基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討柴胡治療非酒精性脂肪性肝病機(jī)制

田新才，楊梅，趙琦，張飛，郭震凡，唐云

1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550003

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是以彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性和肝臟脂肪貯積為主要病理特征的一類代謝應(yīng)激性肝損傷綜合征。越來(lái)越多的證據(jù)表明NAFLD 的形成是多因素共同作用導(dǎo)致的涉及多系統(tǒng)的，可能與多種內(nèi)分泌代謝疾病、病毒性肝炎、自身免疫性肝病、酒精性肝病等共同存在的一種與代謝紊亂有關(guān)的疾病［1］。肥胖、糖尿病或其他代謝相關(guān)疾病等導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)代謝失衡，游離脂肪酸（FFA）蓄積于內(nèi)，使肝細(xì)胞脂肪變性，即非酒精性單純性脂肪肝（NAFL），過多FFA 產(chǎn)生脂毒性誘導(dǎo)氧化應(yīng)激、胰島素抵抗導(dǎo)致炎癥反應(yīng)，這種作用是雙向發(fā)展的，容易形成惡性循環(huán)，造成肝臟損害，形成非酒精性脂肪性肝炎（NASH），若治療不及時(shí)，NASH 可以進(jìn)一步發(fā)展為肝纖維化及肝硬化，最終激發(fā)癌癥通路，形成肝細(xì)胞癌（HCC）［2-5］。過去幾十年成人NAFLD 發(fā)病率為6.3%～45%，其中NASH 的發(fā)病率占10%～30%［6］。近年來(lái)NAFLD 的發(fā)病人數(shù)日漸增加，且發(fā)病年齡呈現(xiàn)下降趨勢(shì)［7］。據(jù)調(diào)查，全球NAFLD 的流行率約為25%，兒童和青少年NAFLD 的患病率約10%，最小患者只有2 歲，最年輕的NASH 相關(guān)肝硬化患者為8 歲［8］。

因NAFLD 致病因素多，機(jī)制復(fù)雜，目前尚無(wú)治療NAFLD 特效藥，除改變生活方式、調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)之外，大多從改善胰島素抵抗、抗氧化、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、調(diào)節(jié)腸道菌群等方面著手治療。中醫(yī)藥辨證論治時(shí)講究“三因制宜”，即個(gè)體化治療，臨床療效顯著；經(jīng)長(zhǎng)期臨床實(shí)踐，因其有效性及安全性被越來(lái)越多的人接受，雖臨床上療效顯著，但缺乏客觀指標(biāo)和量化證據(jù)，不易推廣。

柴胡能疏散退熱，疏肝解郁,清膽截瘧，升舉陽(yáng)氣［9］；《神農(nóng)本草經(jīng)》［10］稱之為“茈胡”，又名“地薰”，為上品，其“味苦，平。主心腹，去腸胃中結(jié)氣、飲食積聚、寒熱邪氣，推陳致新”。據(jù)《雷公炮制藥性解》［11］記載，“味苦，性微寒，無(wú)毒，入肝、膽、心包絡(luò)焦、胃、大腸六經(jīng)。主傷寒心中煩熱，痰實(shí)腸胃中，結(jié)氣積聚，寒熱邪氣，兩脅下痛，疏通肝木，推陳致新……凡胸腹腸胃之病因熱所致者，得柴胡引清去濁而病謝矣，故入肝膽等經(jīng)。”馬驥運(yùn)用柴胡劑時(shí)增設(shè)小柴胡湯腹證，凡以“胸脅苦滿”為主證，伴胸中壅塞脹滿、心窩部發(fā)硬、肋弓下壓痛、肝區(qū)緊張?zhí)弁础⑸细菇仟M窄者均屬于此［12］。白宗利［13］、孫慧敏［14］通過對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)醋柴胡毒性較生柴胡毒性小，保肝作用強(qiáng)；酒制柴胡較其他柴胡炮制品有更好的抗炎作用。綜合而言，現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，柴胡在免疫調(diào)節(jié)、臟器保護(hù)（保肝）及抑制纖維化（肝肺等）、抗炎、抗病毒、抗腫瘤以及心血管、血液系統(tǒng)等方面發(fā)揮著重要作用［15］。

本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)數(shù)據(jù)平臺(tái)對(duì)柴胡治療NAFLD 的有效成分及作用靶點(diǎn)進(jìn)行分析，為中醫(yī)藥治療NAFLD 提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 柴胡活性成分及靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

利用中醫(yī)藥系統(tǒng)藥理學(xué)平臺(tái)TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)［16］（https:lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）搜索柴胡的所有化學(xué)成分，以口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%及類藥性指數(shù)（drug-like index，DL）≥0.18 為基點(diǎn)確定藥物有效成分，然后根據(jù)Mol ID 逐一查找有效成分對(duì)應(yīng)的潛在蛋白靶點(diǎn)，結(jié)合Swiss Target Prediction 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.swisstargetprediction.ch/index.php），導(dǎo)入在PubChem 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）獲得上述成分的SDF 格式化學(xué)結(jié)構(gòu)文件,限制種屬“homo sapiens”,點(diǎn)擊預(yù)測(cè)并導(dǎo)出結(jié)果,將二者所得結(jié)果合并、去重，即得到藥物活性成分靶點(diǎn),再通過UniProt 數(shù)據(jù)庫(kù)［17］（http://www.uniprot.org/）對(duì)蛋白名稱進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，選擇物種為“Human”，下載已證實(shí)的人類基因，利用EXCEL 表格函數(shù)對(duì)藥物靶點(diǎn)基因全稱進(jìn)行symbol 轉(zhuǎn)換。

1.2 NAFLD 疾病相關(guān)靶點(diǎn)獲取

通過GeneCards［18］數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.Genecards.org/）以“non-alcoholic fatty liver disease”為關(guān)鍵詞檢索收集NAFLD 疾病相關(guān)靶點(diǎn)，納入了所有條目信息，刪除多余重復(fù)的靶點(diǎn)，即得到NAFLD 的相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3 柴胡治療NAFLD 的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析

將篩選出的柴胡與NAFLD 疾病靶點(diǎn)輸入Draw Venn Diagram（Venn 圖）在線軟件平臺(tái)（http://bioinformatics.psb.ugent.be/ webtools/Venn/）中將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成可視化Venn 圖。再運(yùn)用Cytoscape 3.7.2 軟件構(gòu)建藥物-活性成分-疾病靶點(diǎn)的可視化網(wǎng)絡(luò)。

1.4 柴胡與NAFLD 的靶點(diǎn)蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡(luò)（PPI）分析

運(yùn)用string 11.0 數(shù)據(jù)平臺(tái)（https://string-db.org/），將上傳至在線string 數(shù)據(jù)庫(kù)，設(shè)置蛋白種類為“homo sapiens”，設(shè)置最低置信度為0.7，其他參數(shù)設(shè)置不變，去掉網(wǎng)絡(luò)中的單一節(jié)點(diǎn)，構(gòu)建從網(wǎng)絡(luò)分析獲得的關(guān)鍵蛋白PPI 網(wǎng)絡(luò)。再次通過Cytoscape軟件將生成的“string interactions.tsv”文件進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析，根據(jù)節(jié)點(diǎn)的degree 和顏色深淺選出核心靶點(diǎn)，即獲得柴胡潛在治療靶點(diǎn)的PPI 網(wǎng)絡(luò)圖［19］。

1.5 GO 功能富集分析和KEGG 生物通路富集分析

GO 功能富集分析和KEGG 生物通路富集分析分別是針對(duì)各種物種的基因功能和基因產(chǎn)物在細(xì)胞中的代謝途徑及功能進(jìn)行富集程度分析的一種方法。Metascape 是實(shí)驗(yàn)生物學(xué)家在大數(shù)據(jù)時(shí)代全面分析和解釋當(dāng)前廣泛的生物數(shù)據(jù)庫(kù)的有效工具［20］。通過Metascape 數(shù)據(jù)庫(kù)［20］對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行GO 富集功能分析，如生物過程（biological process,BP），細(xì)胞成分（cellular component,CC），分子功能（molecular function,MF），獲得GO 富集分析結(jié)果（P＜0.01）；對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 信號(hào)通路富集分析，獲得顯著富集的信號(hào)通路（P＜0.01）。最后利用Cytoseape軟件對(duì)GO 富集和KEGG 富集分析數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和可視化處理,以此探討柴胡治療NASH 的生物學(xué)過程及關(guān)鍵信號(hào)通路。

2 結(jié)果

2.1 柴胡的主要有效成分及靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

根據(jù)OB ≥30%及DL ≥0.18 從TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選出有效成分17 個(gè)，刪除其中5 個(gè)無(wú)對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的成分，最終獲得12 個(gè)唯一有效成分，見表1。

表1 柴胡主要有效成分表

在TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)中收集12 個(gè)有效成分的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)，與Swiss Target Prediction 數(shù)據(jù)庫(kù)靶點(diǎn)預(yù)測(cè)得出的評(píng)分值靠前的靶點(diǎn)合并，利用Uniprot 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，刪除重復(fù)值，得到196 個(gè)唯一靶點(diǎn)蛋白。

2.2 疾病靶點(diǎn)獲取及繪制Venn 圖

將GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.Genecards.org/）中查詢的NAFLD 疾病相關(guān)靶點(diǎn)基因整理并去重，得到1 080 個(gè)與NASH 疾病的相關(guān)靶點(diǎn)基因；依次將柴胡與NAFLD 的靶點(diǎn)基因?qū)隓raw Venn Diagram（Venn 圖）在線軟件平臺(tái)繪制成Venn 圖，其中交集靶點(diǎn)共85 個(gè)，見圖1。

圖1 NAFLD與柴胡交集靶點(diǎn)Venn圖

2.3 構(gòu)建“中藥-有效成分-疾病靶點(diǎn)”可視化網(wǎng)絡(luò)圖

將有效成分和利用Venn 圖篩選出的疾病-藥物共有靶點(diǎn)蛋白通過Excel 表格的整合，通過Cytoscape 3.7.2 軟件將藥物的靶基因196 個(gè)與藥物-疾病的共同靶點(diǎn)85 個(gè)運(yùn)用Perl 命令符取交集，得到柴胡治療NAFLD 的有效成分11 個(gè)導(dǎo)入Cytoscape 軟件中，得到“中藥-有效成分-疾病靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。圖中包括97 個(gè)節(jié)點(diǎn)（1 種藥物、11 個(gè)有效成分、85 個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)蛋白），其中槲皮素（quercetin）、山柰酚（kaempferol）、異鼠李素（isorhamnetin）、乙酸亞油醇酯（Linoleyl acetate）、豆甾醇（Stigmasterol）五種有效成分的作用靶點(diǎn)較多；前列腺素內(nèi)過氧化物酶2（PTGS2）、一氧化氮合酶（NOS2）、乙醇脫氫酶（ADH1C）、B2 腎上腺素受體（ADRB2）、黃嘌呤脫氫酶（XDH）、B 細(xì)胞白血病/淋巴因子2（BCL2）、糖原合成酶激酶3B（GSK3B）等靶點(diǎn)蛋白分別有多個(gè)有效成分與之相互作用；印證了柴胡可能通過多成分、多靶點(diǎn)、多途徑治療NAFLD 的作用。見圖2。

圖2 柴胡治療NAFLD的“中藥-有效成分-疾病靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖

2.4 PPI 網(wǎng)絡(luò)分析

將獲得的85 個(gè)共有靶點(diǎn)上傳至string 11.0 數(shù)據(jù)網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)，設(shè)置最低置信度為0.7，其他參數(shù)設(shè)置不變，構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)，將生成“string interactions.tsv”文件導(dǎo)入Cytoscape 軟件進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析，結(jié)果見圖3。圖中節(jié)點(diǎn)代表靶點(diǎn)蛋白，邊代表兩者之間的聯(lián)系，degree大小代表節(jié)點(diǎn)連線多少，節(jié)點(diǎn)圓圈大小與degree 值呈正相關(guān)；顏色越深、節(jié)點(diǎn)越大表示靶點(diǎn)越關(guān)鍵；每個(gè)節(jié)點(diǎn)邊的數(shù)目與關(guān)聯(lián)度呈正比，每個(gè)節(jié)點(diǎn)的邊越多，關(guān)聯(lián)度越大。由此可得到位于前十位的靶點(diǎn)蛋白為絲/蘇氨酸蛋白激酶B1（AKT1）、腫瘤壞死因子（TNF）、白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）、腫瘤蛋白P53（TP53）、過氧化酶體增殖物激活受體γ（PPARG）、半胱氨酸蛋白酶3（CASP3）、原癌基因（JUN）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGFA）、前列腺素內(nèi)過氧化物酶2（PTGS2），其中AKT1、TNF、IL-6、IL1β 為柴胡治療NAFLD 的核心靶點(diǎn)。

圖3 “柴胡-NAFLD”蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 柴胡治療NAFLD 基因GO 富集分析

在GO 富集分析中根據(jù)enrichment score（富集評(píng)分）的高低，校正P值后分別繪制出細(xì)胞組分，分子功能，生物過程前20 位的富集分析結(jié)果，如圖4 所示。各部分按富集程度排序，柴胡治療NAFLD 的主要生物過程有對(duì)脂多糖的反應(yīng)（response to lipopolysaccharide）、對(duì)無(wú)機(jī)物的反應(yīng)（response to inorganic substance）、凋亡信號(hào)通路（apoptotic signaling pathway）、對(duì)異物刺激的反應(yīng)（response to xenobiotic stimulus）、對(duì)營(yíng)養(yǎng)水平的反應(yīng)（response to nutrient levels）、血管形態(tài)發(fā)生（blood vessel morphogenesis）、對(duì)類固醇激素的反應(yīng)（response to steroid hormone）、對(duì)肽的反應(yīng)（response to peptide）、細(xì)胞分化的負(fù)調(diào)控（negative regulation of cell differentiation）、細(xì)胞黏附的調(diào)節(jié)（regulation of cell adhesion）、平滑肌細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)（regulation of smooth muscle cell proliferation）、老化（aging）、對(duì)氧氣水平的反應(yīng)（response to oxygen levels）、細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路（cytokinemediated signaling pathway）、活性氧代謝過程（reactive oxygen species metabolic process）、炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)（regulation of inflammatory response）、細(xì)胞因子產(chǎn)生的正調(diào)控（positive regulation of cytokine production）、對(duì)紫外線的反應(yīng)（response to UV）、內(nèi)在凋亡信號(hào)通路（intrinsic apoptotic signaling pathway）、神經(jīng)元死亡的調(diào)節(jié)（regulation of neuron death）；細(xì)胞組分主要有膜筏（membrane raft）、細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix）、膜面（side of membrane）、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)復(fù)合體（transcription regulator complex）、軸突（axon）、細(xì)胞質(zhì)核周區(qū)（perinuclear region of cytoplasm）、囊泡腔（vesicle lumen）、細(xì)胞器外膜（organelle outer membrane）、核膜（nuclear envelope）、蛋白激酶復(fù)合物（protein kinase complex）、晚期內(nèi)體（late endosome）、富含 ficolin-1 的顆粒管（ficolin-1-rich granule lumen）；主要分子功能有DNA 結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合（DNA-binding transcription factor binding）、蛋白質(zhì)同二聚化活性（protein homodimerization activity）、蛋白激酶結(jié)合（protein kinase binding）、氧化還原酶活性（oxidoreductase activity）、細(xì)胞因子受體結(jié)合（cytokine receptor binding）、蛋白激酶活性（protein kinase activity）、蛋白酶結(jié)合（protease binding）、絲氨酸水解酶活性（serine hydrolase activity）、核受體活性（nuclear receptor activity）、肽結(jié)合（peptide binding）、組蛋白脫乙酰酶結(jié)合（histone deacetylase binding）、激酶調(diào)節(jié)活性（kinase regulator activity）、整合素結(jié)合（integrin binding）、腫瘤壞死因子受體超家族結(jié)合（tumor necrosis factor receptor superfamily binding）、細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合（extracellular matrix binding）、趨化因子受體結(jié)合（chemokine receptor binding）、黃素腺嘌呤二核苷酸結(jié)合（flavin adenine dinucleotide binding）、一氧化氮合酶調(diào)節(jié)活性（nitric-oxide synthase regulator activity）、R-SMAD 綁定（R-SMAD binding）、NF-κB結(jié)合（NF-kappaB binding）。

圖4 柴胡治療NAFLD的GO富集分析

2.6 柴胡治療NAFLD 的KEGG 通路富集分析

通過KEGG 信號(hào)通路富集分析得出柴胡治療NAFLD 的信號(hào)通路主要涉及炎癥、抗癌等方面，如癌癥通路（pathways in cancer）、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化（fluid shear stress and atherosclerosis）、丙型肝炎（hepatitis C）、HIF-1 信號(hào)通路（HIF-1 signaling pathway）、大腸癌（colorectal cancer）、內(nèi)分泌抵抗（endocrine resistance），詳見圖5。KEGG通路富集分析發(fā)現(xiàn)，癌癥通路（Pathways in cancer）含有37 個(gè)靶點(diǎn)，是含有靶點(diǎn)最多的通路。

圖5 柴胡治療NAFLD的KEGG通路富集分析

3 討論

中醫(yī)古籍中關(guān)于NAFLD 的論述，最早的記載見于《難經(jīng)》，稱之為“肥氣”；《濟(jì)生方》卷四：“肥氣之狀……診其脈，弦而細(xì)，其色青，其病兩脅下痛，牽引小腹，足寒轉(zhuǎn)筋，男子為積疝，女子為瘕聚”。根據(jù)其病因、病機(jī)、癥狀，可將其歸屬于“肝癖”“積聚”“脅痛”“肥氣”“肝脹”等范疇。《非酒精性脂肪肝病中醫(yī)診療專家共識(shí)（2017）》［21］將NAFLD 命名為“肝癖”,認(rèn)為其主要病因大體可歸納為五點(diǎn)：飲食不節(jié)、情志失調(diào)、勞逸失度、久病體虛、稟賦不足。《非酒精性脂肪肝病中醫(yī)診療指南》［22］指出本病病位涉及脾、肝、腎三臟，與痰、濕、濁、瘀、熱等病理因素有密切關(guān)系，證屬本虛標(biāo)實(shí)，肝脾腎三臟功能失調(diào)為本，痰濁血瘀為標(biāo)。《金匱要略》有云:“見肝之病，知肝傳脾，當(dāng)先實(shí)脾”，經(jīng)數(shù)據(jù)挖掘研究發(fā)現(xiàn)［23-24］，治療NAFLD 的藥物主要?dú)w于藥物歸經(jīng)以肝、脾二經(jīng)為主，柴胡為治療NAFLD 的主要藥物之一，對(duì)肝臟有良好的保護(hù)作用。

通過“藥物-成分-疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖”中Degree 值得出，槲皮素、山柰酚、豆甾醇、異鼠李素、乙酸亞油醇酯為柴胡治療NAFLD 的主要活性成分。槲皮素、山柰酚、異鼠李素均屬于黃酮類化合物，黃酮類化合物廣泛存在于各種植物、水果、蔬菜中，具有良好的抗腫瘤、抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抑制胰島素抵抗、保護(hù)心腦血管作用，在臨床上運(yùn)用廣泛［25］。槲皮素是柴胡治療NAFLD 的主要有效成分之一，多項(xiàng)研究表明槲皮素可通過調(diào)控脂質(zhì)代謝相關(guān)基因、炎癥相關(guān)基因的表達(dá),減輕肝臟的氧化應(yīng)激，減少脂質(zhì)合成，減少肝臟脂質(zhì)蓄積，改善肝細(xì)胞脂肪變性；同時(shí)能改善胰島素抵抗［26-31］。在肝臟中，山柰酚可以上調(diào)PTEN、caspase-3、JAK1、Tyk2、STAT1/2、內(nèi)源性IFN-α 調(diào)節(jié)基因表達(dá)，下調(diào)線粒體膜電位、SOCS3、STAT3、miR-21、PI3K/AKT/mTOR 信號(hào)通路、磷酸肌醇 3-激酶 (PI3K)/AKT（蛋白激酶B）和人類 T 細(xì)胞白血病/淋巴瘤病毒-I（HTLV-I）信號(hào)通路來(lái)達(dá)到抗炎抗氧化，并抑制 NFκB 通路、下調(diào)相關(guān)標(biāo)志物蛋白質(zhì)的表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，從而達(dá)到抗癌目的［32-34］。

由KEGG 通路富集分析和PPI 互作圖可看出，AKT1、TNF、IL-6、IL-1β、TP53、PPARG、CASP3、JUN、VEGFA、PTGS2 與柴胡治療NAFLD 存在密切聯(lián)系，其主要通路涉及癌癥通路、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化、丙型肝炎、HIF-1信號(hào)通路、大腸癌、內(nèi)分泌抵抗等。研究顯示，AKT1 為一種存在大多數(shù)癌癥中過度表達(dá)的原癌基因，是多種人類惡性腫瘤的標(biāo)志，AKT 調(diào)控的通路是人類癌癥中最常被激活的信號(hào)通路［34-36］。TNF 是一種促炎因子，在炎癥反應(yīng)及多種細(xì)胞功能中起關(guān)鍵作用，如凋亡、增殖、線粒體動(dòng)力學(xué)等［37］。研究表明TNF 能抑制抗炎細(xì)胞因子脂聯(lián)素，減弱機(jī)體對(duì)胰島素敏感性，發(fā)生胰島素抵抗；而且肝臟纖維化程度與TNF 的表達(dá)水平成正比［38-39］。IL-6 既是細(xì)胞因子，又是免疫調(diào)節(jié)因子、脂肪因子，NAFLD 的發(fā)生發(fā)展與IL-6 和TNF-α 有密切關(guān)系，與胰島素抵抗呈正相關(guān)［40-41］。通過動(dòng)物及體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，山柰酚通過降低CASP3 蛋白的表達(dá)水平，減少氧化應(yīng)激導(dǎo)致的肝細(xì)胞凋亡通路的激活，抑制肝纖維化的發(fā)展，減慢或緩解NAFLD 的發(fā)生發(fā)展［42-43］。結(jié)合GO 富集分析進(jìn)一步研究柴胡治療NAFLD 的作用機(jī)制，分析結(jié)果表明柴胡通過對(duì)脂多糖的反應(yīng)、對(duì)無(wú)機(jī)物的反應(yīng)、凋亡信號(hào)通路、對(duì)異物刺激的反應(yīng)、血管形態(tài)發(fā)生、對(duì)氧氣水平的反應(yīng)、細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路、炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)、細(xì)胞因子產(chǎn)生的正調(diào)控等生物過程及DNA 結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、蛋白質(zhì)同二聚化活性、蛋白激酶結(jié)合、氧化還原酶活性、細(xì)胞因子受體結(jié)合、腫瘤壞死因子受體超家族結(jié)合等分子反應(yīng)上，進(jìn)而調(diào)控癌癥通路、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化和HIF-1 信號(hào)通路等發(fā)揮柴胡對(duì)肺癌細(xì)胞的抑制作用。HIF-1 信號(hào)通路中通過減少HIF-1信號(hào)通路中絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶、低氧誘導(dǎo)因子1α 蛋白表達(dá),上調(diào)血管內(nèi)皮因子A 蛋白表達(dá)而調(diào)節(jié)機(jī)體的細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)、血管生成、對(duì)氧氣水平的反應(yīng)等多種生物功能,達(dá)到保護(hù)肝臟的目的［44］。

綜上所述，本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)這一研究工具，初步分析了柴胡治療NAFLD 的作用機(jī)制，共涉及槲皮素、山柰酚、豆甾醇、異鼠李素等11 種有效成分，AKT1、TNF、IL-6、CASP3 等多靶點(diǎn)與癌癥途徑、HIF-1 信號(hào)通路等多通路參與的細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)的治療機(jī)制。本研究從藥理作用及作用機(jī)制方面闡述了柴胡治療NAFLD的科學(xué)依據(jù)，但藥物單一，需進(jìn)一步考慮中藥復(fù)方的復(fù)雜性及患者的個(gè)體差異性。