程序性死亡受體配體1在乳腺癌組織中的表達(dá)及與患者臨床特征的關(guān)系

徐瑾，周霞，楊玉珍，李世鳳，余靜

信陽(yáng)市中心醫(yī)院1腫瘤外科，2放射治療科，3腫瘤內(nèi)科，河南 信陽(yáng) 464000

乳腺癌是一種發(fā)生于乳腺上皮組織且嚴(yán)重影響女性身心健康甚至危及生命的惡性腫瘤，其發(fā)病率和病死率在女性惡性腫瘤中均排名靠前[1]。目前乳腺癌常見(jiàn)的治療方案為手術(shù)、放化療、激素治療等[2]。盡管相關(guān)治療方法很多，但侵襲性乳腺癌患者的10年遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率超過(guò)50%，臨床治療效果不能令人滿意[3]。研究指出，乳腺癌具有一定的免疫原性，尤其是增殖性乳腺癌的免疫原性較高[4-5]。近年來(lái)乳腺癌的免疫治療發(fā)展迅速，通過(guò)靶向抑制乳腺癌免疫檢查點(diǎn)，能夠抑制腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，臨床效果較好[6-7]。研究表明，T細(xì)胞中程序性死亡受體配體1（programmed cell death 1 ligand 1，PDCD1LG1，也稱PD-L1）高表達(dá)能夠促使T細(xì)胞的免疫作用減弱或誘導(dǎo)其凋亡進(jìn)而引起免疫抑制，使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸[8-9]。另有研究指出，PD-L1表達(dá)情況與乳腺癌的病情進(jìn)展相關(guān)[10]。盡管有關(guān)PD-L1在乳腺癌中表達(dá)情況的研究很多，但是PD-L1表達(dá)與患者臨床特征（如分化程度、腫瘤分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）關(guān)系的研究結(jié)論不一致，PD-L1高表達(dá)與乳腺癌不良結(jié)局是否有關(guān)仍存在爭(zhēng)議[11-12]。本研究探討PD-L1在乳腺癌中的表達(dá)及與患者臨床特征的關(guān)系，旨在揭示PD-L1表達(dá)對(duì)乳腺癌發(fā)生發(fā)展的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年7月至2019年7月信陽(yáng)市中心醫(yī)院收治的乳腺癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲；②經(jīng)病理檢查確診為乳腺癌，根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟（Union for International Cancer Control，UICC）及美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)（American Joint Committee on Cancer，AJCC）乳腺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[13]，臨床分期為Ⅰ～Ⅲ期；③根據(jù)Bloom-Richardson分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[14]，組織學(xué)分級(jí)為Ⅰ～Ⅲ級(jí)；④術(shù)前無(wú)放療或化療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重免疫系統(tǒng)疾病；②非原發(fā)性乳腺癌；③合并其他嚴(yán)重器質(zhì)性疾病。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入70例患者，收集70例乳腺癌組織和70例癌旁組織（距乳腺癌病灶3 cm）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)PD-Ll的表達(dá)情況

制作乳腺癌組織和癌旁組織切片，切片厚度為2.5 μm，采用免疫組織化學(xué)染色法進(jìn)行染色。將組織切片置于3%H2O2中室溫浸泡12 min，采用檸檬酸鈉伴高溫促進(jìn)抗原修復(fù)，冷卻10 min后清洗，使用封閉液封閉乳腺癌和癌旁組織，采用鼠抗人PD-L1單克隆抗體（1∶100稀釋）4℃孵育過(guò)夜。清洗后37℃孵育二抗30 min。然后采用鏈霉親和素-生物素復(fù)合物孵育30 min，二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木素復(fù)染，然后脫水、封閉切片并觀察。

1.3 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定

PD-L1陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜，鏡下呈棕褐色。依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例及染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析并計(jì)分。染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強(qiáng)度評(píng)分與陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分乘積≤1分為陰性，反之為陽(yáng)性[15]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；采用非條件Logistic回歸模型進(jìn)行多因素分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織與癌旁組織中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)率的比較

乳腺癌組織中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)率為25.71%（18/70），明顯高于癌旁組織的8.57%（6/70），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.241，P=0.007）。

2.2 不同臨床特征乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1表達(dá)情況的比較

不同年齡、手術(shù)方式、乳腺癌家族史、絕經(jīng)情況乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)、TNM分期為Ⅲ期、腫瘤直徑＞2 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)率分別高于組織學(xué)分級(jí)為Ⅰ～Ⅱ級(jí)、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤直徑≤2 cm、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1表達(dá)情況的比較

2.3 乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1表達(dá)情況影響因素的多因素分析

多因素分析結(jié)果顯示，組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)、TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均是乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。（表2）

表2 乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1表達(dá)情況影響因素的多因素分析

3 討論

乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，其病死率也較高。乳腺癌的發(fā)病與遺傳因素密切相關(guān)[16-17]。乳腺癌的發(fā)病年齡主要集中于40～60歲，絕經(jīng)期前后女性乳腺癌的發(fā)病率較高[18-19]。乳腺癌早期通常無(wú)明顯臨床表現(xiàn)，發(fā)展至中晚期常出現(xiàn)乳房持續(xù)性疼痛和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，對(duì)患者的生活質(zhì)量和心理健康造成不良影響，而化療對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移的控制效果欠佳，因此深入研究乳腺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)機(jī)制對(duì)控制乳腺癌進(jìn)展及開(kāi)發(fā)高效新療法至關(guān)重要[20]。研究指出乳腺癌具有免疫原性，T細(xì)胞中PD-L1通過(guò)抑制T細(xì)胞發(fā)揮免疫作用或誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，從而引起免疫抑制，腫瘤細(xì)胞由于發(fā)生免疫逃逸可迅速增殖并發(fā)生轉(zhuǎn)移，加速病情進(jìn)展[21]。PD-L1來(lái)自CD28家族，通過(guò)在T細(xì)胞、自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞表面表達(dá)，調(diào)節(jié)其生長(zhǎng)和凋亡[22]。PD-L1高表達(dá)可能與乳腺癌轉(zhuǎn)移和進(jìn)展有關(guān)，現(xiàn)階段PD-L1抑制劑已用于乳腺癌患者的臨床治療中。

本研究結(jié)果顯示，PD-L1在乳腺癌患者乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織（P＜0.01）。正常細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡處于動(dòng)態(tài)平衡，達(dá)到一定的分裂次數(shù)就會(huì)出現(xiàn)衰老和凋亡，但腫瘤細(xì)胞卻可以無(wú)限制地復(fù)制、增殖、分化而不凋亡，主要原因是發(fā)生了免疫逃逸，即免疫反應(yīng)被削弱，使免疫系統(tǒng)不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的異常增殖和分化，從而使腫瘤細(xì)胞迅速增殖和轉(zhuǎn)移。PD-L1過(guò)表達(dá)能夠促進(jìn)免疫細(xì)胞凋亡，抑制免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的監(jiān)視作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和分化，因此乳腺癌組織中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織。

本研究結(jié)果顯示，組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)、TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)率分別高于組織學(xué)分級(jí)為Ⅰ～Ⅱ級(jí)、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?？赡苁且?yàn)镻D-L1過(guò)表達(dá)使腫瘤細(xì)胞失去了免疫系統(tǒng)的調(diào)控，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞迅速增殖和分化，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本研究中腫瘤直徑＞2 cm乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)率高于腫瘤直徑≤2 cm的患者，與王立東等[23]的研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果還顯示，乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)率與乳腺癌家族史無(wú)關(guān)，與既往研究顯示乳腺癌具有遺傳易感性的結(jié)論不一致，可能是因?yàn)楸狙芯恐芯哂腥橄侔┘易迨返幕颊弑壤^少[24]。多因素分析結(jié)果顯示，組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)、TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均是乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），與邱志敏[15]的研究結(jié)果相似，說(shuō)明PD-L1表達(dá)情況與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

綜上所述，PD-L1在乳腺癌組織中高表達(dá)，且與乳腺癌患者的臨床特征密切相關(guān)。