胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體、腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1在皮膚惡性黑色素瘤中的表達(dá)及臨床意義

慕文，盧濤，楊艷萍

西安國際醫(yī)學(xué)中心醫(yī)院整形科，西安 710100

黑色素瘤是由于黑色素細(xì)胞異常增生而形成的一種惡性腫瘤，多發(fā)生于皮膚及黏膜組織，可通過淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或播散[1]。皮膚惡性黑色素瘤是黑色素瘤中最常見的一種，屬于高度惡性腫瘤，據(jù)統(tǒng)計(jì)，皮膚惡性黑色素瘤占所有惡性腫瘤的3%，其發(fā)病率居皮膚惡性腫瘤的第3位[2]。皮膚惡性黑色素瘤易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移，且治療效果差、病死率高，因此早診斷對(duì)于降低病死率具有重要意義。相關(guān)研究指出，腫瘤的發(fā)生伴隨著相關(guān)基因和蛋白以及受體的異常表達(dá)[3]。基于此，本研究探討皮膚惡性黑色素瘤中胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體（insulin like growth factor 1 receptor，IGF1R）、腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白 1（metastasis associated 1，MTA1）的表達(dá)情況及臨床意義，旨在為皮膚惡性黑色素瘤的預(yù)防及臨床診療提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2019年9月至2020年9月于西安國際醫(yī)學(xué)中心醫(yī)院接受治療的皮膚惡性黑色素瘤患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查確診為皮膚惡性黑色素瘤；②未接受過相關(guān)治療；③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他系統(tǒng)病變或惡性腫瘤；②合并精神疾病等導(dǎo)致依從性差；③合并嚴(yán)重心、肺、肝功能不全；④妊娠期女性。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入72例皮膚惡性黑色素瘤患者作為觀察組，其中男42例，女30例；年齡35～74歲，平均（46.37±6.42）歲。另選取同期西安國際醫(yī)學(xué)中心醫(yī)院收治的68例色素痣患者為對(duì)照組，其中男35例，女33例；年齡17～68歲，平均（45.52±6.59）歲。兩組患者的性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組織化學(xué)染色方法及結(jié)果判定

收集兩組患者手術(shù)切除后的組織，然后進(jìn)行石蠟包埋和切片處理，使用二甲苯、乙醇進(jìn)行脫蠟、脫水處理后，將標(biāo)本浸泡于3%H2O2中20 min，封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性。高壓下采用枸櫞酸鹽進(jìn)行抗原修復(fù)，溫水清洗后采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗3次，每次5 min，然后加入正常羊血清以阻斷非特異性結(jié)合，置于37℃恒溫箱中30 min。加入兔抗人IGF1R多克隆抗體、山羊抗人MTA1多克隆抗體，4℃過夜，PBS清洗后，滴加生物素標(biāo)記的IGF1R、MTA1二抗，37℃孵育10 min，PBS清洗后，滴加過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，孵育10 min，二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、干燥后采用中性樹脂封片，以已知的IGF1R、MTA1陽性組織切片作為陽性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

根據(jù)陽性細(xì)胞百分比及染色強(qiáng)度判定IGF1R、MTA1的表達(dá)情況。陽性細(xì)胞百分比評(píng)分：0分，無陽性細(xì)胞；1分，陽性細(xì)胞百分比＜25%，2分，陽性細(xì)胞百分比為26%～50%；3分，陽性細(xì)胞百分比＞50%。染色強(qiáng)度評(píng)分：0分，無色；1分，淡黃色；2分，棕黃色；3分，棕褐色。陽性細(xì)胞百分比評(píng)分與染色強(qiáng)度評(píng)分相乘，≤3分為陰性，＞4分為陽性[4-5]。

1.3 隨訪方法

對(duì)所有皮膚惡性黑色素瘤患者隨訪1年，隨訪方式為住院、電話、微信隨訪，統(tǒng)計(jì)患者的1年生存情況。

1.4 觀察指標(biāo)

比較觀察組與對(duì)照組患者IGF1R、MTA1的表達(dá)情況，比較不同臨床特征皮膚惡性黑色素瘤患者IGF1R、MTA1的表達(dá)情況，分析皮膚惡性黑色素瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Logistic回歸模型分析皮膚惡性黑色素瘤患者預(yù)后的影響因素；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IGF1R、MTA1表達(dá)情況的比較

觀察組患者的IGF1R、MTA1陽性表達(dá)率均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=45.752、43.312，P＜0.01）。（表1）

表1 兩組患者的IGF1R、MTA1表達(dá)情況[n（%）]

2.2 不同臨床特征皮膚惡性黑色素瘤患者IGF1R、MTA1表達(dá)情況的比較

不同年齡、性別、腫瘤部位皮膚惡性黑色素瘤患者的IGF1R、MTA1陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移皮膚惡性黑色素瘤患者的IGF1R陽性表達(dá)率分別高于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.091、8.571，P＜0.05）；臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移皮膚惡性黑色素瘤患者的MTA1陽性表達(dá)率分別高于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.940、11.078，P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征皮膚惡性黑色素瘤患者的IGF1R、MTA1表達(dá)情況（n=72）

2.3 皮膚惡性黑色素瘤患者預(yù)后的影響因素分析

術(shù)后對(duì)皮膚惡性黑色素瘤患者進(jìn)行1年隨訪，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，死亡15例（20.83%）。以年齡、性別、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤部位、IGF1R表達(dá)情況、MTA1表達(dá)情況作為自變量，以患者預(yù)后作為因變量進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、IGF1R陽性、MTA1陽性均是影響皮膚惡性黑色素瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。（表3）

表3 皮膚惡性黑色素瘤患者預(yù)后的影響因素分析

3 討論

皮膚惡性黑色素瘤可分為肢端雀斑樣、淺表擴(kuò)散型、結(jié)節(jié)型以及惡性雀斑樣黑色素瘤4種類型，可發(fā)生于任何部位，以曝光區(qū)最為常見，其次是長(zhǎng)期受到外部刺激的部位，臨床多表現(xiàn)為出血、瘙癢、壓痛、潰瘍等癥狀[6-7]。皮膚惡性黑色素瘤具有發(fā)病隱匿、進(jìn)展迅速的特點(diǎn)，且易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，相比于其他惡性腫瘤預(yù)后差，患者病死率較高，近年來其發(fā)病率不斷升高[8]。由于中國大部分患者對(duì)于皮膚惡性黑色素瘤的了解甚少且不夠重視，導(dǎo)致多數(shù)患者在就診時(shí)病情已發(fā)展為晚期，手術(shù)治療效果欠佳，且預(yù)后較差。因此，尋找識(shí)別皮膚惡性黑色素瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的新型因子及預(yù)后預(yù)測(cè)標(biāo)志物是近年來的研究熱點(diǎn)[9]。

胰島素樣生長(zhǎng)因子1（insulin like growth factor 1，IGF1）屬于細(xì)胞增殖調(diào)控因子，與機(jī)體的細(xì)胞分化、組織修復(fù)等生理活動(dòng)密切相關(guān)，可抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，并參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，其對(duì)應(yīng)的受體為IGF1R，是由α和β兩個(gè)亞單位通過硫化鍵連接構(gòu)成的異四倍體[10-11]。相關(guān)研究指出，正常細(xì)胞的增殖分化和機(jī)體的正常發(fā)育均受IGF1R介導(dǎo)的各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)，當(dāng)其介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)失常時(shí)，機(jī)體就有可能形成腫瘤[12]。本研究結(jié)果顯示，皮膚惡性黑色素瘤患者的IGF1R陽性表達(dá)率明顯高于色素痣患者，且臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移皮膚惡性黑色素瘤患者的IGF1R陽性表達(dá)率分別高于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，提示IGF1R可能在皮膚惡性黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。進(jìn)一步Logistic回歸分析結(jié)果顯示，IGF1R陽性表達(dá)是皮膚惡性黑色素瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，因此推斷IGF1R可以作為評(píng)估皮膚惡性黑色素瘤患者預(yù)后的指標(biāo)之一。

MTA1是促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的一種蛋白，在正常組織中表達(dá)較低甚至無表達(dá)，而當(dāng)機(jī)體發(fā)生癌變時(shí)，MTA1會(huì)調(diào)控腫瘤細(xì)胞的分化功能，并與組蛋白去乙?；附Y(jié)合形成復(fù)合物，使腫瘤基因的轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)[13-14]。此外，MTA1還可與細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白結(jié)合，從而介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，皮膚惡性黑色素瘤患者的MTA1陽性表達(dá)率明顯高于色素痣患者，且臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移皮膚惡性黑色素瘤患者的MTA1陽性表達(dá)率分別高于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，說明MTA1在皮膚惡性黑色素瘤患者中呈高表達(dá)，且可能與皮膚惡性黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。Logistic回歸分析結(jié)果顯示，MTA1陽性是影響皮膚惡性黑色素瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。提示可通過檢測(cè)皮膚惡性黑色素瘤患者術(shù)后MTA1的表達(dá)情況判斷療效，評(píng)估患者預(yù)后，從而指導(dǎo)治療。

綜上所述，IGF1R、MTA1在皮膚惡性黑色素瘤中的陽性表達(dá)率較高，推測(cè)IGF1R、MTA1可能參與了皮膚惡性黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展過程，臨床上可通過檢測(cè)兩者的表達(dá)情況對(duì)患者的病情進(jìn)展及預(yù)后情況進(jìn)行評(píng)估。