艾葉炭的化學成分研究

谷 樂，邵信婷，王雪鈺，楊昭怡，段明華，王 燁，李 勇

（長春中醫(yī)藥大學藥學院，長春 130117）

艾葉炭由菊科多年生草本植物艾（Artemisia argyi Lévl，et Vant）的干燥葉經(jīng)高溫炮制而來。中藥艾葉被廣泛用作食物和草藥，具有溫經(jīng)止血、散寒止痛的功效。艾葉中含有揮發(fā)油、黃酮類、鞣質(zhì)類、三萜類等多種化學成分[1-8]，具有抗菌抗病毒、平喘鎮(zhèn)咳祛痰、保肝、抗腫瘤、抗氧化等多種藥理活性作用[9-12]。根據(jù)中藥炒炭存性理論，艾葉高溫炒炭過程是炭化而非灰化，炒炭后原指標性成分桉油精消失[13]，但仍有部分有機物未炭化，且有新的化學成分生成[14]。同時炒炭后難溶性草酸鈣簇晶大幅減少產(chǎn)生游離鈣離子，止血作用明顯增強[15-17]。目前艾葉炭的化學研究十分稀少，在本課題組前期研究基礎(chǔ)上，艾葉炭地方質(zhì)量標準已被收載于2020年版《吉林省中藥飲片炮制規(guī)范》第40頁，本研究旨在對艾葉炭化學成分進行研究，進一步闡明中藥炒炭存性理論并為臨床應用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與儀器

1.1 藥材

艾葉炭為實驗室自制，產(chǎn)品批號為20200511。艾葉炮制過程：將艾葉飲片凈選，除去雜質(zhì)、梗及灰屑，揉散置滾筒式炒藥機中，設(shè)置鍋底溫度為180 ℃，轉(zhuǎn)速為20 r·min-1，待艾葉炒制冒黃煙，取少量水均勻噴灑，翻炒16 min左右，待艾葉表面焦黑色，炒干，滅盡火星，取出，放涼得艾葉炭。其外觀呈不規(guī)則碎片，表面為黑褐色，符合2020年版《吉林省中藥飲片炮制規(guī)范》中的艾葉炭標準。

1.2 試劑與儀器

乙腈（HPLC，F(xiàn)isher Co.，美國），磷酸（HPLC，國藥集團化學試劑有限公司，中國）甲醇（AR，HPLC，國藥集團化學試劑有限公司，中國），正己烷（AR，HPLC，北京化工廠，中國），乙酸乙酯（AR，HPLC，廣東光華科技股份有限公司，中國），純化水為實驗室自制；核磁共振光譜儀（1H NMR：400 MHz，13C NMR：100 MHz，Merk Co.，德國），使用CDCl3和DMSO-d6為溶劑，高效液相色譜儀（Aglient：1 260 Infinity II， 美 國；Waters：600 Controller，Delta 600，2487，美國），精密電子天平（FA1204B 上海菁海儀器有限公司，中國），層析用硅膠（200-300目，青島海洋化工廠，中國），高效液相色譜柱（SHIMADZU C18 10 mm×250 mm；GSA10250SIL19001 10 mm×250 mm，環(huán)球色譜有限公司，中國），三用紫外分析儀（ZF-6，安靈股份有限公司，中國），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（RE-52A，上海亞榮生化儀器廠，中國），水浴鍋（HH-6，邦西儀器科技上海有限公司，中國）。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離

艾葉炭1.0 kg甲醇回流提取2次，每次30 min，合并提取液，濃縮得到20.10 g提取物。經(jīng)硅膠柱色譜（200～300 目），以正己烷-乙酸乙酯（10:0～0:10）溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，經(jīng)TLC檢識合并相似流分，得到Fr.1-5。將Fr.1通過半制備正向高效液相色譜法（正己烷:乙酸乙酯=10:1，2.0 mL·min-1），分離得到化合物2（68.72 mg，Rt 35.7 min），高效液相色譜圖1B；從Fr.4通過半制備反向高效液相色譜法（乙腈:0.1%磷酸=55:45，2.0 mL·min-1），分離得到化合物1（75.69 mg，Rt 22.4 min），高效液相色譜圖見圖1A。

圖1 HPLC色譜圖

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1黃綠色粉末；1H NMR （600 MHz，DMSO-d6，TMS），δH ：9.58（1H，s，OH-3），12.50（ 1H，s，OH-5），6.21（ 1H，d，J=2.0 Hz，H-6），10.76（ H，s，OH-7），6.42（ 1H，d， J =2.0 Hz，H-8），7.69 （1H，d，J =2.2 Hz，H-2′），9.35 （1H，s，OH-3′），9.30 （1H，s，OH-4′），6.90 （1H，d，J =8.5 Hz，H-5′），7.56（1H，dd，J=8.5 Hz，2.2 Hz，H-6′）；13C-NMR （150 MHz，DMSO，TMS），δC ：148.1（C-2），136.2（C-3），176.3（C-4），161.2（C-5），98.6 （C-6），164.9（C-7），93.8（C-8），156.6（C-9），103.5（C-10），120.4（C-1′），116.1（C-2′），145.5（C-3′），147.2（C-4′），115.5 （C-5′），122.4 （C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻[18-19]報道一致，故鑒定化合物1為槲皮素（Quercetin），化學結(jié)構(gòu)見圖2A。

圖2 化合物結(jié)構(gòu)圖

化合物2白色粉末；LR-EIMS （m/z，392），1H-NMR（600 MHz，CDCl3，TMS），δH ：3.59（ 2H，t，J =6.78 Hz，H-1），2.02（H，d，J =5.16Hz，OH-1），1.52（2H，m，H-2），1.29（50H，m，H-3～27），0.85（3H，m，H-28），13C-NMR（150 MHz，CDCl3，TMS），δC：63.1（C-1），32.8（C-2），31.9（C-3），29.7（C4～ 24），27.1（C-25），25.7（C-26），22.7（C-27），14.1（C-28） 。以上數(shù)據(jù)與文獻[20-22]報道一致，故鑒定化合物2為二十八烷醇（Octacosanol），化學結(jié)構(gòu)見圖2B。

3 討論

近年來艾葉以其溫經(jīng)止血為療效被大量開發(fā)應用，其相關(guān)炮制品也廣泛用于臨床。傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論中炒炭存性是指藥物只能部分炭化，更不能灰化，未炭化部分仍應保存藥物的固有氣味。艾葉炭由艾葉高溫炮制而來，利用傳統(tǒng)性狀和總黃酮含量的雙重綜合評價確定180℃為其最佳炮制溫度。炒炭后原指標性成分桉油精消失，無法用其含量評價艾葉炭質(zhì)量。同時，難溶性草酸鈣簇晶大幅減少產(chǎn)生游離鈣離子增加止血作用，這與“炒炭止血”的傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論相一致。因此，對于艾葉炭中化學成分尤其是指標性成分研究尤為迫切。本研究在從艾葉炭中分離出2個黃酮類化合物，分別為槲皮素和二十八烷醇，并對其進行了綜合光譜解析，通過1D&2D光譜對其進行了完整的結(jié)構(gòu)歸屬，糾正了部分數(shù)據(jù)的歸屬錯誤，不僅為中藥炒炭存性理論提供依據(jù)，同時，為日后艾葉炭質(zhì)量標準的進一步完善與提升奠定堅實基礎(chǔ)。