TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 在早期胚胎停育中的意義

金力榮，楊麥青，徐洪波，魏燕妮

（1.昌邑市人民醫(yī)院產(chǎn)科，山東 昌邑 261300；2.昌邑市人民醫(yī)院病理科，山東 昌邑 261300；3.濰坊市人民醫(yī)院病理科，山東 濰坊 261041；4.昌邑市人民醫(yī)院輸血科，山東 昌邑 261300；5.濰坊護(hù)理職業(yè)學(xué)院健康管理系，山東 濰坊 261041）

早期胚胎停育（early embryonic arrest）又稱為稽留流產(chǎn)，是自然流產(chǎn)中的一種，是婦產(chǎn)科常見病，占所有臨床妊娠的15%[1，2]。近年來，隨著飲食、生活習(xí)慣的改變和電離輻射、環(huán)境異常等原因，早期胚胎停育的發(fā)病率逐漸升高，影響了廣大育齡女性的身心健康。早期胚胎停育發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，目前尚不清楚[3，4]。尋求新的用于早期診斷和有效的干預(yù)治療的生物分子對于早期胚胎停育的研究和臨床治療意義重大。妊娠是機(jī)體同種移植中的特例，機(jī)體會(huì)通過免疫調(diào)節(jié)使母體對胚胎形成免疫耐受，而這個(gè)過程與機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生的多種細(xì)胞因子有關(guān)[5]。研究認(rèn)為[6，7]，自身免疫系統(tǒng)的紊亂在流產(chǎn)過程中有重要的作用。轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）包括3 種亞型：TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3，這3 種亞基生物學(xué)效應(yīng)基本相同，其中TGF-β1 作用最強(qiáng)。TGF-β1 是一種分子量為25 kD 的細(xì)胞因子，具有多種生物學(xué)功能，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答等[8，9]。輔助性T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的平衡是維持機(jī)體免疫功能的前提。輔助性T 細(xì)胞分為Th0、Th1、Th2，Th1 細(xì)胞主要分泌TNF-α、Interleukin（IL-2）、Interferon-γ 等，負(fù)責(zé)細(xì)胞免疫；Th2 細(xì)胞主要分泌Interleukin（IL-4）、Interleukin（IL-5）、Interleukin（IL-6）等，負(fù)責(zé)體液免疫[10，11]。TNF-α 有157 個(gè)氨基酸，是炎癥的中樞調(diào)節(jié)因子，對腫瘤和病毒具有抑制作用[12，13]。IL-4、IL-6介導(dǎo)體液免疫，是維持體內(nèi)免疫平衡的典型細(xì)胞因子[13-16]。TGF-β1 在胚胎停育中的研究有過相關(guān)報(bào)道，但TGF-β1 聯(lián)合TNF-α、IL-4、IL-6 在早期胚胎停育中的報(bào)道甚少。為此，本實(shí)驗(yàn)通過檢測早期胚胎停育患者血清中TGF-β1 表達(dá)水平的變化及與TNF-α、IL-4、IL-6 表達(dá)之間的關(guān)系，探究TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 在早期胚胎停育過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018 年1 月-2021 年8 月在昌邑市人民醫(yī)院產(chǎn)科就診并經(jīng)過臨床診斷的35 例早期胚胎停育患者作為觀察組，均經(jīng)彩超確診為宮內(nèi)妊娠，胚胎停止發(fā)育。另選同期35 例健康產(chǎn)婦作為對照組，彩超提示孕囊內(nèi)見胚芽組織、心管搏動(dòng)。兩組年齡、停經(jīng)天數(shù)、孕周、孕囊大小比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，見表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：①月經(jīng)周期規(guī)律；②血常規(guī)、凝血功能正常；③經(jīng)血液及彩超檢查排除染色體、解剖異常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①無高血壓病、糖尿病、免疫性疾病；②顯性遺傳病史。所有受試者均由兩名產(chǎn)科醫(yī)師明確診斷，均對本研究知情同意并簽署知情同意書。

表1 兩組一般資料比較（）

表1 兩組一般資料比較（）

1.2 方法 所有受試者保證清晨空腹，抽取清晨空腹靜脈血5 ml，放入非抗凝試管中，以3000 r/min 離心10 min 后取血清做好標(biāo)記，放入-80 ℃冰箱。檢測TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 的表達(dá)水平時(shí)，自冰箱內(nèi)取出血清，冰上解凍，然后2000 r/min，離心15 min，取上清液，嚴(yán)格按照說明書用雙抗體夾心ABCELISA 法檢測。試劑盒購買于武漢賽培生物科技有限公司，使用美國全自動(dòng)酶聯(lián)檢測儀450 nm 讀取OD 值，將OD 值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線及標(biāo)準(zhǔn)公式計(jì)算出樣品濃度。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組血清TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 的表達(dá)水平；分析早期胚胎停育患者血清TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系及血清TGF-β1 與TNF-α、IL-4、IL-6 表達(dá)的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0 處理本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用（）表示，組間比較采取t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，行X2檢驗(yàn)，相關(guān)關(guān)系采用Pearson 相關(guān)性分析，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 表達(dá)水平比較觀察組血清TGF-β1、IL-4、IL-6 表達(dá)水平低于對照組，血清TNF-α 表達(dá)水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 水平比較（）

表2 兩組TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 水平比較（）

2.2 觀察組血清TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 的表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系 觀察組血清TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 表達(dá)水平分別與年齡、停經(jīng)天數(shù)、孕周、孕囊大小無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 觀察組血清TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 與臨床指標(biāo)的關(guān)系（n）

2.3 觀察組血清TGF-β1 與TNF-α、IL-4、IL-6 表達(dá)的關(guān)系 TGF-β1 的表達(dá)與IL-4（r=0.368）、IL-6（r=0.338）的表達(dá)呈正相關(guān)，與TNF-α 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.329），見表4、圖1。

圖1 TGF-β1 與TNF-α、IL-4、IL-6 的相關(guān)性

表4 觀察組血清TGF-β1 與TNF-α、IL-4、IL-6 表達(dá)的關(guān)系（n）

3 討論

早期胚胎停育是一種常見的產(chǎn)科疾病，其致病原因有遺傳因素、內(nèi)分泌紊亂、免疫因素、社會(huì)心理因素等。因停止發(fā)育的孕囊滯留在宮腔未自然完全排出，可能會(huì)引起孕產(chǎn)婦的凝血功能障礙[17]。但早期胚胎停育的發(fā)病機(jī)制仍不明確，近年來隨著發(fā)病率的增加，嚴(yán)重影響廣大育齡女性的身心健康[1，17，18]。有研究指出[19]，妊娠子宮局部和母體全身免疫系統(tǒng)的功能對于維持正常的妊娠至關(guān)重要。

TGF-β1 是TGF-β 亞型的一種，機(jī)體多種細(xì)胞可以合成，參與細(xì)胞生長、代謝的多種生理病理過程。在機(jī)體活動(dòng)中，其作用方式比較復(fù)雜，與多種其他細(xì)胞因子互相作用，產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)也各不相同。有研究證實(shí)[20]，TGF-β1 參與正常妊娠成功的關(guān)鍵過程，包括蛻膜化、滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲、血管生成和免疫調(diào)節(jié)等。由此可見，TGF-β1 對于維持正常的妊娠過程，起著重要的作用。本研究表明，TGFβ1 在早期胚胎停育患者血清中的表達(dá)比對照組低，印證了TGF-β1 的減少參與了早期胚胎停育的發(fā)生發(fā)展。

T 淋巴細(xì)胞對于妊娠的作用主要靠輔助性T 細(xì)胞，輔助性T 細(xì)胞包括Th0、Th1、Th2。Th1 分泌的細(xì)胞因子有TNF-α、IL-2、Interferon-γ 等，參與細(xì)胞免疫；Th2 分泌的細(xì)胞因子有細(xì)胞IL-4、IL-5、IL-6 等，參與體液免疫。在妊娠過程中Th2 參與體液免疫主要起保護(hù)作用，妊娠的成功需要Th1、Th2 的功能保持動(dòng)態(tài)平衡，任何一方的免疫過度，都會(huì)影響到妊娠的結(jié)局[10，11]。研究表明，在懷孕期間，TNF-α 能夠影響激素的合成、胎盤結(jié)構(gòu)和胚胎發(fā)育。TNF-α 水平升高與流產(chǎn)和先兆子癇相關(guān)，TNF-α 水平升高能影響胎兒營養(yǎng)的供應(yīng)，還可能通過改變胎盤免疫調(diào)節(jié)因子的分泌而影響母嬰關(guān)系，進(jìn)而影響母體免疫細(xì)胞細(xì)胞因子的表達(dá)[21，22]。TNF-α 水平的改變會(huì)進(jìn)一步影響IL-4、IL-6 的表達(dá)，進(jìn)而加重免疫紊亂的過程[23]。使用TNF-α 拮抗劑可在妊娠相關(guān)疾病中起到一定的臨床效果[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，在早期胚胎停育患者血清中TNF-α 的表達(dá)增多，而IL-4、IL-6 的表達(dá)水平降低，說明TNF-α、IL-4、IL-6 介入了早期胚胎停育的發(fā)展，Th1、Th2 介導(dǎo)參與的免疫平衡被打破。

本研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1、TNF-α、IL-4、IL-6 的表達(dá)在早期胚胎停育患者中與年齡、停經(jīng)天數(shù)、孕周、孕囊的大小均無關(guān)。TGF-β1 的表達(dá)與TNF-α、IL-4、IL-6 的表達(dá)變化有關(guān)，且TGF-β1 的表達(dá)與TNF-α的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與IL-4、IL-6 的表達(dá)呈正相關(guān)，說明TGF-β1 與Th1、Th2 介導(dǎo)參與的免疫平衡相關(guān)；與IL-4、IL-6 可發(fā)揮協(xié)同作用。但是TGF-β1 是如何引發(fā)的Th1、Th2 介導(dǎo)參與的免疫平衡，本研究尚未探究，今后將從該方向進(jìn)一步研究。

綜上所述，TGF-β1、IL-4、IL-6 在早期胚胎停育患者血清中的表達(dá)降低，而TNF-α 表達(dá)升高，TGF-β1 的表達(dá)與TNF-α 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與IL-4、IL-6 的表達(dá)分別呈正相關(guān)。隨著分子生物技術(shù)的不斷提高，TNF-α 拮抗劑可能會(huì)有效地應(yīng)用于早期胚胎停育的治療。