA-21水平相比健康孕婦明顯升高，其水平與FBG、HbA1c呈正相關，孕期動態監測miRNA-21水平在一定程度上可預測妊娠期糖尿病是否發生。