全自動化學發光分析儀檢測孕酮和人絨毛膜促性腺激素的性能驗證

黃曉楠，劉玉林

（遂寧市中心醫院檢驗科，四川 遂寧 629000）

孕酮（PROG）和人絨毛膜促性腺激素（β-hCG）是目前臨床應用最廣泛的激素檢測項目，在婦產科等科室得到廣泛的應用。其檢測方法不斷變遷，從放射免疫測定法到酶聯免疫測定法再到化學發光免疫測定法。雅培i2000SR 全自動化學發光分析儀采用了化學發光微粒子免疫分析法（CMIA）定量測定人血清的激素水平。依據ISO 15189:2012《醫學實驗室質量和能力認可準則》[1]和《醫療機構臨床實驗室管理辦法》[2]，雅培i2000SR 全自動化學發光分析儀在用于檢測項目前，須對其性能進行驗證，確保其能夠滿足臨床需求，保證檢驗質量。本研究參照美國臨床和實驗室標準協會（CLSI）頒布的EP 系列文件及CNAS-GL037《臨床化學定量檢驗程序性性能驗證指南》[3]對i2000SR 全自動化學發光免疫分析儀上檢測的PROG 和β-hCG 的精密度、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍進行驗證和評價，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2021 年4 月1 日-30 日到遂寧市中心醫院進行健康體檢人員的外觀正常的新鮮血清，-20 ℃保存備用。

1.2 儀器與試劑 雅培i2000SR 全自動化學發光免疫分析儀；孕酮測定試劑盒（批號21450UI01）；人絨毛膜促性腺激素測定試劑盒（批號19561UI01）。

1.3 校準品 美國雅培公司的原裝校準品：孕酮校準品（批號20003UI01）；人絨毛膜促性腺激素校準品（批號20306UI01）。

1.4 質控品 美國伯樂公司的免疫分析質控品：水平1（批號40381），水平2（批號40382）；衛生部臨床檢驗中心2021 年第一次內分泌室間質量評價質控品5 份（樣本編號202111、202112、202113、202114、202115）。

1.5 方法

1.5.1 精密度驗證 選取2 個不同濃度的樣本，其中1 個樣本被測濃度水平在醫學決定水平左右或參考區間左右，每天測定1 次，每次重復測定4 次，連續測定5 d，分別計算總均值、批內標準差及實驗室內標準差（中間）；根據廠家要求的標準差、有效自由度及C 值計算得到驗證值（V），如測量的批內標準差、實驗室內標準差（中間）小于或等于驗證值，則驗證合格。

1.5.2 正確度驗證 參考CLSI EP15-A2 文件[4]，用20個血清標本（高中低值，包含醫學決定水平）或5 個室間質評樣本與通過ISO15189 認證的檢驗機構進行比對試驗。≥80%的標本偏移＜1/2 總允許誤差（TEA），其中包含醫學決定水平，則認為正確度驗證通過。

1.5.3 線性范圍的驗證 參考CLSI EP6-A 文件[5]，選擇高值樣本（濃度接近廠家說明書標示的高限值）和低值樣本進行驗證。將高值樣本按0、0.2、0.4、0.6、0.8、1 稀釋度稀釋，每個濃度測定2 次。做線性回歸分析，得出實測值與理論值的線性關系Y＝aX+b，計算相關系數（R2），得到的線性范圍并與廠家聲稱的進行比較。

1.5.4 臨床可報告范圍的驗證 選取已知濃度在分析測量范圍內的高值樣本1 份（接近測量范圍上限），用廠家推薦的稀釋液按照廠家推薦的稀釋倍數對該樣本進行稀釋，之后將樣本及稀釋樣本重復測定2 次，計算平均值。以樣品原倍結果平均值作為理論濃度，將樣品進行稀釋后得出的結果的均值為還原濃度,再計算還原濃度與理論濃度的偏差，偏差小于或等于該項目TEA 時的最大稀釋倍數則為該項目的最大稀釋倍數。可報告范圍高限則采用線性區間高限與最大稀釋倍數的乘積，低限采用線性范圍低限。

1.6 統計學方法 采用SPSS 19.0 和Excel 2018 對數據進行處理和分析。計量資料以（）表示，行t檢驗；計數資料以（%）表示，行X2檢驗；以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 精密度結果 PROG 和β-hCG 的批內標準差和實驗室內標準差均小于驗證值，驗證通過，見表1。

表1 PROG 和β-hCG 的精密度結果

2.2 正確度結果 PROG 和β-hCG 偏倚均小于1/2 TEA，驗證通過，見表2、表3。

表2 β-hCG 正確度結果

2.3 線性范圍結果 驗證項目的斜率a 值均在（1.00±0.03）范圍內，R2＞0.99，且測定的線性范圍在廠家聲稱的范圍內，驗證通過，圖1、表4、表5、圖2。

圖2 PROG 線性回歸

表4 β-hCG 線性范圍驗證

表5 PROG 線性范圍驗證

圖1 β-hCG 線性回歸

2.4 臨床可報告范圍 PROG 的臨床可報告范圍是0.1～389.3 nmol/L，β-hCG 的臨床可報告范圍是2.46～206 597.1 mIU/ml，見表6。

表6 PROG 和β-hCG 的臨床可報告范圍

3 討論

依據ISO15189 相關要求，參考美國臨床實驗室標準協會（CLSI）的系列文件和標準建立性能驗證方案[5-7]，檢測儀器在應用于臨床前需要對其檢測的檢驗項目進行性能驗證，以保證其質量并滿足臨床需求。驗證內容包括但不局限于精密度、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍等。雅培i2000SR 全自動化學發光分析儀采用微粒子化學發光原理定量檢測標本，與傳統方法相比檢測速度快、靈敏度高、操作簡單、故障率低[8]等特點，檢測血清標志物的性能驗證已有相關報道[9-12]，結果均符合廠家聲明。但廠家給出的性能驗證及指標參數僅代表廠家的實驗指標，本實驗室的檢測環境，如溫濕度，實驗用水及儀器狀態等與廠家并非完全一致，故使用前須進行性能驗證[13]。

精密度是重復測定值之間的一致性，是檢測系統的基本分析性能指標之一，可反映檢測系統的隨機誤差[14，15]。本研究顯示，雅培i2000SR 全自動化學發光分析儀檢測PROG 和β-hCG 的批內CV 和批間CV 均低于驗證值，符合廠家聲明，滿足臨床需求，說明該儀器檢測的重復性好。有研究證實[16]，雅培i2000SR 全自動化學發光分析儀性能穩定。正確度是大批檢驗結果的均值與真值的一致程度，正確度驗證是與通過了ISO15189 的臨床試驗進行比較。本研究選用自留標本和衛生部質控樣本進行測定，結果偏倚均小于12.5%，符合廠家聲明，與楊佳[17]的結論一致。線性范圍指測定值與稀釋倍數呈線性關系的范圍，采用線性稀釋回收法[9]，保證樣本的檢測結果在線性范圍內準確可靠。本次試驗結果顯示，驗證項目的斜率a 值均在（1.00±0.03）范圍內，R2＞0.99，且測定的線性范圍在廠家聲稱的范圍內，說明實測值與理論值具有良好的相關性，結果符合要求。黃學強等[18]也證明β-hCG 結果在線性范圍內可靠。本次驗證通過稀釋的方法對臨床可報告范圍進行測定，結果顯示PROG 的臨床可報告范圍為0.1～389.3 nmol/L；另外，β-hCG 的臨床可報告范圍在2.46～206 597.1 mIU/ml，與曾令恒等[19]報道的2.6～199000 mIU/ml 基本一致，證明雅培i2000SR 全自動化學發光分析儀的檢測能力符合要求。

綜上所述，雅培i2000SR 全自動化學發光分析儀檢測PROG 和β-hCG 的精密度、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍符合ISO15189 要求并與廠家聲明一致，可滿足臨床需求。