宮頸癌患者病理特征與循環腫瘤細胞的關系

文/羅健

宮頸癌是生殖系統常見的惡性腫瘤，接受早期手術或放療等局部治療后可改善患者預后情況，然而仍有部分患者術后出現腫瘤的復發或遠處轉移，導致患者的預后死亡。此前臨床關于宮頸癌的預后研究主要集中在病因學、病理參數、病理資料等。隨著分子生物技術的不斷進展，越來越多的研究側重于探索相關分子生物學指標。宮頸癌患者的復發或轉移與腫瘤細胞淋巴或血行轉移密切相關。外周血循環腫瘤細胞（CTC）與癌細胞的轉移密切相關，多數CTC 釋放入血液循環后可被機體的免疫監視系統吞噬、殺滅，少數轉移能力較強，可發生免疫逃逸，定植于遠處器官，導致腫瘤復發或進展。故監測CTC 細胞對評估腫瘤的病情意義重大。CTC 具有檢測方便、穩定性高的特點，與傳統的穿刺活檢相比，創傷更輕。本文以CTC 為切入點，分析其與宮頸癌患者病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2019 年2 月至2021 年2 月收治的100 例宮頸癌患者為對象。納入標準：（1）確診為宮頸癌；（2）年齡18 周歲以上；（3）TNM 分期低于III 期；（4）入組前接受放化療治療者；（5）患者對本研究知情同意。排除標準：（1）發生遠處轉移者；（2）參與其他研究者；（3）存在手術禁忌證；（4）合并其他部位原發腫瘤者；（5）合并嚴重精神障礙性疾病者；（6）患有認知功能障礙或語言溝通能力障礙者。100 例患者中年齡28~60 歲，平均（38±6）歲，淋巴結轉移55 例，脈管瘤栓71 例，神經侵犯17 例，TNM 分期：0~I 期32 例，II~III 期68 例。

1.2 方法

采集空腹靜脈血5 mL，配置紅細胞裂解液裂解紅細胞，將剩余細胞懸于PBS 液（含4%）5 min。轉移細胞懸液至過濾管，真空泵抽濾。用三色RNA 原位雜交技術檢測，條件：42℃下雜交2 h，未結合的探針通過1000 μL 洗滌液緩慢洗滌3 次。后加入100 μL 預擴增溶液，42℃下20 min。待膜冷卻后，用1000μL 的洗滌液洗滌3 次，再用100 μL 擴增液孵育，加入Alexa Fluor 594/488/647 三種探針，后在42℃孵育20 min，洗滌，利用DAPI 染色剩余細胞5 min，利用熒光顯微鏡觀察，進行CTC 計數。血液中標本CTC 數≥2 個記為CTC 陽性。檢測糖類抗原125（CA125）、糖類抗原153（CA153）、癌胚抗原（CEA）（酶聯免疫法）。制作石蠟標本，按照常規免疫組織化學流程，用SP 法檢測，加入一抗，以磷酸鹽緩沖液（PBS）為陰性對照，加二抗過夜。二氨基聯苯胺（DAB）顯色，顯微鏡下觀察，Ki-67 陽性指數≤14%為低復發，≥15%為高復發。

1.3 統計學方法

數據分析采用SPSS 21.0 軟件。計數資料以例數（%）表示，采用x檢驗。計量資料以x ±s 表示，采用t 檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CTC 檢測結果

100 例宮頸癌患者中，CTC 陽性率為81.00%（81/100），陰性率為19.00%（19/100）。

2.2 CTC 表達情況與患者臨床特征的關系

CTC 陽性組與陰性組在淋巴結轉移、脈管瘤栓、TNM 分期、T 分期、N 分期方面比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 CTC 表達情況與患者臨床特征關系n（%）

2.3 2 組患者腫瘤標志物水平

CTC 陽性組CEA、CA153 水平高于CTC 陰性組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組腫瘤標志物水平比較（x±s）

2.4 CTC 與CEA、CA153 及Ki-67 蛋白的相關性

Spearman 相關性分析顯示，CTC 與CEA、CA153 呈正相關（rs=0.517、0.492，P＜0.001）。關聯性卡方分析顯示，CTC 與Ki-67 蛋白無相關性（x=0.510，P=0.471）。見表3。

表3 CTC 與Ki -67 蛋白表達相關性

3 討論

腫瘤細胞的轉移是導致患者復發、預后死亡的主要元兇，CTC 在癌細胞轉移過程發揮重要作用。國外進行的一項大樣本研究發現，在1679 例早期乳腺癌患者中約23%的患者CTC 陽性，CTC 陽性患者總生存率為75%，低于陰性患者。本文探究CTC 與宮頸癌患者的病理特征關系，結果顯示CTC 陽性宮頸癌患者T期、N期及II~III 期占比高于CTC 陰性，提示CTC 與宮頸癌患者的病理分期存在聯系，隨病理分期的增加其陽性表達越高。同時筆者發現CTC 陽性患者合并淋巴結轉移、脈管瘤栓的人數高于陰性組，提示CTC 的表達情況與宮頸癌患者預后關系密切。CTC在血液中單獨存在時，隨血液循環可被免疫系統吞噬，合并脈管瘤栓后可對CTC 形成保護，促進CTC 向遠處轉移。本文結果顯示CTC 與年齡、分化程度、神經侵犯等無明顯相關，其原因可能為CTC 反映腫瘤的轉移性質，而上述特征與腫瘤細胞轉移無緊密關系。

CEA、CA125、CA153 均為常規的腫瘤標志物，文獻指出CEA、CA153 表達情況與腫瘤的病理分析關系密切，腫瘤分期增加，其表達水平增加。鄭星等課題組發現CEA、CA153 與乳腺癌患者骨轉移存在聯系。本文結果顯示CTC 與CEA、CA153 呈正相關，證實CTC 與宮頸癌患者的轉移關系密切。Ki-67 是宮頸癌常見的分析指標，其為增殖細胞核抗原，細胞分析學研究發現Ki-67 mRNA 在細胞周期中周期性變化，在S 期達峰值，可對細胞DNA 的復制造成阻礙，監測其表達情況可評價腫瘤細胞增殖狀態。Ki-67 表達升高提示腫瘤細胞轉移活性增加。此外有研究指出，Ki-67 可用于預測輔助化療患者的預后情況，術后Ki-67表達升高患者接受化療后獲益較多。目前臨床關于Ki-67 蛋白表達情況與CTC 之間的關系尚無明確定論，部分學者認為Ki-67 高表達與腫瘤類型存在聯系，然而主流觀點認為CTC 與Ki-67 蛋白的表達情況無明顯相關。本文結果顯示CTC 與Ki-67 蛋白表達無明顯相關，與上述描述相符。

綜上所述，CTC 與宮頸癌患者病理分期、淋巴結轉移、CEA、CA153 等存在聯系，其陽性表達升高，提示腫瘤病情進展或轉移。鑒于本文樣本量較少并且為單中心研究，CTC 與宮頸癌患者臨床病理特征的關系尚需進一步驗證。