三棱-莪術組分配伍對子宮肌瘤大鼠白細胞介素的影響

張黎，徐秋霞，余成浩，李良文

子宮肌瘤雖然是一種良性腫瘤，但是病因復雜，除了目前普遍認為它是激素依賴性腫瘤，還與各種細胞因子、趨化因子、生長因子等有關，其中白介素IL-2、IL-6、IL-8、IL-11、IL-13、IL-17被證明與子宮肌瘤的發生發展有密切關系[1,2]，在本實驗中，通過檢測子宮肌瘤大鼠血清中白介素的表達水平，探討三棱-莪術組分配伍對子宮肌瘤大鼠相關炎癥因子的調控機制。

1 材料

1.1 動物

SD雌性大鼠，體重（180-220 g），由簡陽達碩動物科技有限公司提供，許可證號：SCXK（川）2013-24。

1.2 藥品試驗

用三棱飲片（四川皓博有限公司，批號：160301，），莪術油（陜西昊辰生物科技有限公司，批號：EZ150801），桂枝茯苓膠囊（江蘇康緣藥業股份有限公司，批號：15110611512，）。己烯雌酚（成都西亞化工股份有限公司，批號：K9212），黃體酮注射液（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號：150610），鹽酸腎上腺素注射液（遠大醫藥有限公司，批號：160401）。

用蒸餾水溶解桂枝茯苓膠囊中的內容物，配制0.09 g生藥/mL藥液。按照文獻[1]方法提取三棱總黃酮，并用蒸餾水配制成1 g生藥/mL藥液。乳化莪術油，配制成1 g生藥/mL的藥液。將以上三棱總黃酮與莪術揮發油1:1進行混合，分別配制三棱總黃酮-莪術揮發油組分配伍高、中、低組（66.7%、33.3%、16.7%）。

1.3 試劑與儀器

ELISA試劑盒，規格：96孔/盒，abcam生產，北京永輝生物科技有限公司進口分裝，移液槍，大龍興創實驗儀器（北京）有限公司生產，槍頭和EP管由美國Axygen公司生產。

2 方法

2.1 分組

大鼠隨機分為6個組，即空白組、模型組、陽藥組（桂枝茯苓膠囊）、三棱-莪術組分配伍（高、中、低）組。

2.2 造模及給藥

本實驗根據文獻[1]中的方法進行造模，大鼠適應性喂養后開始造模?？瞻捉M大鼠每周一、三、五下肢外側肌肉注射生理鹽水0.05 mL/只?？瞻捉M外，各組大鼠灌胃己烯雌酚藥液（1.35 mg﹒(kg﹒d）-1，隔日肌注黃體酮注射液（1.0 mg/只），每周給予隨機外界刺激，第4周開始，皮下注射鹽酸腎上腺素注射液0.9 mg﹒(kg﹒d）-1。造模后給予各組大鼠相應受試物，陽藥組給予桂枝茯苓膠囊藥液10 mL﹒kg-1，S-E高組、S-E中組和S-E低組分別以66.7%、33.3%、16.7%的S-E藥液10 mL﹒kg-1，共5周。

2.2 ELISA檢測

按試劑盒說明書步驟，用ELISA法檢測大鼠血清中ⅠL‐1α、ⅠL‐1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17、IL-18的濃度水平。

2.3 統計學處理

3 結果

與空白組比較，陽藥組、S-E中組的IL-1a明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.05）；與模型組比較，陽藥組ⅠL‐1α明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.05）（見表1-1）。

與空白組比較，陽藥組、S-E高組、S-E中組、S-E低組的IL-1b相近，無統計學意義（P＞0.05）；與模型組比較，陽藥組、S-E高組、S-E中組、S-E低組的IL-1b相近，差異無統計學意義（P＞0.05）（見表1-1）。

與空白組比較，陽藥組、S-E高組、S-E中組、S-E低組的IL-2明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.05）；與模型組比較，S-E低組的IL-2明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.05）（見表1-1）。

與空白組比較，S-E中組、S-E低組的IL-4明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.01）；與模型組比較，S-E中組、S-E低組的IL-4明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.05）（見表1-1）。

表1 -1 各組大鼠白細胞介素的比較（±S）

表1 -1 各組大鼠白細胞介素的比較（±S）

注：與空白組比較，* P<0.05，** P<0.01；與模型組比較，?P<0.05，?? P <0.01。

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與空白組比較，模型組、陽藥組、S-E中組、S-E低組的IL-5明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.05）；與模型組比較，各組間的IL-5相近，差異無統計學意義（P＞0.05）（見表1-2）。

與空白組比較，模型組、S-E高組、S-E中組、S-E低組的IL-6明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.01）；與模型組比較，各組間的IL-6相近，差異無統計學意義（P＞0.05）（見表1-2）。

與空白組比較，各組間的IL-7相近，差異無統計學意義（P＞0.05）；與模型組比較，各組間的IL-7相近，差異無統計學意義（P＞0.05）（見表1-2）。

與空白組比較，模型組、陽藥組、S-E高組、S-E中組、S-E低組的IL-10明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.05）；與模型組比較，S-E中組、S-E低組的IL-10明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.05）（見表1-2）。

表1 -2 各組大鼠白細胞介素的比較（±S）

表1 -2 各組大鼠白細胞介素的比較（±S）

注：與空白組對比，* P<0.05，** P<0.01；與模型組對比，?P<0.05，?? P <0.01。

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與空白組比較，S-E中組、S-E低組的IL-12明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.05）；與模型組比較，各組間的IL-12相近，差異無統計學意義（P＞0.05）（見表1-3）。

與空白組比較，S-E中組、S-E低組的IL-13明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.05）；與模型組比較，各組間的IL-13相近，差異無統計學意義（P＞0.05）（見表1-3）。

與空白組比較，S-E高組、S-E中組、S-E低組的IL-17明顯升高，，差異具有顯著統計學意義（P＜0.05）；與模型組比較，各組間的IL-17相近，差異無統計學意義（P＞0.05）（見表1-3）。

與空白組比較，S-E中組、S-E低組的IL-18明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.05）；與模型組比較，S-E中組的IL-18明顯升高，差異具有顯著統計學意義（P＜0.05）（見表1-3）。

表1 -3各組大鼠白細胞介素的比較（ ±S）

表1 -3各組大鼠白細胞介素的比較（ ±S）

注：與空白組對比，* P<0.05，** P<0.01；與模型組對比，?P<0.05，??P <0.01。

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4 討論

子宮肌瘤的病理除了與類固醇激素密切相關以外，與機體本身的免疫功能也有關聯[3]。其中，白介素細胞既能與血細胞共同作用完成造血，也能通過在白細胞之間傳遞信息，激活免疫細胞活性，達到調節免疫功能的作用。而是增強免疫細胞活性這一功能，被認為具有抗腫瘤的作用。在劉曾晶[4]等人對抗腫瘤中藥方劑的規律總結中，三棱、莪術常相須為用來治療腫瘤，能調節機體免疫，改善炎性微環境，抗血管新生，協同作用于腫瘤環境，抑制腫瘤侵襲和轉移[5]。莪術、三棱相須使用首見于《經驗良方》 ，張錫純常用其治療癥瘕、積聚的婦科疾病?！皻庵e為積，陽之所聚為聚，積者陰氣也，聚者陽氣也”，《難經》中認為子宮肌瘤就屬于癥積、瘕聚，癥積是為有形之邪，多在血分，瘕聚是為無形之邪，多在氣分，治療此病當以行氣活血消癥為主。三棱、莪術則為治療子宮肌瘤的常用藥對，在對三棱-莪術組分配伍的研究中，三棱-莪術組分配伍能通過多種途徑有效防治子宮肌瘤[6,7]。

子宮肌瘤與白介素細胞的相關研究報道比較少，子宮腫瘤的發展與某些炎性細胞因子的釋放有關，涉及到IL-1、IL-2、IL-6、IL-17等，IL-2有明顯的抗腫瘤的作用，IL-6同時具備促炎和抗炎的作用[1,8-10]，其中IL-17能促進子宮肌瘤纖維化。在本實驗中檢測到子宮肌瘤大鼠血清中，白細胞介素ⅠL‐1α、ⅠL‐1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17、IL-18的表達水平在模型組中有明顯的不同程度的升高，說明機體內有強烈的炎癥反應，導致其中的炎癥因子濃度增加，說明機體免疫功能發生改變與子宮肌瘤的發生有一定關系。用三棱-莪術組分配伍進行干預后，S-E（高、中、低）組中的白細胞介素又有進一步的升高，我們推測這可能因子宮肌瘤導致機體內有強烈的炎癥反應，三棱-莪術組分配伍具有激活免疫細胞活性的作用，提高相關免疫因子的表達水平，增強機體免疫能力。

本實驗結果提示子宮肌瘤的發生可能與血清中白介素細胞因子的表達改變有關，三棱-莪術組分配伍能有效治療子宮肌瘤可能通過改善相關白介素細胞因子，促進其分泌，調節免疫細胞，從而引發免疫應答，提高免疫功能，達到抗腫瘤的效果，從而發揮治療子宮肌瘤的作用。